Koja je svrha korištenja okruženja diferencijalne dijagnostike? Primjeri i kako rade

Diferencijalni dijagnostički mediji posebne su smjese hranjivih tvari koje se koriste za određivanje vrsta mikroba i proučavanje njihovih svojstava. Kada bakterije rastu na diferencijalno-dijagnostičkim medijima, dolazi do kemijskih procesa zbog prisutnosti različitih enzima u mikrobnoj stanici. Neki od njih mogu razgraditi bjelančevine, drugi su ugljikohidrati, a treći mogu izazvati reakcije oksidacije i redukcije itd. Zbog djelovanja enzima u diferencijalno-dijagnostičkom okruženju događaju se odgovarajuće promjene. Diferencijalna dijagnostička okruženja mogu se podijeliti u četiri glavne skupine.

• 1. Mediji koji sadrže bjelančevine i otkrivaju sposobnost mikroba da razgrađuju bjelančevine (proteolitička svojstva): mesno-peptonski želatinski "stupac", valjani konjski ili goveđi serum, mlijeko, krvni agar. Kada se bakterija inokulira probijanjem u mesno-peptonskoj želatini, uočava se ukapljivanje medija u slučaju razgradnje proteina. Kada se inokulira na medij koaguliranim serumom, razgradnja proteina određuje se razrjeđivanjem medija i stvaranjem udubljenja na njegovoj površini. Razgradnja mlijeka od strane mikroba otkriva se bistrenjem ili otapanjem prvotno usirenog mlijeka. Prisutnost hemolitičke aktivnosti ispitivane kulture provjerava se inokulacijom u Petrijevu zdjelicu na posebnom krvnom agaru. Kao rezultat uništavanja eritrocita oko kolonija (na primjer, hemolitički streptokok ili stafilokok) nastaju zone čišćenja.
• 2. Mediji za otkrivanje sposobnosti mikroba da razgrađuju ugljikohidrate i visoko atomske alkohole (Endo srijeda, Levinovo okruženje, Russellino okruženje, Drygalsky-ovo - Konradijevo okruženje, Rapoport-Weintraubovo okruženje, Šustovovo okruženje). Da bi se identificirala ta svojstva mikroorganizama, koristi se i "šarolika" serija, tj. Niz epruveta koje sadrže hranjive podloge, uključujući razne ugljikohidrate, polihidrične alkohole i indikator. Kao pokazatelji koriste se lakmusova tinktura ili bromotimol plava. Razgradnja bilo kojeg ugljikohidrata s tvorbom kiseline otkriva se promjenom boje indikatora, stvaranjem plina - punjenjem plinom i pojavom posebnog staklenog plovka u tekućem mediju. Ili upotrijebite polutekući Gissa medij (vidi) s 0,5% agara s odgovarajućim šećerima i Andradeovim pokazateljem. Nakon sjetve mikroba na te medije, stvaranje kiseline otkriva se crvenilom medija, a stvaranje plina pojavom njegovih mjehurića u agaru ili pucanjem i pomicanjem stupca agara prema gore. U diferencijalno dijagnostički medij druge skupine spada i škrobni agar koji služi za određivanje sposobnosti mikroba da razgrađuju škrob, Clarkov medij itd.
• 3. Mediji na kojima se otkriva sposobnost mikroba da obezboje boje dodane u juhu: metilen plavo, tionin, lakmus, indigo karmin, neutralno crveno ili drugi (Rothbergerov medij, medij Omelyansky). U treću skupinu također spadaju mediji s nitratima koji služe za određivanje sposobnosti mikroba da reduciraju soli dušične kiseline (nitrate) u soli dušične kiseline (nitrite), a zatim u amonijak ili slobodni dušik.
• 4. Mediji koji otkrivaju sposobnost mikroba da asimiliraju tvari koje ne asimiliraju drugi mikrobi, na primjer, medij s natrijevim citratom (Simons citrat agar) za razlikovanje E. coli, koja je lišena sposobnosti asimilacije ovog medija, od drugih bakterija crijevne skupine ili medij s natrijevom oleinskom kiselinom za razlikovanje bacila difterije od lažne difterije i difterioda (agarEngering).

Diferencijalni dijagnostički mediji također uključuju medije za diferencijaciju anaeroba, teluritne medije za diferencijaciju difterijskih bakterija, medije s ureom, alkalne podloge (Dieudonneagar) za uzgoj Vibrio cholerae itd.

Srijeda Endo. Sastoji se od MPA s dodatkom 1% laktoze i osnovnog fuksina obezbojenog natrijevim sulfitom (indikator). Endo medij ima blago ružičastu boju. Koristi se u dijagnozi crijevnih infekcija za razlikovanje bakterija koje razgrađuju laktozu da bi stvorile kisele proizvode od bakterija koje nemaju tu sposobnost. Kolonije mikroba pozitivnih na laktozu (Escherichia coli) su crvene zbog smanjenja fuchsina. Kolonije mikroorganizama negativnih na laktozu - Salmonella, Shigella i drugi - su bezbojne.

Diferencijalna dijagnostička okruženja uključuju kratki i prošireni šareni red. Sastoji se od medija s ugljikohidratima (Giss media), MPB, mlijeka, mezopatamije želatine.

Giss mediji pripremaju se na osnovi peptonske vode u koju se dodaju kemijski čisti mono-, di- ili polisaharidi (glukoza, laktoza, škrob itd.).

Medijumu se dodaje indikator za otkrivanje pH pomaka kao rezultat stvaranja kiseline i razgradnje ugljikohidrata. Dubljom razgradnjom ugljikohidrata nastaju plinoviti proizvodi (CO 2, CH 4 itd.), Koji se hvataju pomoću plovaka - malih epruveta, spuštenih u medij naopako. Mediji s ugljikohidratima također se mogu pripremiti gusti - s dodatkom 0,5-1% agar-agara. Tada se plin stvara u obliku mjehurića (puknuća) u stupcu medija.

Na BCH, koji je dio šarenog niza, pronalaze proizvode nastale razgradnjom aminokiselina i peptona (indol, sumporovodik). Vodikov sulfid se otkriva stavljanjem trake filter papira natopljene otopinom olovnog acetata u BCH nakon inokulacije kulture. Kad se aminokiseline koje sadrže sumpor podijele, oslobađa se sumporovodik, papir postaje crn zbog stvaranja olovnog sulfida. Složeni pokazatelj može se koristiti za određivanje indola. Indol nastaje razgradnjom triptofana i može se otkriti dodavanjem ovog pokazatelja u kulturu uzgajanu na BCH. U prisutnosti indola, MPB postaje zelen ili plav.

U praktičnim bakteriološkim laboratorijima mikro i ekspresne metode široko se koriste za približno proučavanje biokemijskih svojstava mikroorganizama. U tu svrhu postoji mnogo ispitnih sustava. Najčešće korišteni sustav indikatorskih vrijednosnih papira (NIB). NIB su diskovi s filter papirom impregnirani otopinama šećera ili drugih supstrata u kombinaciji s indikatorima. Takvi su diskovi uronjeni u epruvetu s kulturom uzgojenom u tekućem hranjivom mediju. Promjena boje diska sa supstratom koristi se za procjenu rada enzima. Sustavi za mikrotestove za proučavanje identifikacije Enterobacteriaceae predstavljeni su jednokratnim plastičnim spremnicima s medijima koji sadrže razne podloge, uz dodatak indikatora. Sijanje čiste kulture mikroorganizama u takve testne sustave omogućuje vam brzo prepoznavanje sposobnosti bakterija da iskoriste citrate, glukozu, saharozu, oslobađaju amonijak, indol, razgrađuju ureu, lizin, fenilalanin itd.

Suha okruženja. Hranjivi agar, kao i glavni diferencijalno-dijagnostički medij, trenutno se proizvode u obliku suhih pripravaka koji sadrže sve potrebne komponente. Takvim prašcima trebate samo dodati vodu i kuhati, a zatim, nakon ulijevanja, sterilizirati.

Diferencijalni dijagnostički mediji posebne su smjese hranjivih tvari koje se koriste za određivanje vrsta mikroba i proučavanje njihovih svojstava. Tijekom rasta bakterija na diferencijalno dijagnostičkim medijima, kemijski procesi se javljaju zbog prisutnosti različitih mikrobnih stanica. Neki od njih mogu se razgraditi, drugi -, a drugi - izazvati reakcije oksidacije i redukcije itd. Zahvaljujući djelovanju enzima u diferencijalno-dijagnostičkom okruženju, događaju se odgovarajuće promjene.

Diferencijalna dijagnostička okruženja mogu se podijeliti u četiri glavne skupine.

Lik: 1-6. Razni oblici razgradnje želatine. Lik: 7 - 9. Tekući medij s ugljikohidratima i Andrade indikatorom: sl. 7 - nema fermentacije; sl. 8 - vrenje s stvaranjem kiseline; sl. 9 - fermentacija s stvaranjem kiseline i plina. Lik: 10 - 12. Polutekući medij s indikatorom ugljikohidrata i BP (iz suhog medija za kulturu): sl. 10 - nema fermentacije; sl. 11 - fermentacija s tvorbom kiseline; sl. 12 - fermentacija s stvaranjem kiseline i plina. Lik: 13-15. Umjetni lakmusov serum prema Seitzu: riža. 13 - nema fermentacije; sl. 14 - fermentacija s stvaranjem kiseline; sl. 15 - fermentacija koja nastaje. Lik: 16 i 17. Mlijeko s metilen plavim: sl. 16 - nema smanjenja; sl. 17 -smanjenje. Lik: 18. i 19. srijeda Simons: sl. 18 - nedostatak asimilacije citrata; sl. 19 - asimilacija citrata. Lik: 20 - 24. Lakmus mlijeko: riža. 20 - nema fermentacije; sl. 21 - vrenje s stvaranjem kiseline; sl. 22 - vrenje s stvaranjem lužine; sl. 23 - peptonizacija; sl. 24 - smanjenje. Lik: 25. Ukapljivanje sklupčanih (u propuštenom svjetlu). Lik: 26. Hemoliza na krvnom agaru (u propuštenom svjetlu). Lik: 27. Krvna okolina s kalijumovim teluritom.

1. Mediji koji sadrže proteine \u200b\u200bi otkrivaju sposobnost mikroba da razgrađuju proteine \u200b\u200b(proteolitička svojstva): meso-peptonski "stupac", valjani konjski ili goveđi serum, mlijeko, krvni agar. Kada se bakterije inokuliraju punkcijom u mesno-peptonskoj želatini, "stupcu" u slučaju razgradnje proteina, primjećuje se razrjeđivanje medija. Kada se inokulira na medij koaguliranim serumom, razgradnja proteina određuje se razrjeđivanjem medija i stvaranjem udubljenja na njegovoj površini. Razgradnja mlijeka od strane mikroba otkriva se bistrenjem ili otapanjem prvotno usirenog mlijeka. Prisutnost hemolitičke aktivnosti ispitivane kulture provjerava se sijanjem na poseban krvni agar. Kao rezultat uništavanja oko kolonija (na primjer hemolitičkih ili) nastaju zone čišćenja.

2. Mediji za otkrivanje sposobnosti mikroba da razgrađuju ugljikohidrate i visokoatomske (Endo srijeda, Levinova srijeda, Russellova srijeda, Drygalsky - Konradijeva okolina, Rapoport - Weintraubova okolina, Shustovoy srijeda). Da bi se identificirala ta svojstva mikroorganizama, koristi se i "šarolika" serija, odnosno niz epruveta koje sadrže razne ugljikohidrate, polihidrične alkohole i indikator. Kao pokazatelji koriste se lakmusova tinktura ili bromotimol plava. Razgradnja bilo kojeg ugljikohidrata s tvorbom kiseline otkriva se promjenom boje indikatora, stvaranjem plina - punjenjem plinom i pojavom posebnog staklenog plovka u tekućem mediju. Ili upotrijebite polutekući Gissa medij (vidi) s 0,5% agara s odgovarajućim šećerima i Andradeovim pokazateljem. Nakon sjetve mikroba na te medije, stvaranje kiseline otkriva se crvenilom medija, a stvaranje plina pojavom njegovih mjehurića u agaru ili pucanjem i pomicanjem stupca agara prema gore. U diferencijalno dijagnostički medij druge skupine spada i škrobni agar koji služi za određivanje sposobnosti mikroba da razgrađuju škrob, Clarkov medij itd.

3. Mediji na kojima se otkriva sposobnost mikroba da obezboje boje dodane u juhu: metilen plavo, tionin, lakmus, neutralno crveno ili drugi (Rothbergerov medij, medij Omelyansky). U treću skupinu također spadaju mediji s nitratima koji služe za određivanje sposobnosti mikroba da reduciraju soli dušične kiseline (nitrate) u soli dušične kiseline (nitrite), a zatim u amonijak ili slobodni dušik.

4. Mediji koji otkrivaju sposobnost mikroba da asimiliraju tvari koje ne asimiliraju drugi mikrobi, na primjer, medij s natrijevim citratom (Simons citrat agar) za razlikovanje E. coli, koja je lišena sposobnosti asimilacije ovog medija, od drugih bakterija crijevne skupine ili medij s natrijevom oleinskom kiselinom za razlikovanje bacila difterije od lažne difterije i difterioda (engering agar).

Diferencijalni dijagnostički mediji također uključuju medije za diferencijaciju anaeroba, teluritne medije za diferencijaciju difterijskih bakterija, medije s ureom, alkalne podloge (Dieudonne agar) za uzgoj Vibrio cholerae, itd. Vidi također Identifikacija mikroba.

DIFERENCIJALNI DIJAGNOSTIČKI MEDIJI

mediji za diferencijalnu dijagnostiku, posebni hranjivi mediji koji se koriste za identifikaciju mikroorganizama s selektivnom biokemijskom aktivnošću u odnosu na određene tvari. U procesu razvoja mikrobi uz pomoć enzima razgrađuju određene tvari koje čine okoliš, što se uspostavlja promjenom u okolišu.

Brojni patogeni mikroorganizmi razgrađuju ugljikohidrate, polihidrične alkohole stvaranjem kiselina i plinova (ugljični dioksid, vodik, metan), što ukazuje da pripadaju određenoj skupini ili vrsti bakterija. Da biste utvrdili ta svojstva, pripremite tekućinu ili polutekućinu Dd. iz. s glukozom, laktozom, saharozom, manozom i ostalim ugljikohidratima, polihidričnim alkoholima (šarenilo), s pokazateljima (Andrade, Gissa), medij s mlijekom. Enzimska sposobnost mikroba određena je pojavom plina ili promjenom boje indikatora. Intenzitet stvaranja kiseline iz glukoze određuje se na Clarkovom mediju, stvaranje acetilmetilkarbonala - pomoću Voges-Proskauerove reakcije, amilolitička sposobnost mikroba - na škrobnom agaru. Proteolitička svojstva mikroba određuju se na podlogama koje ne sadrže glukozu i glicerin - mesno-peptonska želatina, koagulirani konjski serum, mliječni agar. Meso-peptonska želatina inokulira se bockanjem na dno epruvete, inkubira na t 20-22 ° C, a zatim odredite stupanj ukapljivanja želatine. Hemolitička sposobnost mikroba utvrđuje se nanošenjem na krvni agar ili krvnu juhu. Koristite za određivanje redukcijske aktivnosti mikroba Dd. iz. s bojama (, lakmus, indokarmin, tionin itd.). Kako mikrobi rastu, dolazi do potpune ili djelomične promjene boje ili promjene boje. Također koriste medije s nitratima, u kojima se pod utjecajem enzima određenih mikroba nitrati reduciraju u nitrite, a zatim u amonijak ili slobodni dušik.

Veterinarski enciklopedijski rječnik. - M.: "Sovjetska enciklopedija". Glavni urednik V.P. Šiškov. 1981 .

Pogledajte što je "DIFERENCIJALNO-DIJAGNOSTIČKI MEDIJ" u drugim rječnicima:

Diferencijalna dijagnostička okruženja - posebne smjese hranjivih sastojaka (vidi Podloga za kulturu), na kojima se uzgajaju mikroorganizmi kako bi se utvrdile njihove vrste. D. d. Sa. uključuju proteinske medije koji se koriste za određivanje hemolitičkih i ... ...

Hranjive podloge, supstrati koji se koriste za uzgoj u umjetnim uvjetima mikroorganizama i kultura tkiva. U mikrobiološkoj praksi S. predmeta se široko koristi za laboratorijsku dijagnozu zaraznih bolesti, za ... ... Veterinarski enciklopedijski rječnik

Mediji za bakteriološku kulturu - tekući, polutekući ili gusti supstrati koji se koriste za uzgoj mikroorganizama u laboratorijskim ili industrijskim uvjetima. Koriste se za izolaciju bakterija, gljivica i praživotinja najjednostavnijih biogenih ili abiogenih objekata, za ... ... Rječnik mikrobiologije

Kulturni mediji - tekući ili kruti mediji koji se koriste za uzgoj bakterija, kvasca, mikroskopskih gljivica, algi, praživotinja, virusa i kultura biljnih ili životinjskih stanica u laboratorijskim ili industrijskim uvjetima. Sintetički P. sa. ... ... Velika sovjetska enciklopedija

Gissa srijeda - (Ph. N. Hiss, 1868. 1913, američki bakteriolog; sinonim: šareni red, obojeni red) tekući ili polutekući diferencijalno dijagnostički hranjivi mediji namijenjeni određivanju i razlikovanju bakterija prema njihovoj sposobnosti razgradnje različitih ... ... Veliki medicinski rječnik

McConkey srijeda - (A. Ma Conkey, 1861. 1931., engleski bakteriolog) selektivni diferencijalno-dijagnostički hranjivi mediji za izolaciju bakterija iz obitelji. Enterobacteriaceae, na pr. Escherichia coli, sadrži natrij tauroholnu kiselinu i laktozu ... Veliki medicinski rječnik

Hranjive tvari - supstrati koji se sastoje od komponenata koje pružaju potrebne uvjete za uzgoj mikroorganizama ili nakupljanje njihovih metaboličkih proizvoda. Mediji za kulturu razlikuju se po namjeni, konzistenciji i sastavu. Prema njihovoj namjeni ... ... Medicinska enciklopedija

Mikrobiološka dijagnostika - na temelju identifikacije uzročnika ili identifikacije imunološkog odgovora pacijenta na njega. Početna faza M. d. je odabir materijala i transport uzoraka u laboratorij. Vrsta materijala za istraživanje određena je karakteristikama ... ... Medicinska enciklopedija

Lijek - I Medicina Medicina je sustav znanstvenih spoznaja i praktičnih aktivnosti čiji su ciljevi jačanje i održavanje zdravlja, produljenje života ljudi, prevencija i liječenje ljudskih bolesti. Da bi izvršio ove zadatke, M. proučava strukturu i ... ... Medicinska enciklopedija

Anaerobni organizmi - Aerobne i anaerobne bakterije preliminarno su identificirane u tekućem mediju za kulturu prema gradijentu koncentracije O2: 1. Obvezne aerobne bakterije (kojima je potreban kisik) uglavnom se skupljaju u gornjem dijelu epruvete kako bi upile ... ... Wikipedia

Koriste se za razlikovanje nekih vrsta bakterija od drugih na temelju njihove enzimske aktivnosti okružja diferencijalne dijagnostike ... Na primjer, okruženje Giss, okruženje Endo, okruženje Levin, okruženje Ploskirev, okruženje Olkenitsky. Media Endo, Levin, Ploskirev u Petrijevim zdjelicama koriste se za razlikovanje bakterija crijevne skupine prema njihovoj sposobnosti da fermentiraju laktozu. Ti mediji sadrže hranjivi agar, laktozu i indikator koji mijenja boju u kiselom mediju (pH indikator). Ako se bakterije koje fermentiraju laktozu, poput E. coli, sije u takvom okruženju, tada nastaje kiselina kao rezultat fermentacije laktoze, a indikator će promijeniti boju u kiselom okruženju. Stoga će kolonije Escherichia coli na takvim podlogama biti obojene prema boji indikatora: na Endoovim i Ploskirevovim podlogama - crvenom bojom, na Levinovoj podlozi - crnom i plavom. Ako su ti mediji zasijani bakterijama koje ne fermentiraju laktozu, na primjer tifusnim ili dizenterijskim štapićima, tada se ne stvara kiselina, reakcija medija ostat će blago alkalna i boja indikatora se neće mijenjati. Stoga će kolonije bakterija koje ne fermentiraju laktozu biti bezbojne na tim podlogama. Ploskirev medij također se može pripisati izbornim podlogama za izolaciju dizenterijskih štapića, budući da ovaj medij sadrži žučne soli koje inhibiraju rast E. coli i briljantno zelenu boju koja inhibira rast mikroflore kokalnog zraka. Bizmut-sulfitni agar je diferencijalno dijagnostički medij koji se koristi uglavnom u dijagnostici salmoneloze. Rastom salmonele bizmut se obnavlja iz njegovih soli i kolonije salmonele postaju crne. Diferencijalno-dijagnostički mediji Gissa ("šarene" serije) pripremaju se na bazi tekućeg medija (peptonska voda) ili polutekućeg mesno-peptonskog agara. Sadrže bilo koji ugljikohidrat ili polihidrični alkohol (laktozu, glukozu, manitol, saharozu) i pokazatelj koji mijenja boju u kiselom okruženju. Stakleni plovak stavlja se u epruvetu s tekućim Giss medijem. Ako se na Giss medij posije mikrob koji fermentira ovaj ugljikohidrat stvaranjem kiseline i plina, odnosno do konačnih proizvoda, tada će medij promijeniti boju, u polutekućem mediju pojavit će se mjehurići i pukotine debljina agara, u tekućem mediju - plinski mjehur u plovku. Kada se ugljikohidrat fermentira samo do intermedijarnih proizvoda (do kiseline), dolazi samo do promjene boje medija. Također se koriste kombinirani mediji koji ne sadrže jedan, već dva ili tri ugljikohidrata, na primjer Olkenitskyjev medij - agar s tri šećera s ureom. Jedna epruveta Olkenitskog medija zamjenjuje agarnu kosu i Giss medije laktozom, saharozom i glukozom. Srijeda se priprema na osnovi ne baš gustog MPA. Sadrži laktozu (1%), saharozu (1%), glukozu (0,1%), ureu, Mohrovu sol (željezni sulfat), natrijev hiposulfit i indikator. Nakon sterilizacije, medij se u spljoštenom obliku izlije u epruvetu tako da se dobiju stupac i kosi dio. Sjetva se vrši potezom po zakošenom dijelu i ubodom u kolonu. Kad fermentirate više ugljikohidrata (laktoza, saharoza ili oba šećera), boja cijelog medija se mijenja; kada se fermentira samo glukoza, boja pločice se mijenja, a kosi dio ostaje nepromijenjen. Stvaranje plina označava prisutnost mjehurića u stupcu agara. Kulture koje razgrađuju ureu stvarajući amonijak daju alkalnu reakciju. U tom se slučaju kiselina koja nastaje tijekom fermentacije ugljikohidrata neutralizira, a boja medija se ne mijenja. Razgradnja uree karakteristična je za proteine \u200b\u200bi neke E. coli. Patogene enterobakterije ne razgrađuju ureu. Dodatak Mohrove soli i hiposulfita također nam omogućava proučavanje sposobnosti bakterija da tvore sumporovodik zacrnjenjem u stupcu agara kao rezultat pretvorbe željeznog sulfata u crni sulfid.

Za ekspresnu metodu određivanja enzimske aktivnosti mikroorganizama koriste se mikrotestni sustavi i sustav indikatorskih papira (NIB). Sustav mikrotesta je prozirna polistirenska posuda koja se sastoji od nekoliko stanica. Stanice sadrže osušeni medij s jamama s ugljikohidratima i pH pokazateljima. U svaku se stanicu cijepi suspenzija kulture bakterija određene gustoće. Tjelesno se ulijeva u kontrolne stanice. riješenje. Rezultat se uzima u obzir nakon 3-4 sata inkubacije u termostatu prema promjeni boje indikatora. Sustavi indikatorskih papira (NIB) za identifikaciju porodice Enterobacteriaceae su diskovi ili trake kromatografskog papira prekriveni zaštitnim filmom od polivinil alkohol i koji sadrži određenu podlogu i indikator. U epruvetu s fiziološkom otopinom ili puferskom otopinom uvodi se puna petlja ispitne kulture ili kap guste mikrobne suspenzije, koja se zatim stavlja u diskove spaljenom pincetom. Kultura bakterija se ne dodaje u kontrolne cijevi. Rezultat se uzima u obzir promjenom boje indikatora. Da bi se odredio sumporovodik, disk se stavlja u epruvetu na površinu MPA cijepljenog bockanjem, što omogućuje istovremeno određivanje pokretljivosti. U svim epruvetama uzimaju se u obzir preliminarni rezultat istog dana i konačni rezultat nakon osamnaest do dvadeset i četiri sata. Aktivnost oksidaze određuje se mljevenjem kulture na indikatorski papir nakon 30-60 sekundi.

Izolacija čistih kultura aerobnih i anaerobnih bakterija. Navedi principe i metode dobivanja izoliranih kolonija aeroba. Metode za izolaciju čistih kultura anaeroba. Opiši Weinbergovu metodu po danima.

Uzgoj i izolacija čistih kultura aerobnih bakterija

Za uzgoj mikroorganizama potrebni su određeni uvjeti: temperatura, aerobni ili anaerobni uvjeti.

Temperatura bi trebala biti optimalna za vrstu. Većina patogenih bakterija uspijeva na 37 ° C. Međutim, za neke vrste optimalna je niža temperatura zbog osobitosti njihove ekologije. Dakle, za bacil kuge, čije su prirodno stanište glodavci tijekom hibernacije, optimalna temperatura je 28 ° C, kao i za leptospiru, za bacil botulizma - 28 ° C-35 ° C.

Uz optimalnu temperaturu, za uzgoj mikroorganizama potreban je aerobni ili anaerobni okoliš, ovisno o vrsti.

Da bi se proučavala morfologija, kulturološka, \u200b\u200bbiokemijska i druga svojstva mikroba, potrebno je dobiti čistu kulturu. Obično se kultura mikroba naziva njihovim nakupljanjem na hranjivom mediju u obliku zamućenja, rasta pri dnu (zidu) ili filma na površini tekućeg medija ili kolonija na gustom mediju. Jedna kolonija nastaje od jedne mikrobne stanice. Čista kultura je kultura jedne vrste mikroba dobivena iz jedne kolonije. Određeni poznati sojevi mikroba koriste se u laboratorijima za razne studije. Soj je čista kultura mikroba dobivena iz određenog izvora u određeno vrijeme, s poznatim svojstvima. Tipični sojevi obično su označeni određenim brojem. Na primjer, soj Staphylococcus aureus 209P koristi se za određivanje aktivnosti penicilina.

Izolacija čistih kultura aeroba obično traje tri dana i provodi se prema sljedećoj shemi:

1. dan - mikroskopija razmaza iz ispitnog materijala, obojenog (obično po Gramu) - za preliminarno upoznavanje s mikroflorom, što može biti korisno u odabiru kulture medija za cijepljenje. Zatim se inokulira materijal na površinu smrznutog hranjivog agara da se dobiju izolirane kolonije. Sito se može izvesti prema Drygalsky metodi u tri Petrijeve zdjelice s hranjivim medijem. Kap materijala nanese se na prvu šalicu i raširi lopaticom po cijeloj šalici. Zatim istom lopaticom rasporedite preostalu kulturu na nju na drugu čašu, a na isti način na treću. Najveći broj kolonija narast će na prvoj ploči, najmanje na trećoj. Izolirane kolonije narast će na jednoj od ploča, ovisno o tome koliko je mikrobnih stanica bilo u ispitivanom materijalu.

Isti rezultat može se postići prosijavanjem na jednoj šalici. Da biste to učinili, podijelite šalicu na četiri sektora. Materijal koji se proučava inokulira se bakteriološkom petljom potezima na prvom sektoru, a zatim se, kalcinirajući i ohladivši petlju, inokulacija rasporedi iz prvog sektora u drugi i na isti način uzastopno u treći i četvrti sektor. Izolirane kolonije nastaju iz pojedinih mikrobnih stanica nakon dnevne inkubacije u termostatu.

2. dan - proučavanje kolonija uzgajanih na tanjurima, njihov opis. Kolonije mogu biti prozirne, prozirne ili neprozirne, imaju različite veličine, zaobljene pravilne ili nepravilne obrise, konveksni ili ravni oblik, glatke ili hrapave površine, glatke ili valovite, nazubljene rubove. Mogu biti bezbojne ili bijele, zlatne, crvene, žute. Na temelju proučavanja ovih karakteristika, uzgajane kolonije podijeljene su u skupine. Tada se iz ispitivane skupine odabere izolirana kolonija, pripremi se razmaz za mikroskopski pregled kako bi se provjerila homogenost mikroba u koloniji. Ista kolonija inokulira se u epruvetu s kosim hranjivim agarom.

3. dan - provjera čistoće kulture uzgojene na nagnutom agaru mikroskopijom razmaza. Uz homogenost proučavanih bakterija, izolacija čiste kulture može se smatrati potpunom.

Da bi se identificirale izolirane bakterije, proučavaju se kulturne osobine, odnosno priroda rasta na tekućim i čvrstim hranjivim podlogama. Na primjer, streptokoki na šećernoj juhi tvore dno i parijetalni sediment, na krvnom agaru - male, precizne kolonije; kolera vibrio stvara film na površini alkalne peptonske vode, a prozirne kolonije na alkalnom agaru; bacil kuge na hranjivom agaru stvara kolonije u obliku "čipkastih rupčića" s gustim središtem i tankim valovitim rubovima, a u tekućem hranjivom mediju - film na površini, a zatim se iz njega protežu niti u obliku "stalaktita" ".

Uzgoj i izolacija čistih kultura anaerobnih bakterija

Za uzgoj anaeroba potrebno je smanjiti oksidacijsko-redukcijski potencijal medija, stvoriti anaerobiozu uklanjanjem kisika fizikalnim, kemijskim ili biološkim metodama.

Fizičke metode uključuju:

1) mehaničko uklanjanje zraka pomoću pumpe iz anae-rostata, u koje se postavlja posuđe s usjevima. Istodobno, zrak možete zamijeniti ravnodušnim plinom: dušikom, vodikom, ugljičnim dioksidom.

2) uzgoj u mediju koji sadrži reducirajuće tvari. Kitta-Tarozzi srijeda je šećerna juha s komadićima jetre ili mesa. Glukoza i dijelovi organa imaju sposobnost smanjenja. Medij se na vrh prelije slojem vazelinskog ulja da blokira pristup kisika u zraku.

3) Najjednostavnija, ali manje pouzdana metoda je uzgoj duboko u visokom stupcu šećernog agara.

Kemijske metode sastoje se u tome da se posuđe s usjevima anaeroba stavi u hermetički zatvoren eksikator, gdje se smještaju kemikalije, na primjer, pirogalol i lužine, čija se reakcija odvija apsorpcijom kisika.

Biološka metoda temelji se na istodobnom uzgoju anaeroba i aeroba na čvrstim hranjivim podlogama u Petrijevim zdjelicama, hermetički zatvorenim nakon inokulacije. Prvo rastući aerobi apsorbiraju kisik, a zatim započinje rast anaeroba.

Izolacija čiste kulture anaeroba započinje nakupljanjem anaerobnih bakterija inokulacijom na Kitta-Tarozzi medij. U budućnosti se izolirane kolonije dobivaju na jedan od dva načina:

1) materijal se inokulira miješanjem s rastopljenim toplim šećernim agarom u staklenim cijevima. Nakon što se agar skrutne, u njegovim dubinama rastu izolirane kolonije, koje se uklanjaju rezanjem cijevi i subkultiviraju na Kitt-Tarozzijevom mediju (Weinbergova metoda);

2) inokulacija materijala provodi se na pločama s hranjivim medijem i inkubira u anaerostatu. Izolirane kolonije uzgojene na tanjuru subkultiviraju se na Kitt-Tarozzijevom mediju (Zeisslerova metoda).