Apakah tujuan menggunakan persekitaran diagnostik pembezaan? Contoh dan prinsip kerja mereka

Media diagnostik pembezaan adalah campuran nutrien khas yang digunakan untuk menentukan spesies mikroba dan mengkaji sifatnya. Apabila bakteria tumbuh pada media diagnostik pembezaan, proses kimia berlaku kerana adanya pelbagai enzim dalam sel mikroba. Sebahagian daripada mereka mampu memecah protein, yang lain adalah karbohidrat, dan yang lain mampu menyebabkan reaksi pengoksidaan dan pengurangan, dan lain-lain. Oleh kerana tindakan enzim, perubahan yang sesuai berlaku dalam persekitaran diagnostik pembezaan. Persekitaran diagnostik yang berbeza dapat dibahagikan kepada empat kumpulan utama.

• 1. Media yang mengandungi protein dan mengungkapkan kemampuan mikroba untuk memecah protein (sifat proteolitik): "kolum" gelatin daging-peptone, serum kuda atau sapi, susu, agar darah. Apabila bakteria diinokulasi dengan tusukan gelatin peptone daging, pencairan medium diperhatikan sekiranya terdapat kerosakan protein. Apabila diinokulasi pada medium dengan serum beku, degradasi protein ditentukan oleh pencairan medium dan pembentukan kemurungan pada permukaannya. Pecahan susu oleh mikroba diturunkan oleh pencerahan atau pembubaran susu yang awalnya digulung. Kehadiran aktiviti hemolitik kultur ujian diperiksa dengan menyuntikkannya ke dalam piring Petri pada agar darah khas. Hasil daripada pemusnahan eritrosit di sekitar jajahan (misalnya, streptokokus hemolitik atau staphylococcus), zon pembersihan terbentuk.
• 2. Media untuk mengesan kemampuan mikroba menguraikan karbohidrat dan alkohol yang sangat atom (Endo Wednesday, persekitaran Levin, lingkungan Russell, lingkungan Drygalsky - Konradi, persekitaran Rapoport - Weintraub, persekitaran Shustov). Untuk mengenal pasti sifat mikroorganisma ini, siri "motley" juga digunakan, iaitu, rangkaian tabung uji yang mengandungi media nutrien, termasuk pelbagai karbohidrat, alkohol polihidrat dan petunjuk. Litmus tincture atau bromothymol blue digunakan sebagai petunjuk. Penguraian mana-mana karbohidrat dengan pembentukan asid dikesan oleh perubahan warna penunjuk, pembentukan gas - dengan pengisian dengan gas dan kemunculan pelampung kaca khas dalam medium cecair. Atau gunakan medium Gissa separa cair (lihat) dengan 0,5% agar dengan gula dan penunjuk Andrade yang sesuai. Setelah menaburkan mikroba pada media ini, pembentukan asid ditunjukkan oleh kemerahan media, dan pembentukan gas - oleh penampilan gelembungnya di dalam agar atau oleh pecahan dan pergeseran ke atas lajur agar. Media diagnostik pembezaan kumpulan kedua juga merangkumi pati agar, yang berfungsi untuk menentukan kemampuan mikroba memecah kanji, medium Clark, dll.
• 3. Media di mana kemampuan mikrob untuk mewarnai pewarna yang ditambahkan ke dalam kaldu dinyatakan: metilena biru, thionin, litmus, indigo carmine, netral red atau lain-lain (medium Rothberger, medium Omelyansky). Kumpulan ketiga juga merangkumi media dengan nitrat, yang berfungsi untuk menentukan kemampuan mikroba untuk mengurangkan garam asid nitrat (nitrat) kepada garam asid nitrat (nitrit) dan kemudian kepada ammonia atau nitrogen bebas.
• 4. Media yang mengungkapkan kemampuan mikroba untuk mengasimilasi bahan yang tidak berasimilasi oleh mikroba lain, misalnya, media dengan natrium sitrat (Simons sitrat agar) untuk membezakan Escherichia coli, yang tidak mempunyai keupayaan untuk mengasimilasi media ini, dari bakteria lain dari kumpulan usus, atau medium dengan asid oleik natrium untuk pembezaan difteria bacillus dari difteria palsu dan difteroid (agarEngering).

Media diagnostik pembezaan juga merangkumi media untuk pembezaan anaerob, media Tellurite untuk pembezaan bakteria difteria, media dengan urea, media alkali (Dieudonneagar) untuk penanaman Vibrio cholerae, dll.

Rabu Endo. Terdiri daripada MPA dengan penambahan 1% laktosa dan fuchsin asas yang berubah warna dengan natrium sulfit (penunjuk). Medium Endo mempunyai warna sedikit merah jambu. Ia digunakan dalam diagnosis jangkitan usus untuk membezakan bakteria yang menguraikan laktosa untuk membentuk produk berasid dari bakteria yang tidak memiliki kemampuan ini. Koloni mikroba positif laktosa (Escherichia coli) berwarna merah kerana pengurangan fuchsin. Koloni mikroorganisma negatif laktosa - Salmonella, Shigella, dan lain-lain - tidak berwarna.

Lingkungan diagnostik pembezaan merangkumi baris motley pendek dan diperluas. Ia terdiri daripada media dengan karbohidrat (Giss media), MPB, susu, gelatin mesopatamia.

Media ciuman dibuat berdasarkan air peptone, yang ditambahkan mono-, di- atau polisakarida murni kimia (glukosa, laktosa, kanji, dll.).

Indikator ditambahkan ke media untuk mengesan perubahan pH akibat pembentukan asid dan penguraian karbohidrat. Dengan pemecahan karbohidrat yang lebih dalam, produk gas (CO 2, CH 4, dan lain-lain) terbentuk, yang ditangkap dengan bantuan apungan - tabung uji kecil diturunkan ke medium terbalik. Media dengan karbohidrat juga dapat dibuat padat - dengan penambahan agar-agar 0,5-1%. Kemudian gas ditangkap dengan pembentukan gelembung (pecah) di lajur medium.

Di BCH, yang merupakan bahagian dari barisan motley, mereka menemui produk yang terbentuk semasa pemecahan asid amino dan pepton (indole, hidrogen sulfida). Hidrogen sulfida dikesan dengan meletakkan sehelai kertas turas yang direndam dalam larutan asid asetik plumbum di BCH setelah inokulasi kultur. Apabila asid amino yang mengandungi sulfur terbelah, hidrogen sulfida dibebaskan, kepingan kertas menjadi hitam kerana pembentukan sulfida plumbum. Petunjuk kompleks boleh digunakan untuk menentukan indole. Indole terbentuk oleh pemecahan triptofan dan dapat dikesan apabila penunjuk ini ditambahkan pada kultur yang tumbuh di BCH. Dengan adanya indole, MPB bertukar menjadi hijau atau biru.

Di makmal bakteriologi praktikal, kaedah mikro dan ekspres digunakan secara meluas untuk kajian anggaran sifat biokimia mikroorganisma. Terdapat banyak sistem ujian untuk tujuan ini. Sistem sekuriti penunjuk (NIB) yang paling biasa digunakan. NIB adalah cakera kertas turas yang diresapi dengan larutan gula atau substrat lain dalam kombinasi dengan petunjuk. Cakera sedemikian direndam dalam tabung uji dengan kultur yang ditanam dalam medium nutrien cair. Perubahan warna cakera dengan substrat digunakan untuk menilai kerja enzim. Sistem ujian mikro untuk mengkaji pengenalan Enterobacteriaceae diwakili oleh bekas plastik sekali pakai dengan media yang mengandungi pelbagai substrat, dengan penambahan petunjuk. Menyemai budaya mikroorganisma yang murni dalam sistem ujian seperti ini membolehkan anda dengan cepat mengungkapkan kemampuan bakteria untuk menggunakan sitrat, glukosa, sukrosa, melepaskan amonia, indole, menguraikan urea, lisin, fenilalanin, dll.

Persekitaran kering. Agar nutrien, serta media diagnostik pembezaan utama, kini dihasilkan dalam bentuk sediaan kering yang mengandungi semua komponen yang diperlukan. Untuk serbuk seperti itu, anda hanya perlu menambahkan air dan memasak, dan kemudian, setelah menuangkan, sterilkan.

Media diagnostik pembezaan adalah campuran nutrien khas yang digunakan untuk menentukan spesies mikroba dan mengkaji sifatnya. Apabila bakteria tumbuh pada media diagnostik pembezaan, proses kimia berlaku kerana adanya sel mikroba yang berbeza. Sebilangan dari mereka mampu membelah, yang lain -, dan yang lain - menyebabkan reaksi pengoksidaan dan pengurangan, dll. Oleh kerana tindakan enzim dalam persekitaran diagnostik pembezaan, perubahan yang sesuai berlaku.

Persekitaran diagnostik yang berbeza dapat dibahagikan kepada empat kumpulan utama.

Gambar: 1-6. Pelbagai bentuk pemecahan gelatin. Gambar: 7 - 9. Medium cecair dengan karbohidrat dan petunjuk Andrade: rajah. 7 - tiada penapaian; rajah 8 - penapaian dengan pembentukan asid; rajah 9 - penapaian dengan pembentukan asid dan gas. Gambar: 10 - 12. Medium separa cair dengan karbohidrat dan penunjuk BP (dari medium kultur kering): rajah. 10 - tiada penapaian; rajah 11 - penapaian dengan pembentukan asid; rajah 12 - penapaian dengan pembentukan asid dan gas. Gambar: 13-15. Serum litmus buatan menurut Seitz: beras. 13 - tiada penapaian; rajah 14 - penapaian dengan pembentukan asid; rajah 15 - penapaian untuk membentuk. Gambar: 16 dan 17. Susu dengan metilena biru: rajah. 16 - tiada pengurangan; rajah 17-pengurangan. Gambar: 18 dan 19. Rabu Simons: rajah. 18 - kekurangan asimilasi sitrat; rajah 19 - asimilasi sitrat. Gambar: 20 - 24. Susu limau: nasi. 20 - tiada penapaian; rajah 21 - penapaian dengan pembentukan asid; rajah 22 - penapaian dengan pembentukan alkali; rajah 23 - peptonisasi; rajah 24 - pengurangan. Gambar: 25. Pencairan gegelung (dalam cahaya yang dihantar). Gambar: 26. Hemolisis pada agar darah (dalam cahaya yang dipancarkan). Gambar: 27. Persekitaran darah dengan kalium Tellurite.

1. Media yang mengandungi protein dan mengungkapkan kemampuan mikroba untuk memecah protein (Propolytic Properties): "kolum" daging-peptone, kuda bergulung atau serum sapi, susu, agar darah. Apabila bakteria diinokulasi dengan tusukan gelatin peptone daging, "lajur" dalam hal pemecahan protein, pengenceran medium diperhatikan. Apabila diinokulasi ke medium dengan serum beku, degradasi protein ditentukan oleh pencairan medium dan pembentukan depresi pada permukaannya. Pecahan susu oleh mikroba diturunkan oleh pencerahan atau pembubaran susu yang awalnya digulung. Kehadiran aktiviti hemolitik kultur ujian diperiksa dengan menyuntikkannya dalam agar darah khas. Sebagai akibat kemusnahan di sekitar jajahan (misalnya, hemolitik atau), zon pembersihan terbentuk.

2. Media untuk mengesan kemampuan mikroba menguraikan karbohidrat dan sangat atom (Endo Wednesday, Levin's Wednesday, Russell's Wednesday, Drygalsky - Konradi Wednesday, Rapoport - Weintraub Wednesday, Shustovoy Wednesday). Untuk mengenal pasti sifat mikroorganisma ini, siri "bervariasi" juga digunakan, iaitu rangkaian tabung uji yang mengandungi pelbagai karbohidrat, alkohol polihidrat dan petunjuk. Litmus tincture atau bromothymol blue digunakan sebagai petunjuk. Penguraian mana-mana karbohidrat dengan pembentukan asid dikesan oleh perubahan warna penunjuk, pembentukan gas - dengan pengisian dengan gas dan kemunculan pelampung kaca khas dalam medium cecair. Atau gunakan medium Gissa separa cair (lihat) dengan 0,5% agar dengan gula dan penunjuk Andrade yang sesuai. Setelah menaburkan mikroba pada media ini, pembentukan asid ditunjukkan oleh kemerahan media, dan pembentukan gas - oleh penampilan gelembungnya di dalam agar atau oleh pecahan dan pergeseran ke atas lajur agar. Media diagnostik pembezaan kumpulan kedua juga merangkumi pati agar, yang berfungsi untuk menentukan kemampuan mikroba memecah kanji, medium Clark, dll.

3. Media di mana kemampuan mikrob untuk mewarnai pewarna yang ditambahkan ke kaldu dinyatakan: metilena biru, thionin, litmus, merah neutral atau lain-lain (medium Rothberger, medium Omelyansky). Kumpulan ketiga juga merangkumi media dengan nitrat, yang berfungsi untuk menentukan kemampuan mikroba untuk mengurangkan garam asid nitrat (nitrat) kepada garam asid nitrat (nitrit) dan kemudian kepada ammonia atau nitrogen bebas.

4. Media yang mengungkapkan kemampuan mikroba untuk mengasimilasi bahan yang tidak berasimilasi oleh mikroba lain, misalnya, media dengan natrium sitrat (Simons sitrat agar) untuk membezakan Escherichia coli, yang tidak mempunyai keupayaan untuk mengasimilasi media ini, dari bakteria lain dari kumpulan usus, atau medium dengan asid oleik natrium untuk pembezaan difteria bacillus dari difteria palsu dan difteroid (Agger yang membesar).

Media diagnostik pembezaan juga merangkumi media untuk pembezaan anaerob, media Tellurite untuk pembezaan bakteria difteria, media dengan urea, media alkali (Dieudonne agar) untuk penanaman Vibrio cholerae, dll. Lihat juga Pengenalpastian mikroba.

MEDIA DIAGNOSTIK BERBEZA

media diagnostik pembezaan, media nutrien khas yang digunakan untuk mengenal pasti mikroorganisma dengan aktiviti biokimia terpilih yang berkaitan dengan bahan tertentu. Dalam proses pengembangan, mikroba dengan bantuan enzim memecah bahan-bahan tertentu yang membentuk persekitaran, yang dibentuk oleh perubahan persekitaran.

Sejumlah mikroorganisma patogen menguraikan karbohidrat, alkohol polihidrat dengan pembentukan asid dan gas (karbon dioksida, hidrogen, metana), yang menunjukkan bahawa mereka tergolong dalam kumpulan atau jenis bakteria tertentu. Untuk menentukan sifat-sifat ini, sediakan cecair atau separa cecair D.-d. dari. dengan glukosa, laktosa, sukrosa, mannose dan karbohidrat lain, alkohol polihidrat (julat bervariasi), dengan petunjuk (Andrade, Gissa), medium dengan susu. Keupayaan enzimatik mikroba ditentukan oleh penampilan gas atau perubahan warna penunjuk. Keamatan pembentukan asid dari glukosa ditentukan pada medium Clark, pembentukan acetylmethylcarbonal - menggunakan reaksi Voges-Proskauer, kemampuan amilolitik mikroba - pada agar pati. Sifat protein mikrob ditentukan pada media yang tidak mengandungi glukosa dan gliserin - gelatin daging-peptone, whey horse yang dibekukan, agar susu. Gelatin daging-peptone diinokulasi dengan menusuk ke bahagian bawah tabung uji, diinkubasi pada t 20-22 ° C, dan kemudian tentukan tahap pencairan gelatin. Keupayaan hemolitik mikrob ditentukan dengan melapisi agar darah atau kaldu darah. Untuk menentukan aktiviti pengurangan mikrob, gunakan D.-d. dari. dengan pewarna (, litmus, indocarmine, thionine, dll.). Semasa mikroba tumbuh, terdapat perubahan warna sepenuhnya atau separa atau perubahan warna pewarna. Mereka juga menggunakan media dengan nitrat, di mana, di bawah pengaruh enzim mikroba tertentu, nitrat dikurangkan menjadi nitrit dan kemudian menjadi ammonia atau nitrogen bebas.

Kamus ensiklopedik veterinar. - M .: "Ensiklopedia Soviet". Ketua editor V.P. Shishkov. 1981 .

Lihat apa "MEDIA BERBEZA-DIAGNOSTIK" dalam kamus lain:

Persekitaran diagnostik yang berbeza - campuran nutrien khas (lihat. Media kultur), di mana mikroorganisma ditanam untuk menentukan spesiesnya. Kepada D. d. Dengan. termasuk media protein yang digunakan untuk menentukan hemolitik dan ...

Media nutrien, substrat yang digunakan untuk penanaman dalam keadaan buatan mikroorganisma dan kultur tisu. Dalam amalan mikrobiologi, S. item tersebut banyak digunakan untuk diagnosis makmal penyakit berjangkit, untuk ... Kamus ensiklopedik veterinar

Media budaya bakteriologi - substrat cair, separa cair atau pepejal yang digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisma dalam keadaan makmal atau industri. Mereka digunakan untuk mengasingkan bakteria, kulat dan protozoa dari objek biogenik atau abiogenik termudah, untuk ... Kamus Mikrobiologi

Media budaya - media cair atau pepejal yang digunakan untuk tumbuh bakteria, ragi, kulat mikroskopik, alga, protozoa, virus dan kultur sel tumbuhan atau haiwan dalam keadaan makmal atau industri. P. Sintetik dengan ... ... Ensiklopedia Soviet Hebat

Gissa Rabu - (Ph. N. Hiss, 1868 1913, ahli bakteriologi Amerika; sinonim: baris bervariasi, baris berwarna) media nutrien diagnostik pembezaan cecair atau separa cecair, yang direka untuk menentukan dan membezakan bakteria dengan kemampuan mereka menguraikan pelbagai ... ... Kamus Perubatan Besar

McConkey Rabu - (A. Ma Conkey, 1861 1931, ahli bakteriologi Inggeris) media nutrien diagnostik pembezaan selektif untuk pengasingan bakteria keluarga. Enterobacteriaceae, mis. Escherichia coli yang mengandungi sodium taurocholic acid dan lactose ... Kamus Perubatan Besar

Nutrien - substrat, yang terdiri daripada komponen yang menyediakan syarat yang diperlukan untuk penanaman mikroorganisma atau pengumpulan produk buangannya. Media budaya berbeza dari segi tujuan, konsistensi dan komposisi. Dengan tujuan mereka ... ... Ensiklopedia perubatan

Diagnostik mikrobiologi - berdasarkan pengenalpastian patogen atau pengesanan tindak balas imun pesakit terhadapnya. Peringkat awal M.D. adalah pemilihan bahan dan pengangkutan sampel ke makmal. Jenis bahan untuk penyelidikan ditentukan oleh ciri ... Ensiklopedia perubatan

Ubat - I Medicine Medicine adalah sistem pengetahuan saintifik dan aktiviti praktikal, yang tujuannya adalah memperkuat dan menjaga kesihatan, memanjangkan umur orang, mencegah dan merawat penyakit manusia. Untuk melaksanakan tugas-tugas ini, M. mengkaji struktur dan ... ... Ensiklopedia perubatan

Organisma anaerobik - Bakteria aerobik dan anaerobik dikenal pasti dalam medium nutrien cair dengan kecerunan kepekatan O2: 1. Bakteria aerobik (memerlukan oksigen) wajib berkumpul terutama di bahagian atas tiub untuk menyerap ... ... Wikipedia

Untuk membezakan beberapa jenis bakteria dengan yang lain berdasarkan aktiviti enzimatiknya, ia digunakan persekitaran diagnostik pembezaan ... Contohnya, persekitaran Giss, persekitaran Endo, persekitaran Levin, persekitaran Ploskirev, persekitaran Olkenitsky. Media Endo, Levin, Ploskirev dalam piring Petri digunakan untuk membezakan bakteria dari kumpulan usus dengan kemampuan mereka untuk fermentasi laktosa. Media ini mengandungi agar nutrien, laktosa dan indikator yang berubah warna dalam medium berasid (penunjuk pH). Sekiranya bakteria yang memfermentasi laktosa ditaburkan di persekitaran seperti itu, misalnya, E. coli, maka asid terbentuk sebagai hasil fermentasi laktosa, dan indikator akan berubah warna di persekitaran yang berasid. Oleh itu, koloni Escherichia coli pada media semacam itu akan diwarnakan mengikut warna penunjuk: pada media Endo dan Ploskirev - dengan warna merah, pada media Levin - berwarna hitam-biru. Sekiranya bakteria yang tidak fermentasi laktosa ditaburkan pada media ini, misalnya, tongkat demam kepialu atau batang disentri, maka asid tidak terbentuk, tindak balas medium akan tetap sedikit alkali dan warna penunjuk tidak akan berubah. Oleh itu, koloni bakteria yang tidak fermentasi laktosa tidak akan berwarna pada media ini. Medium Ploskirev juga dapat dikaitkan dengan media elektif untuk pengasingan batang disentri, kerana media ini mengandungi garam hempedu, yang menghambat pertumbuhan E. coli, dan pewarna hijau yang cemerlang, yang menghalang pertumbuhan mikroflora coccal udara. Bismuth sulfite agar adalah medium diagnostik pembezaan yang digunakan terutamanya dalam diagnosis salmonellosis. Dengan pertumbuhan Salmonella, bismut dipulihkan dari garamnya dan koloni Salmonella menjadi hitam. Media diagnostik pembezaan Giss (siri "motley") dibuat berdasarkan medium cecair (air peptone) atau agar-pepton daging separa cair. Mereka mengandungi alkohol karbohidrat atau polihidrat (laktosa, glukosa, manitol, sukrosa) dan petunjuk yang berubah warna di persekitaran berasid. Pelampung kaca diletakkan di dalam tabung uji dengan medium Giss cair. Sekiranya mikroba ditaburkan pada medium Giss, yang memanaskan karbohidrat ini dengan pembentukan asid dan gas, iaitu ke produk akhir, maka media akan berubah warna, gelembung dan pecah muncul dalam ketebalan agar dalam medium semi-cair, dan gelembung gas di apung dalam medium cair. Apabila karbohidrat diperam hanya kepada produk perantaraan (kepada asid), hanya perubahan warna medium yang berlaku. Media gabungan tidak mengandungi satu karbohidrat, tetapi dua atau tiga juga digunakan, misalnya, medium Olkenitsky - agar-tiga gula dengan urea. Satu tiub medium Olkenitsky menggantikan agar slant dan media Giss dengan laktosa, sukrosa dan glukosa. Hari Rabu disediakan berdasarkan MPA yang tidak terlalu padat. Mengandungi laktosa (1%), sukrosa (1%), glukosa (0.1%), urea, garam Mohr (feros sulfat), natrium hiposulfit dan penunjuk. Selepas pensterilan, media dituangkan dalam bentuk rata ke dalam tabung uji sehingga tiang dan bahagian serong diperoleh. Menabur dilakukan dengan pukulan di sepanjang bahagian serong dan tusukan ke lajur. Apabila anda memerah lebih banyak karbohidrat (laktosa, sukrosa atau kedua-dua gula), warna keseluruhan medium berubah; apabila hanya glukosa yang ditapai, warna bar berubah, dan bahagian serong tetap tidak berubah. Pembentukan gas ditunjukkan oleh adanya gelembung di lajur agar. Kultur yang memecah urea untuk membentuk ammonia memberikan reaksi alkali. Dalam kes ini, asid yang terbentuk semasa fermentasi karbohidrat dinetralkan, dan warna medium tidak berubah. Pecahan urea adalah ciri protein dan sebilangan E. coli. Enterobacteriaceae patogen tidak menguraikan urea. Penambahan garam dan hiposulfit Mohr juga memungkinkan kita untuk mengkaji kemampuan bakteria membentuk hidrogen sulfida dengan menghitamkan di lajur agar hasil penukaran sulfat besi menjadi sulfida hitam.

Untuk kaedah ekspres untuk menentukan aktiviti enzimatik mikroorganisma, sistem microtest dan sistem kertas penunjuk (NIB) digunakan. Sistem microtest adalah bekas polisterin yang telus, yang terdiri daripada beberapa sel. Sel mengandungi media pit kering dengan karbohidrat dan petunjuk pH. Suspensi kultur bakteria dengan ketumpatan tertentu diinokulasi ke dalam setiap sel. Fizikal dituangkan ke dalam sel kawalan. penyelesaian. Hasilnya diambil kira setelah 3-4 jam inkubasi dalam termostat mengikut perubahan warna penunjuk.Sistem kertas penunjuk (NIB) untuk pengenalan keluarga Enterobacteriaceae adalah cakera atau helai kertas kromatografi yang ditutup dengan filem pelindung alkohol polivinil dan mengandungi substrat dan indikator tertentu. Dalam tabung uji dengan larutan garam atau penyangga, gelung lengkap kultur ujian atau setetes penggantungan mikroba tebal diperkenalkan, kemudian dimasukkan ke dalam cakera dengan pinset yang dibakar. Budaya bakteria tidak ditambahkan pada tabung kawalan. Hasilnya diambil kira dengan mengubah warna penunjuk. Untuk menentukan hidrogen sulfida, cakera diletakkan dalam tabung uji di permukaan MPA yang diinokulasi dengan suntikan, yang memungkinkan penentuan mobiliti secara serentak. Di semua tabung uji, keputusan awal pada hari yang sama dan keputusan akhir setelah lapan belas hingga dua puluh empat jam diambil kira. Aktiviti oksidase ditentukan dengan mengisar kultur pada kertas penunjuk selepas 30-60 saat.

Pengasingan kultur murni bakteria aerobik dan anaerobik. Senaraikan prinsip dan kaedah mendapatkan koloni aerob yang terpencil. Kaedah pengasingan kultur anaerob murni. Huraikan kaedah Weinberg mengikut hari.

Penanaman dan pengasingan kultur murni bakteria aerobik

Untuk penanaman mikroorganisma, syarat tertentu diperlukan: suhu, keadaan aerobik atau anaerobik.

Suhu mestilah optimum untuk spesies. Sebilangan besar bakteria patogen berkembang pada suhu 37 ° C. Namun, bagi beberapa spesies, suhu yang lebih rendah adalah optimum, kerana keunikan ekologi mereka. Oleh itu, untuk wabak bacillus, habitat semula jadi yang merupakan tikus semasa hibernasi, suhu optimum adalah 28 ° C, seperti untuk leptospira, untuk baculus botulisme - 28 ° C-35 ° C.

Sebagai tambahan kepada suhu optimum, untuk penanaman mikroorganisma, bergantung pada spesies, diperlukan persekitaran aerobik atau anaerobik.

Untuk mengkaji morfologi, budaya, biokimia dan sifat mikrob lain, perlu memperoleh budaya murni. Biasanya, kultur mikroba disebut pengumpulannya pada medium nutrien dalam bentuk kekeruhan, pertumbuhan dekat-bawah (dinding) atau filem di permukaan medium cair atau koloni pada medium yang padat. Koloni tunggal terbentuk dari satu sel mikrob. Budaya murni adalah budaya satu spesies mikrob yang diperoleh dari satu koloni. Di makmal, strain mikrob tertentu yang diketahui digunakan untuk pelbagai kajian. Ketegangan adalah kultur mikrob murni, yang diperoleh dari sumber tertentu, pada waktu tertentu, dengan sifat yang diketahui. Biasanya, strain mikroba ditentukan oleh nombor tertentu. Contohnya, strain Staphylococcus aureus 209P digunakan untuk menentukan aktiviti penisilin.

Pengasingan kultur aerob murni biasanya memakan masa tiga hari dan dilakukan mengikut skema berikut:

Hari pertama - mikroskop smear dari bahan ujian, diwarnai (biasanya oleh Gram) - untuk kenalan awal dengan mikroflora, yang dapat berguna dalam memilih media kultur untuk inokulasi. Kemudian suntikan bahan ke permukaan agar-agar nutrien beku untuk mendapatkan koloni terpencil. Menyaring boleh dilakukan mengikut kaedah Drygalsky menjadi tiga piring Petri dengan medium nutrien. Setetes bahan digunakan pada cawan pertama dan disebarkan ke seluruh cawan dengan spatula. Kemudian, dengan spatula yang sama, sebarkan budaya yang tinggal di atasnya pada cawan kedua dan dengan cara yang sama pada yang ketiga. Jumlah jajahan terbesar akan tumbuh di lempeng pertama, paling sedikit di ketiga. Koloni terpencil akan tumbuh di salah satu pelat, bergantung pada berapa banyak sel mikrob dalam bahan ujian.

Hasil yang sama dapat dicapai dengan mengayak pada satu cawan. Untuk melakukan ini, bahagikan cawan menjadi empat sektor. Bahan yang dikaji diinokulasi dengan gelung bakteriologi dengan pukulan pada sektor pertama, kemudian, setelah dikalsinasi dan disejukkan gelung, inokulasi diedarkan dari sektor pertama ke sektor kedua dan dengan cara yang sama secara berurutan ke sektor ketiga dan keempat. Koloni terpencil terbentuk dari sel mikroba individu selepas inkubasi 24 jam dalam termostat.

Hari ke-2 - kajian mengenai tanah jajahan yang ditanam di atas pinggan, penerangannya. Koloni boleh berbentuk telus, lut sinar atau legap, ia mempunyai ukuran yang berbeza, garis bulat biasa atau tidak teratur, bentuk cembung atau rata, permukaan licin atau kasar, permukaan licin atau bergelombang, bergerigi. Mereka boleh berwarna atau putih, emas, merah, kuning. Berdasarkan kajian ciri-ciri ini, koloni yang ditanam dibahagikan kepada beberapa kumpulan. Kemudian koloni terpencil dipilih dari kumpulan kajian, smear disediakan untuk pemeriksaan mikroskopik untuk memeriksa homogenitas mikrob di koloni. Koloni yang sama diinokulasi ke dalam tabung uji dengan slent agar nutrien.

Hari ke-3 - memeriksa kesucian budaya yang ditanam pada agar-agar dengan mikroskop smear. Dengan homogenitas bakteria yang dikaji, pengasingan budaya murni dapat dianggap lengkap.

Untuk mengenal pasti bakteria terpencil, sifat budaya dikaji, iaitu sifat pertumbuhan pada media nutrien cair dan pepejal. Sebagai contoh, streptokokus pada kaldu gula membentuk sedimen bawah dan parietal, pada agar darah - koloni titik kecil; kolera vibrio membentuk filem di permukaan air peptone alkali, dan koloni telus pada agar alkali; wabak wabak pada agar berkhasiat membentuk koloni dalam bentuk "sapu tangan renda" dengan pusat yang padat dan tepi bergelombang nipis, dan dalam medium nutrien cair - filem di permukaan, dan kemudian filamen memanjang darinya dalam bentuk "stalaktit".

Penanaman dan pengasingan kultur murni bakteria anaerob

Untuk penanaman anaerob, perlu menurunkan potensi pengurangan oksidasi medium, untuk membuat anaerobiosis dengan mengeluarkan oksigen dengan kaedah fizikal, kimia atau biologi.

Kaedah fizikal merangkumi:

1) penyingkiran udara secara mekanikal melalui pam dari anae-rostat, di mana plat dengan inokulasi diletakkan. Pada masa yang sama, anda boleh mengganti udara dengan gas yang tidak peduli: nitrogen, hidrogen, karbon dioksida.

2) tumbuh dalam medium yang mengandungi zat pengurangan. Kitta-Tarozzi Wednesday adalah kaldu gula dengan potongan hati atau daging. Glukosa dan kepingan organ mempunyai keupayaan mengurangkan. Medium dituangkan di atas dengan lapisan minyak vaseline untuk menyekat akses oksigen udara.

3) Kaedah yang paling mudah, tetapi kurang dipercayai ialah menanam dalam gula agar tinggi.

Kaedah kimia terdiri daripada fakta bahawa piring dengan tanaman anaerob ditempatkan dalam desikator yang tertutup rapat, di mana bahan kimia, misalnya, pyrogallol dan alkali, ditempatkan, tindak balas antara yang berlanjutan dengan penyerapan oksigen.

Kaedah biologi didasarkan pada penanaman serentak anaerob dan aerob pada media nutrien pepejal dalam piring Petri, ditutup secara hermetik setelah inokulasi. Oksigen mula-mula diserap oleh aerob yang tumbuh, dan kemudian pertumbuhan anaerob bermula.

Pengasingan kultur anaerob murni bermula dengan pengumpulan bakteria anaerob dengan inokulasi pada medium Kitta-Tarozzi. Jajahan terpencil yang lebih jauh diperoleh dengan satu daripada dua cara:

1) inokulasi bahan dilakukan dengan mencampurkan dengan agar-agar gula cair dalam tiub kaca. Setelah agar menjadi padat, koloni terpencil tumbuh di dalamnya, yang dikeluarkan dengan memotong tiub dan subkultur pada medium Kitt-Tarozzi (kaedah Weinberg);

2) inokulasi bahan dilakukan pada piring dengan medium nutrien dan diinkubasi dalam anaerostat. Jajahan terpencil yang ditanam di atas piring subkultur pada media Kitt-Tarozzi (kaedah Zeissler).