Untuk tujuan apakah persekitaran diagnostik pembezaan digunakan? Contoh dan prinsip kerja mereka

Persekitaran diagnostik yang berbeza -- campuran khas nutrien, digunakan untuk menentukan spesies mikrob dan mengkaji sifatnya. Apabila bakteria tumbuh pada media diagnostik pembezaan, proses kimia berlaku disebabkan oleh kehadiran pelbagai enzim dalam sel mikrob. Sesetengah daripada mereka mampu memecahkan protein, yang lain - karbohidrat, yang lain - menyebabkan tindak balas pengoksidaan dan pengurangan, dll. Terima kasih kepada tindakan enzim, perubahan yang sepadan berlaku dalam persekitaran diagnostik pembezaan. Persekitaran diagnostik pembezaan boleh dibahagikan kepada empat kumpulan utama.

• 1. Media yang mengandungi protein dan mendedahkan keupayaan mikrob untuk memecahkan protein (sifat proteolitik): "lajur" gelatin daging-pepton, serum kuda atau lembu, susu, agar darah. Apabila menyuntik bakteria melalui tusukan ke dalam gelatin daging-pepton, dalam "lajur", dalam kes pecahan protein, pencairan medium diperhatikan. Apabila diinokulasi pada medium dengan whey terkoagulasi, pecahan protein ditentukan oleh pencairan medium dan pembentukan lekukan pada permukaannya. Pecahan susu oleh mikrob didedahkan dengan pembersihan atau pelarutan susu yang mula-mula menjadi kental. Kehadiran aktiviti hemolitik kultur ujian diperiksa dengan menyuntikkannya ke dalam cawan Petri pada agar darah khas. Akibat pemusnahan sel darah merah di sekitar koloni (contohnya, streptokokus hemolitik atau staphylococcus), zon pembersihan terbentuk.
• 2. Media untuk mengenal pasti keupayaan mikrob untuk memecahkan karbohidrat dan alkohol atom tinggi (medium Endo, medium Levin, medium Russell, Drigalsky - medium Conradi, Rapoport - medium Weintraub, medium Shustov). Untuk mengenal pasti sifat-sifat mikroorganisma ini, siri "variegated" juga digunakan, iaitu satu siri tabung uji yang mengandungi media nutrien, termasuk pelbagai karbohidrat, alkohol polihidrik dan penunjuk. Litmus tincture atau bromothymol blue digunakan sebagai penunjuk. Penguraian mana-mana karbohidrat dengan pembentukan asid dikesan oleh perubahan dalam warna penunjuk; pembentukan gas dikesan dengan pengisian gas dan terapung kaca khas dalam medium cecair. Atau gunakan media Hiss separa cecair (lihat) dengan agar 0.5% dengan gula yang sesuai dan penunjuk Andrade. Selepas menyuntik mikrob pada media ini, pembentukan asid dikesan dengan kemerahan medium, dan pembentukan gas dengan kemunculan buihnya dalam agar atau oleh pecah dan peralihan ke atas lajur agar. Media diagnostik pembezaan kumpulan kedua juga termasuk agar kanji, yang digunakan untuk menentukan keupayaan mikrob untuk memecahkan kanji, medium Clark, dll.
• 3. Media di mana keupayaan mikrob untuk menyahwarnakan pewarna yang ditambahkan ke dalam sup didedahkan: metilena biru, thionine, litmus, indigo carmine, merah neutral atau lain-lain (medium Rothberger, medium Omelyansky). Kumpulan ketiga juga termasuk media dengan nitrat, yang digunakan untuk menentukan keupayaan mikrob untuk mengurangkan garam asid nitrik(nitrat) menjadi garam asid nitrus (nitrit) dan kemudian menjadi ammonia atau nitrogen bebas.
• 4. Media yang mendedahkan keupayaan mikrob untuk mengasimilasikan bahan yang tidak boleh dihadam oleh mikrob lain, contohnya, medium dengan natrium sitrat (Simons citrate agar) untuk membezakan Escherichia coli, yang tidak mempunyai keupayaan untuk mengasimilasikan medium ini, daripada bakteria lain. daripada kumpulan usus, atau medium dengan asid natrium oleik untuk pembezaan bacillus difteria daripada difteria dan difteri palsu (Engering agar).

Media diagnostik pembezaan juga termasuk media untuk membezakan anaerobes, media tellurit untuk membezakan bakteria difteria, media dengan urea, media alkali(Dieudonnéagar) untuk penanaman Vibrio cholerae, dsb.

Persekitaran endo. Terdiri daripada MPA dengan tambahan 1% laktosa dan fuchsin asas (penunjuk) dinyahwarna dengan natrium sulfit. Medium endo mempunyai warna merah jambu sedikit. Digunakan dalam diagnosis jangkitan usus untuk membezakan bakteria yang menguraikan laktosa untuk membentuk produk berasid daripada bakteria yang tidak mempunyai keupayaan ini. Koloni mikrob positif laktosa (Escherichia coli) berwarna merah kerana pengurangan fuchsin. Koloni mikroorganisma laktosa-negatif - salmonella, shigella, dll. - tidak berwarna.

Persekitaran diagnostik pembezaan termasuk siri motley pendek dan lanjutan. Ia terdiri daripada media dengan karbohidrat (Hiss media), MPB, susu, dan gelatin daging-pepton.

Media hiss disediakan berdasarkan air pepton, yang mana mono-, di- atau polisakarida tulen secara kimia (glukosa, laktosa, kanji, dll.) ditambah.

Untuk mengesan perubahan pH akibat pembentukan asid dan penguraian karbohidrat, penunjuk ditambah kepada media. Dengan pecahan karbohidrat yang lebih mendalam, produk gas (CO 2, CH 4, dll.) Terbentuk, yang ditangkap menggunakan terapung - tabung uji kecil diturunkan terbalik ke dalam medium. Media dengan karbohidrat juga boleh disediakan sebagai yang padat - dengan penambahan 0.5-1% agar-agar. Kemudian pembentukan gas dikesan dengan pembentukan buih (pecah) dalam lajur medium.

Pada MPB, yang merupakan sebahagian daripada siri motley, produk yang terbentuk semasa pemecahan asid amino dan pepton (indole, hidrogen sulfida) ditemui. Hidrogen sulfida dikesan dengan meletakkan jalur kertas turas yang direndam dalam larutan plumbum asetat ke dalam MPB selepas menyemai kultur. Apabila asid amino yang mengandungi sulfur dipecahkan, hidrogen sulfida dibebaskan, dan kertas menjadi hitam akibat pembentukan sulfida plumbum. Penunjuk kompleks boleh digunakan untuk menentukan indole. Indole terbentuk melalui pecahan triptofan dan boleh dikesan apabila penunjuk ini ditambah kepada budaya yang ditanam di MPB. Dengan kehadiran indole, MPB bertukar hijau atau biru.

Dalam makmal bakteriologi praktikal, kaedah mikro dan ekspres digunakan secara meluas untuk kajian indikatif tentang sifat biokimia mikroorganisma. Terdapat banyak sistem ujian untuk tujuan ini. Sistem kertas penunjuk (SIB) yang paling biasa digunakan. SIB ialah cakera kertas penapis yang diresapi dengan larutan gula atau substrat lain dalam kombinasi dengan penunjuk. Cakera tersebut diturunkan ke dalam tabung uji dengan kultur yang ditanam dalam medium nutrien cecair. Perubahan warna cakera dengan substrat digunakan untuk menilai fungsi enzim. Sistem ujian mikro untuk mengkaji pengenalpastian enterobacteria dibentangkan sebagai pakai buang bekas plastik dengan media yang mengandungi pelbagai substrat, dengan penambahan penunjuk. Menyemai budaya tulen mikroorganisma ke dalam sistem ujian sedemikian membolehkan anda mengenal pasti dengan cepat keupayaan bakteria untuk menggunakan sitrat, glukosa, sukrosa, membebaskan ammonia, indole, mengurai urea, lisin, fenilalanin, dll.

Persekitaran yang kering. Agar nutrien, serta media diagnostik pembezaan utama, kini dihasilkan dalam bentuk persediaan kering yang mengandungi semua komponen yang diperlukan. Kepada serbuk sedemikian anda hanya perlu menambah air dan mendidihnya, dan kemudian, selepas menuangkan, sterilkannya.

Media diagnostik pembezaan ialah campuran khas nutrien yang digunakan untuk menentukan spesies mikrob dan mengkaji sifatnya. Apabila bakteria tumbuh pada media diagnostik pembezaan, proses kimia berlaku disebabkan kehadiran pelbagai bakteria dalam sel mikrob. Sebahagian daripada mereka mampu memecahkan, yang lain -, yang lain - menyebabkan pengoksidaan dan tindak balas pengurangan, dan lain-lain. Terima kasih kepada tindakan enzim, perubahan yang sepadan berlaku dalam persekitaran diagnostik pembezaan.

Persekitaran diagnostik pembezaan boleh dibahagikan kepada empat kumpulan utama.

nasi. 1-6. Pelbagai bentuk pecahan gelatin. nasi. 7 - 9. Medium cecair dengan karbohidrat dan penunjuk Andrade: rajah. 7 - tiada penapaian; nasi. 8 - penapaian dengan pembentukan asid; nasi. 9 - penapaian dengan pembentukan asid dan gas. nasi. 10 - 12. Medium separa cecair dengan karbohidrat dan penunjuk BP (daripada medium nutrien kering): rajah. 10 - tiada penapaian; nasi. 11 - penapaian dengan pembentukan asid; nasi. 12 - penapaian dengan pembentukan asid dan gas. nasi. 13-15. Seitz serum litmus tiruan: Rajah. 13 - tiada penapaian; nasi. 14 - penapaian dengan pembentukan asid; nasi. 15 - penapaian dengan pembentukan. nasi. 16 dan 17. Susu dengan metilena biru: rajah. 16 - kekurangan pengurangan; nasi. 17 - pengurangan. nasi. 18 dan 19. Perantara Simons: rajah. 18 - kekurangan asimilasi sitrat; nasi. 19 - asimilasi sitrat. nasi. 20 - 24. Susu lakmus: beras. 20 - tiada penapaian; nasi. 21 - penapaian dengan pembentukan asid; nasi. 22 - penapaian dengan pembentukan alkali; nasi. 23 - peptonisasi; nasi. 24 - pengurangan. nasi. 25. Pencairan produk bergelung (dalam cahaya yang dihantar). nasi. 26. Hemolisis pada agar darah (dalam cahaya yang dihantar). nasi. 27. Medium darah dengan potassium tellurite.

1. Media yang mengandungi protein dan mendedahkan keupayaan mikrob untuk memecahkan protein (sifat proteolitik): "lajur" daging-pepton, serum kuda atau lembu, susu, agar darah. Apabila menyuntik bakteria melalui tusukan ke dalam gelatin daging-pepton, dalam "lajur", dalam kes pecahan protein, pencairan medium diperhatikan. Apabila diinokulasi pada medium dengan whey terkoagulasi, pecahan protein ditentukan oleh pencairan medium dan pembentukan lekukan pada permukaannya. Pecahan susu oleh mikrob didedahkan dengan pembersihan atau pelarutan susu yang mula-mula menjadi kental. Kehadiran aktiviti hemolitik kultur ujian diperiksa dengan menyuntikkannya pada agar darah khas. Hasil daripada kemusnahan di sekitar koloni (contohnya, hemolitik atau) zon pembersihan terbentuk.

2. Media untuk mengenal pasti keupayaan mikrob untuk memecahkan karbohidrat dan yang beratom tinggi (medium Endo, medium Levin, medium Russell, Drigalsky - medium Conradi, Rapoport - medium Weintraub, medium Shustov). Untuk mengenal pasti sifat-sifat mikroorganisma ini, siri "variegated" juga digunakan, iaitu satu siri tabung uji yang mengandungi pelbagai karbohidrat, alkohol polihidrik dan penunjuk. Litmus tincture atau bromothymol blue digunakan sebagai penunjuk. Penguraian mana-mana karbohidrat dengan pembentukan asid dikesan oleh perubahan warna penunjuk, pembentukan gas dikesan dengan pengisian dengan gas dan terapung kaca khas terapung dalam medium cecair. Atau gunakan media Hiss separa cecair (lihat) dengan agar 0.5% dengan gula yang sesuai dan penunjuk Andrade. Selepas menyuntik mikrob pada media ini, pembentukan asid dikesan dengan kemerahan medium, dan pembentukan gas dengan kemunculan buihnya dalam agar atau oleh pecah dan peralihan ke atas lajur agar. Media diagnostik pembezaan kumpulan kedua juga termasuk agar kanji, yang digunakan untuk menentukan keupayaan mikrob untuk memecahkan kanji, medium Clark, dll.

3. Media di mana keupayaan mikrob untuk menyahwarnakan pewarna yang ditambahkan ke dalam sup didedahkan: metilena biru, thionine, litmus, merah neutral atau lain-lain (medium Rothberger, medium Omelyansky). Kumpulan ketiga juga termasuk media dengan nitrat, yang digunakan untuk menentukan keupayaan mikrob untuk mengurangkan garam asid nitrik (nitrat) menjadi garam asid nitrus (nitrit) dan kemudian menjadi ammonia atau nitrogen bebas.

4. Media yang mendedahkan keupayaan mikrob untuk mengasimilasikan bahan yang tidak boleh dihadam oleh mikrob lain, contohnya, medium dengan natrium sitrat (Simons citrate agar) untuk membezakan Escherichia coli, yang tidak mempunyai keupayaan untuk mengasimilasikan medium ini, daripada bakteria lain. kumpulan usus, atau medium dengan asid natrium oleik untuk pembezaan bacillus difteria daripada difteria dan difteri palsu (agar Engering).

Media diagnostik pembezaan juga termasuk media untuk membezakan anaerobes, media tellurit untuk membezakan bakteria difteria, media dengan urea, media beralkali (Dieudonne agar) untuk memupuk Vibrio cholerae, dsb. Lihat juga Pengenalpastian mikrob.

PERSEKITARAN DIAGNOSTIK BERBEZA

media diagnostik pembezaan, media nutrien khas yang digunakan untuk mengenal pasti mikroorganisma yang mempunyai aktiviti biokimia terpilih terhadap bahan tertentu. Semasa perkembangan mereka, mikrob, dengan bantuan enzim, memecahkan bahan tertentu yang terkandung dalam alam sekitar, yang ditentukan oleh perubahan dalam persekitaran.

Sebilangan mikroorganisma patogenik mengurai karbohidrat dan alkohol polihidrik dengan pembentukan asid dan gas (karbon dioksida, hidrogen, metana), yang menunjukkan bahawa mereka tergolong dalam kumpulan atau jenis bakteria tertentu. Untuk mewujudkan sifat-sifat ini, sediakan cecair atau separa cecair D.-D. Dengan. dengan glukosa, laktosa, sukrosa, mannose dan karbohidrat lain, alkohol polihidrik (siri variegated), dengan penunjuk (Andrade, Gissa), media dengan susu. Keupayaan enzimatik mikrob ditentukan oleh penampilan gas atau perubahan dalam warna penunjuk. Keamatan pembentukan asid daripada glukosa ditentukan pada medium Clark, pembentukan asetilmetilkarbonal menggunakan tindak balas Voges-Proskauer, dan keupayaan amilolitik mikrob pada agar kanji. Sifat proteolitik mikrob ditentukan pada media yang tidak mengandungi glukosa dan gliserol, gelatin daging-pepton, serum kuda terkumpul, dan agar susu. Gelatin daging-pepton diinokulasi dengan menusuk ke bahagian bawah tabung uji, diinkubasi di t 2022°C, dan kemudian tentukan tahap pencairan gelatin. Keupayaan hemolitik mikrob ditentukan dengan penyaduran pada agar darah atau sup darah. Untuk menentukan aktiviti pengurangan mikrob, gunakan D.-D. Dengan. dengan pewarna (, litmus, indidocarmine, thionin, dll.). Apabila mikrob berkembang, perubahan warna lengkap atau separa atau perubahan warna pewarna berlaku. Media dengan nitrat juga digunakan, di mana, di bawah pengaruh enzim mikrob tertentu, nitrat dikurangkan kepada nitrit dan kemudian kepada ammonia atau nitrogen bebas.

Kamus ensiklopedia veterinar. - M.: "Ensiklopedia Soviet". Ketua Pengarang V.P. Shishkov. 1981 .

Lihat apa "PERSEKITARAN DIAGNOSTIK BERBEZA" dalam kamus lain:

Persekitaran diagnostik yang berbeza- campuran khas nutrien (lihat media nutrien) di mana mikroorganisma ditanam untuk menentukan spesiesnya. Kepada D.d.s. termasuk media protein yang digunakan untuk menentukan hemolitik dan...

Media nutrien, substrat yang digunakan untuk penanaman dalam keadaan buatan mikroorganisma dan kultur tisu. Dalam amalan mikrobiologi, S. p digunakan secara meluas untuk diagnosis makmal penyakit berjangkit, untuk... ... Kamus ensiklopedia veterinar

Media nutrien bakteria- substrat cecair, separa cecair atau pepejal yang digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisma dalam keadaan makmal atau industri. Digunakan untuk mengasingkan bakteria tulen, kulat dan protozoa daripada objek biogenik atau abiogenik, untuk... ... Kamus mikrobiologi

Media budaya- media cecair atau pepejal yang digunakan untuk pertumbuhan bakteria, yis, kulat mikroskopik, alga, protozoa, virus dan tumbuhan atau kultur sel haiwan dalam keadaan makmal atau industri. P. s sintetik.... ... Ensiklopedia Soviet yang Hebat

Gissa Rabu- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, ahli bakteriologi Amerika; sinonim: siri motley, siri warna) media nutrien diagnostik pembezaan cecair atau separa cecair bertujuan untuk mengenal pasti dan membezakan bakteria mengikut keupayaan mereka untuk mengurai pelbagai ... ... Kamus perubatan yang besar

McConkey hari Rabu- (A. Ma Conkey, 1861 1931, ahli bakteriologi Inggeris) media nutrien diagnostik pembezaan terpilih untuk mengasingkan bakteria keluarga. Enterobacteriaceae, cth. coli yang mengandungi asid taurocholic natrium dan laktosa... Kamus perubatan yang besar

Media nutrien- substrat yang terdiri daripada komponen yang menyediakan syarat-syarat yang diperlukan untuk penanaman mikroorganisma atau pengumpulan produk metabolik mereka. Media nutrien berbeza dari segi tujuan, konsistensi dan komposisi. Mengikut tujuan mereka... ... Ensiklopedia perubatan

Diagnostik mikrobiologi- adalah berdasarkan mengenal pasti patogen atau mengenal pasti tindak balas imun pesakit terhadapnya. Peringkat awal M.d. ialah pemilihan bahan dan pengangkutan sampel ke makmal. Jenis bahan untuk penyelidikan ditentukan oleh ciri-ciri... ... Ensiklopedia perubatan

Ubat- I Perubatan Perubatan ialah satu sistem pengetahuan saintifik dan aktiviti amali, yang matlamatnya adalah untuk mengukuhkan dan memelihara kesihatan, memanjangkan hayat manusia, mencegah dan merawat penyakit manusia. Untuk menyelesaikan tugasan ini, M. mengkaji struktur dan... ... Ensiklopedia perubatan

Organisma anaerobik- Bakteria aerobik dan anaerobik dikenal pasti secara awal dalam medium nutrien cecair dengan kecerunan kepekatan O2: 1. Bakteria aerobik obligat (memerlukan oksigen) terutamanya berkumpul di bahagian atas tabung uji untuk menyerap ... ... Wikipedia

Untuk membezakan satu spesies bakteria daripada yang lain berdasarkan mereka aktiviti enzimatik memohon persekitaran diagnostik pembezaan . Contohnya, Persekitaran Hiss, Persekitaran Endo, Persekitaran Levin, Persekitaran Ploskirev, Persekitaran Olkenitsky. Media Endo, Levin, dan Ploskirev dalam hidangan Petri digunakan untuk membezakan bakteria usus berdasarkan keupayaan mereka untuk menapai laktosa. Media ini mengandungi agar nutrien, laktosa dan penunjuk yang berubah warna dalam persekitaran berasid (penunjuk pH). Jika anda menyuntik bakteria yang menapai laktosa, sebagai contoh, E. coli, ke dalam medium sedemikian, maka sebagai hasil daripada penapaian laktosa, asid terbentuk, dan penunjuk akan menukar warnanya dalam persekitaran berasid. Oleh itu, koloni E. coli pada media tersebut akan diwarnakan mengikut warna penunjuk: pada medium Endo dan medium Ploskirev - merah, pada medium Levin - hitam dan biru. Jika anda menyuntik media ini dengan bakteria yang tidak menapai laktosa, contohnya, basil kepialu atau basil disentri, maka tiada asid akan terbentuk, tindak balas medium akan kekal sedikit beralkali dan warna penunjuk tidak akan berubah. Oleh itu, koloni bakteria yang tidak menapai laktosa akan menjadi tidak berwarna pada media ini. Medium Ploskirev juga boleh dikelaskan sebagai medium elektif untuk mengasingkan bacilli disentri, kerana medium ini mengandungi garam hempedu yang menghalang pertumbuhan E. coli, dan pewarna hijau cemerlang yang menghalang pertumbuhan mikroflora coccal udara. Bismut sulfit agar adalah medium diagnostik pembezaan yang digunakan terutamanya dalam diagnosis salmonellosis. Apabila salmonella tumbuh, bismut dikurangkan daripada garamnya dan koloni salmonella menjadi hitam. Media diagnostik pembezaan bagi siri Hiss (“variegated”) disediakan berdasarkan medium cecair (air pepton) atau agar daging-pepton separa cecair. Ia mengandungi sebarang karbohidrat atau alkohol polihidrik (laktosa, glukosa, manitol, sukrosa) dan penunjuk yang mengubah warna dalam persekitaran berasid. Terapung kaca diletakkan di dalam tabung uji dengan medium Hiss cecair. Jika anda menyuntik mikrob pada medium Hiss yang menapai karbohidrat tertentu dengan pembentukan asid dan gas, iaitu, kepada produk akhir, maka medium akan berubah warna, gelembung dan pecah akan muncul dalam ketebalan agar dalam medium separa cecair, dan gelembung gas dalam apungan akan muncul dalam medium cecair. Apabila karbohidrat ditapai hanya kepada produk perantaraan (kepada asid), hanya perubahan dalam warna medium juga digunakan, tidak mengandungi satu karbohidrat, tetapi dua atau tiga, sebagai contoh, medium Olkenitsky - tiga gula. agar-agar dengan urea. Satu tiub medium Olkenicki menggantikan slant agar dan media Hiss dengan laktosa, sukrosa dan glukosa. Medium disediakan berdasarkan MPA yang tidak terlalu padat. Mengandungi laktosa (1%), sukrosa (1%), glukosa (0.1%), urea, garam Mohr (ferus sulfat), natrium hiposulfit dan penunjuk. Selepas pensterilan, medium dituangkan ke dalam tabung uji dalam bentuk yang diluruskan supaya lajur dan bahagian serong terbentuk. Penyemaian dilakukan dengan menconteng di sepanjang bahagian serong dan menusuk ke dalam tiang. Apabila menapai karbohidrat yang terkandung dalam lebih(laktosa, sukrosa atau kedua-dua gula), warna keseluruhan medium berubah; Apabila hanya glukosa yang ditapai, warna lajur berubah, tetapi bahagian yang dipotong kekal tidak berubah. Pembentukan gas ditentukan oleh kehadiran buih dalam ruangan agar. Kultur yang memecahkan urea untuk membentuk ammonia memberikan tindak balas alkali. Dalam kes ini, asid yang terbentuk semasa penapaian karbohidrat dinetralkan, dan warna medium tidak berubah. Pecahan urea adalah ciri Proteas dan beberapa Escherichia coli. Enterobacteria patogen tidak mengurai urea. Penambahan garam Mohr dan hiposulfit juga memungkinkan untuk mengkaji keupayaan bakteria untuk membentuk hidrogen sulfida dengan menghitamkan dalam ruangan agar hasil daripada penukaran ferus sulfat kepada sulfida hitam.

Untuk kaedah nyata untuk menentukan aktiviti enzimatik mikroorganisma, sistem ujian mikro dan sistem kertas penunjuk (SIB) digunakan. Sistem ujian mikro ialah bekas polistirena lutsinar yang terdiri daripada beberapa sel. Sel-sel mengandungi media pemakanan kering dengan karbohidrat dan penunjuk pH. Suspensi kultur bakteria dengan ketumpatan tertentu diinokulasi ke dalam setiap sel. Larutan fizikal dituangkan ke dalam sel kawalan. penyelesaian. Hasilnya diambil kira selepas 3-4 jam pengeraman dalam termostat dengan perubahan warna sistem kertas penunjuk (IPS) untuk mengenal pasti keluarga enterobacteria ialah cakera atau jalur kertas kromatografi yang disalut dengan filem pelindung. polivinil alkohol dan mengandungi substrat dan penunjuk tertentu. Dalam tabung uji dengan larutan fisiologi atau penimbal, tambahkan gelung penuh kultur ujian atau titisan penggantungan mikrob tebal, kemudian letakkannya ke dalam cakera dengan pinset terbakar. Tiada kultur bakteria ditambah untuk mengawal tiub. Hasilnya diambil kira oleh perubahan dalam warna penunjuk. Untuk menentukan hidrogen sulfida, cakera diletakkan di dalam tabung uji pada permukaan MPA yang disemai dengan suntikan, yang membolehkan penentuan mobiliti serentak. Dalam semua tabung uji, keputusan awal diambil kira pada hari yang sama dan keputusan akhir selepas lapan belas hingga dua puluh empat jam. Aktiviti oksidase ditentukan dengan menggosok kultur pada kertas penunjuk selepas 30-60 saat.

Pengasingan kultur tulen bakteria aerobik dan anaerobik. Senaraikan prinsip dan kaedah untuk mendapatkan koloni terpencil aerobes. Kaedah untuk mengasingkan kultur tulen anaerobes. Terangkan kaedah Weinberg hari demi hari.

Penanaman dan pengasingan kultur tulen bakteria aerobik

Untuk memupuk mikroorganisma, syarat tertentu diperlukan: suhu, keadaan aerobik atau anaerobik.

Suhu harus optimum untuk spesies ini. Kebanyakan bakteria patogen membiak pada 37°C. Walau bagaimanapun, bagi sesetengah spesies, suhu yang lebih rendah adalah optimum, yang disebabkan oleh keanehan ekologi mereka. Oleh itu, untuk bacillus wabak, habitat semulajadinya ialah tikus semasa hibernasi, suhu optimum ialah 28°C, begitu juga untuk Leptospira, untuk bacillus botulisme - 28°C-35°C.

Kecuali suhu optimum, untuk penanaman mikroorganisma, bergantung kepada jenis, persekitaran aerobik atau anaerobik diperlukan.

Untuk mengkaji morfologi, budaya, biokimia dan sifat-sifat mikrob lain, adalah perlu untuk mendapatkan budaya tulen. Biasanya, kultur mikrob merujuk kepada pengumpulannya pada medium nutrien dalam bentuk kekeruhan, pertumbuhan bawah (dinding) atau filem pada permukaan medium cecair atau koloni pada medium pepejal. Koloni yang berasingan terbentuk daripada satu sel mikrob. Budaya tulen ialah budaya mikrob satu spesies yang diperoleh daripada satu koloni. Di makmal, strain mikrob tertentu yang diketahui digunakan untuk pelbagai kajian. Strain ialah budaya tulen mikrob yang diperoleh daripada sumber tertentu, pada masa tertentu, dengan sifat yang diketahui. Sebagai peraturan, strain mikrob ditetapkan oleh nombor tertentu. Sebagai contoh, strain Staphylococcus aureus 209P digunakan untuk menentukan aktiviti penisilin.

Pengasingan kultur aerobik tulen biasanya mengambil masa tiga hari dan dijalankan mengikut skema berikut:

Hari 1 - mikroskopi smear dari bahan ujian, diwarnakan (biasanya oleh Gram) - untuk pengenalan awal dengan mikroflora, yang boleh berguna dalam memilih medium nutrien untuk inokulasi. Kemudian bahan tersebut disuntik ke atas permukaan agar-agar nutrien pepejal untuk mendapatkan koloni terpencil. Pengayak boleh dilakukan menggunakan kaedah Drigalski ke dalam tiga cawan Petri dengan medium nutrien. Setitik bahan disapu pada cawan pertama dan sapukan dengan spatula ke atas keseluruhan cawan. Kemudian, dengan spatula yang sama, edarkan tanaman yang tinggal di atasnya pada cawan kedua dan dengan cara yang sama pada cawan ketiga. Bilangan koloni terbesar akan tumbuh pada plat pertama, paling kecil pada plat ketiga. Bergantung pada bilangan sel mikrob yang terdapat dalam bahan yang dikaji, koloni terpencil akan tumbuh pada salah satu hidangan.

Hasil yang sama boleh dicapai dengan menapis pada satu cawan. Untuk melakukan ini, bahagikan cawan kepada empat sektor. Bahan yang dikaji disuntik dengan gelung bakteriologi dalam coretan pada sektor pertama, kemudian, selepas pengkalsinan dan penyejukan gelung, inokulasi diagihkan dari sektor pertama ke sektor kedua dan dengan cara yang sama secara berurutan ke sektor ketiga dan keempat. Koloni terpencil terbentuk daripada sel mikrob individu selepas pengeraman harian dalam termostat.

Hari 2 - kajian koloni yang ditanam pada hidangan, menerangkannya. Koloni boleh menjadi telus, lut sinar atau legap, mereka ada pelbagai saiz, garisan bulat sekata atau tidak sekata, cembung atau bentuk rata, permukaan licin atau kasar, licin atau beralun, tepi bergerigi. Mereka boleh menjadi tidak berwarna atau mempunyai putih, emas, merah, kuning. Berdasarkan kajian ciri-ciri ini, koloni yang telah tumbuh dibahagikan kepada kumpulan. Kemudian koloni terpencil dipilih daripada kumpulan kajian, dan smear disediakan untuk pemeriksaan mikroskopik untuk memeriksa kehomogenan mikrob dalam koloni. Koloni yang sama diinokulasi ke dalam tabung uji dengan agar-agar nutrien senget.

Hari 3 - memeriksa ketulenan kultur yang ditanam pada agar slant dengan mikroskop smear. Jika bakteria yang dikaji adalah homogen, pengasingan kultur tulen boleh dianggap lengkap.

Untuk mengenal pasti bakteria terpencil, ciri-ciri budaya dikaji, iaitu corak pertumbuhan pada media nutrien cecair dan pepejal. Sebagai contoh, streptokokus membentuk sedimen bawah dan dinding pada sup gula, dan koloni kecil yang tepat pada agar darah; Vibrio cholerae membentuk filem pada permukaan air pepton beralkali, dan koloni lutsinar pada agar beralkali; Bakilus wabak pada agar-agar nutrien membentuk koloni dalam bentuk "sapu tangan renda" dengan pusat padat dan tepi bergelombang nipis, dan dalam medium nutrien cair - filem di permukaan, dan kemudian benang memanjang daripadanya dalam bentuk "stalaktit. ”.

Penanaman dan pengasingan kultur tulen bakteria anaerobik

Untuk memupuk anaerobes, adalah perlu untuk mengurangkan potensi redoks medium dan mencipta anaerobiosis dengan mengeluarkan oksigen melalui kaedah fizikal, kimia atau biologi.

Kaedah fizikal termasuk:

1) penyingkiran mekanikal udara menggunakan pam dari anae-rostat, di mana cawan dengan tanaman diletakkan. Pada masa yang sama, anda boleh menggantikan udara dengan gas acuh tak acuh: nitrogen, hidrogen, karbon dioksida.

2) tumbuh dalam persekitaran yang mengandungi bahan penurun. Medium Kitta-Tarozzi ialah sup gula dengan kepingan hati atau daging. Glukosa dan kepingan organ mempunyai keupayaan mengurangkan. Medium dituangkan di atasnya dengan lapisan minyak Vaseline untuk menghalang akses oksigen udara.

3) Yang paling mudah, tetapi kurang cara yang boleh dipercayai- tumbuh di kedalaman tiang tinggi agar gula.

Kaedah kimia terdiri daripada fakta bahawa hidangan dengan anaerob yang diinokulasi diletakkan dalam desikator yang tertutup rapat, di mana bahan kimia diletakkan, contohnya, pyrogallol dan alkali, tindak balas antara yang berlaku dengan penyerapan oksigen.

Kaedah biologi adalah berdasarkan penanaman serentak anaerobes dan aerobes pada media nutrien pepejal dalam piring Petri, tertutup rapat selepas disemai. Pertama, oksigen diserap oleh aerobes yang semakin meningkat, dan kemudian pertumbuhan anaerobes bermula.

Pengasingan kultur tulen anaerobes bermula dengan pengumpulan bakteria anaerobik dengan menyadur pada medium Kitta-Tarozzi. Selepas itu, koloni terpencil diperoleh dengan salah satu daripada dua cara:

1) inokulasi bahan dijalankan dengan mencampurkan dengan agar gula suam cair dalam tiub kaca. Selepas agar-agar mengeras, koloni terpencil tumbuh di kedalamannya, yang dikeluarkan dengan memotong tiub dan dipindahkan ke medium Kitt-Tarozzi (kaedah Weinberg);

2) bahan disuntik ke dalam pinggan dengan medium nutrien dan diinkubasi dalam anaerostat. Koloni terpencil yang ditanam pada hidangan disubkultur pada medium Kitt-Tarozzi (kaedah Zeissler).