Za kakšen namen se uporabljajo diferencialno diagnostična okolja? Primeri in principi njihovega dela

Diferencialno diagnostična okolja -- posebne mešanice hranila, ki se uporablja za določanje vrst mikrobov in proučevanje njihovih lastnosti. Pri rasti bakterij na diferencialno diagnostičnih gojiščih pride do kemičnih procesov zaradi prisotnosti različnih encimov v mikrobni celici. Nekateri od njih so sposobni razgraditi beljakovine, drugi - ogljikove hidrate, drugi - povzročajo oksidacijske in redukcijske reakcije itd. Zahvaljujoč delovanju encimov pride do ustreznih sprememb v diferencialno diagnostičnem okolju. Diferencialno diagnostična okolja lahko razdelimo v štiri glavne skupine.

• 1. Mediji, ki vsebujejo beljakovine in razkrivajo sposobnost mikrobov za razgradnjo beljakovin (proteolitične lastnosti): mesno-peptonska želatinska "kolona", koaguliran konjski ali goveji serum, mleko, krvni agar. Pri inokulaciji bakterij s punkcijo v mesno-peptonsko želatino, v "koloni", v primeru razgradnje beljakovin opazimo utekočinjenje medija. Pri inokulaciji na gojišču s koagulirano sirotko je razgradnja beljakovin določena z utekočinjenjem gojišča in nastankom vdolbin na njegovi površini. Razgradnjo mleka z mikrobi razkrije z bistrenjem ali raztapljanjem prvotno strjenega mleka. Prisotnost hemolitične aktivnosti testne kulture preverimo tako, da jo nacepimo v petrijevko na poseben krvni agar. Zaradi uničenja rdečih krvnih celic okoli kolonij (na primer hemolitični streptokok ali stafilokok) nastanejo čistilna območja.
• 2. Gojišča za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo ogljikovih hidratov in visokoatomskih alkoholov (medij Endo, medij Levin, medij Russell, medij Drigalsky - Conradi, medij Rapoport - Weintraub, medij Shustov). Za identifikacijo teh lastnosti mikroorganizmov se uporablja tudi "pestra" serija, to je serija epruvet, ki vsebujejo hranilne medije, vključno z različnimi ogljikovimi hidrati, polihidričnimi alkoholi in indikatorjem. Kot indikator se uporablja lakmusova tinktura ali bromotimol modro. Razgradnjo katerega od ogljikovih hidratov s tvorbo kisline zaznamo s spremembo barve indikatorja, tvorbo plina zaznamo s polnjenjem plina in lebdenjem posebnega steklenega plovca v tekočem mediju. Ali pa uporabite poltekoča Hiss gojišča (glejte) z 0,5 % agarjem z ustreznimi sladkorji in indikatorjem Andrade. Po inokulaciji mikroba na ta gojišča ugotovimo tvorbo kisline po pordelosti gojišča, tvorbo plina pa po pojavu njenih mehurčkov v agarju ali po pretrganju in premiku stolpca agarja navzgor. Diferencialno diagnostična gojišča druge skupine vključujejo tudi škrobni agar, ki se uporablja za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo škroba, Clarkov medij itd.
• 3. Mediji, na katerih se razkrije sposobnost mikrobov za razbarvanje barvil, dodanih brozgi: metilensko modro, tionin, lakmus, indigo karmin, nevtralno rdeče ali drugi (Rothbergerjev medij, Omelyanskyjev medij). V tretjo skupino spadajo tudi gojišča z nitrati, s katerimi ugotavljamo sposobnost mikrobov za redukcijo soli dušikova kislina(nitratov) v soli dušikove kisline (nitrite) in nato v amoniak ali prosti dušik.
• 4. Gojišča, ki razkrivajo sposobnost mikrobov za asimilacijo snovi, ki jih drugi mikrobi ne prebavijo, na primer gojišče z natrijevim citratom (Simonsov citratni agar) za razlikovanje Escherichie coli, ki nima sposobnosti za asimilacijo tega medija, od drugih bakterij intestinalne skupine ali gojišče z natrijevo oleinsko kislino za razlikovanje difterijske bacile od lažne davice in difteroidov (Engeringov agar).

Diferencialno diagnostična gojišča vključujejo tudi gojišča za razlikovanje anaerobov, teluritna gojišča za diferenciacijo bakterij davice, gojišča s sečnino, alkalni medij(Dieudonnéagar) za gojenje Vibrio cholerae itd.

Endo okolje. Sestavljen je iz MPA z dodatkom 1% laktoze in bazičnega fuksina (indikator), razbarvanega z natrijevim sulfitom. Endo medij je rahlo rožnate barve. Uporablja se pri diagnozi črevesnih okužb za razlikovanje bakterij, ki razgrajujejo laktozo in tvorijo kisle produkte, od bakterij, ki te sposobnosti nimajo. Kolonije laktozo pozitivnih mikrobov (Escherichia coli) so rdeče zaradi redukcije fuksina. Kolonije laktoza-negativnih mikroorganizmov - salmonele, šigele itd. - so brezbarvne.

Diferencialno diagnostična okolja vključujejo kratko in razširjeno pestro serijo. Sestavljen je iz medijev z ogljikovimi hidrati (Hiss media), MPB, mleka in mesno-peptonske želatine.

Hiss gojišča so pripravljena na osnovi peptonske vode, ki so ji dodani kemično čisti mono-, di- ali polisaharidi (glukoza, laktoza, škrob itd.).

Za zaznavanje premikov pH zaradi tvorbe kislin in razgradnje ogljikovih hidratov je mediju dodan indikator. Pri globlji razgradnji ogljikovih hidratov nastanejo plinasti produkti (CO 2, CH 4 itd.), Ki jih zajamemo s plovci - majhnimi epruvetami, spuščenimi na glavo v medij. Gojišča z ogljikovimi hidrati lahko pripravimo tudi kot gosta - z dodatkom 0,5-1% agar-agarja. Nato se tvorba plina zazna s tvorbo mehurčkov (prelomov) v stolpcu medija.

Na MPB, ki je del pestre serije, najdemo produkte, ki nastanejo pri razpadu aminokislin in peptonov (indol, vodikov sulfid). Vodikov sulfid zaznamo tako, da po setvi kulture v MPB položimo trak filtrirnega papirja, namočen v raztopino svinčevega acetata. Pri razgradnji aminokislin, ki vsebujejo žveplo, se sprosti vodikov sulfid, zaradi tvorbe svinčevega sulfida pa papir počrni. Za določanje indola je mogoče uporabiti kompleksen indikator. Indol nastane z razpadom triptofana in ga je mogoče zaznati, ko ta indikator dodamo kulturi, gojeni na MPB. V prisotnosti indola se MPB obarva zeleno ali modro.

V praktičnih bakterioloških laboratorijih se mikro- in ekspresne metode pogosto uporabljajo za indikativno študijo biokemičnih lastnosti mikroorganizmov. V ta namen obstaja veliko testnih sistemov. Najpogosteje uporabljen sistem indikatorskih papirčkov (SIB). SIB so diski iz filtrirnega papirja, impregnirani z raztopinami sladkorjev ali drugih substratov v kombinaciji z indikatorji. Takšni diski se spustijo v epruveto s kulturo, gojeno v tekočem hranilnem mediju. Po spremembi barve diska s substratom presojamo delovanje encima. Mikrotestni sistemi za preučevanje identifikacije enterobakterij so predstavljeni kot enkratni plastične posode z mediji, ki vsebujejo različne substrate, z dodatkom indikatorjev. Sejanje čiste kulture mikroorganizmov v takšne testne sisteme vam omogoča, da hitro ugotovite sposobnost bakterij, da uporabljajo citrate, glukozo, saharozo, sproščajo amoniak, indol, razgrajujejo sečnino, lizin, fenilalanin itd.

Suha okolja. Hranilni agar, kot tudi glavni diferencialno diagnostični mediji, se trenutno proizvajajo v obliki suhih pripravkov, ki vsebujejo vse potrebne sestavine. Takim praškom morate samo dodati vodo in jih zavreti, nato pa jih po vlivanju sterilizirati.

Diferencialno diagnostični mediji so posebne mešanice hranil, ki se uporabljajo za določanje vrste mikrobov in preučevanje njihovih lastnosti. Pri rasti bakterij na diferencialno diagnostičnih gojiščih pride do kemičnih procesov zaradi prisotnosti različnih bakterij v mikrobni celici. Nekateri od njih se lahko razgradijo, drugi -, drugi - povzročijo oksidacijske in redukcijske reakcije itd. Zahvaljujoč delovanju encimov pride do ustreznih sprememb v diferencialno diagnostičnem okolju.

Diferencialno diagnostična okolja lahko razdelimo v štiri glavne skupine.

riž. 1-6. Različne oblike razpad želatine. riž. 7 - 9. Tekoči medij z ogljikovimi hidrati in indikatorjem Andrade: sl. 7 - brez fermentacije; riž. 8 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 9 - fermentacija s tvorbo kisline in plina. riž. 10 - 12. Poltekoči medij z ogljikovimi hidrati in indikatorjem BP (iz suhega hranilnega medija): sl. 10 - brez fermentacije; riž. 11 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 12 - fermentacija s tvorbo kisline in plina. riž. 13-15. Seitz umetni lakmusov serum: sl. 13 - brez fermentacije; riž. 14 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 15 - fermentacija s tvorbo. riž. 16 in 17. Mleko z metilen modrim: sl. 16 - pomanjkanje zmanjšanja; riž. 17 - zmanjšanje. riž. 18 in 19. Simonsov medij: sl. 18 - pomanjkanje asimilacije citrata; riž. 19 - asimilacija citrata. riž. 20 - 24. Lakmusovo mleko: riž. 20 - brez fermentacije; riž. 21 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 22 - fermentacija s tvorbo alkalije; riž. 23 - peptonizacija; riž. 24 - zmanjšanje. riž. 25. Utekočinjenje zvitega izdelka (v prepustni svetlobi). riž. 26. Hemoliza na krvnem agarju (v presvetlitvi). riž. 27. Krvni gojišče s kalijevim teluritom.

1. Mediji, ki vsebujejo beljakovine in razkrivajo sposobnost mikrobov za razgradnjo beljakovin (proteolitske lastnosti): mesno-peptonska "kolona", koagulirani konjski ali goveji serum, mleko, krvni agar. Pri inokulaciji bakterij s punkcijo v mesno-peptonsko želatino, v "koloni", v primeru razgradnje beljakovin opazimo utekočinjenje medija. Pri inokulaciji na gojišču s koagulirano sirotko je razgradnja beljakovin določena z utekočinjenjem gojišča in nastankom vdolbin na njegovi površini. Razgradnjo mleka z mikrobi razkrije z bistrenjem ali raztapljanjem prvotno strjenega mleka. Prisotnost hemolitične aktivnosti testne kulture preverimo tako, da jo nacepimo na poseben krvni agar. Zaradi uničenja okrog kolonij nastanejo (na primer hemolitične ali) čistilne cone.

2. Mediji za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo ogljikovih hidratov in visokoatomskih (medij Endo, medij Levin, medij Russell, medij Drigalsky - Conradi, medij Rapoport - Weintraub, medij Shustov). Za identifikacijo teh lastnosti mikroorganizmov se uporablja tudi "pestra" serija, to je serija epruvet, ki vsebuje različne ogljikove hidrate, polihidrične alkohole in indikator. Kot indikator se uporablja lakmusova tinktura ali bromotimol modro. Razgradnjo katerega od ogljikovih hidratov s tvorbo kisline zaznamo s spremembo barve indikatorja, tvorbo plina zaznamo s polnjenjem s plinom in lebdenjem posebnega steklenega plovca v tekočem mediju. Ali pa uporabite poltekoča Hiss gojišča (glejte) z 0,5 % agarjem z ustreznimi sladkorji in indikatorjem Andrade. Po inokulaciji mikroba na ta gojišča ugotovimo tvorbo kisline po pordelosti gojišča, tvorbo plina pa po pojavu njenih mehurčkov v agarju ali po pretrganju in premiku stolpca agarja navzgor. Diferencialno diagnostična gojišča druge skupine vključujejo tudi škrobni agar, ki se uporablja za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo škroba, Clarkov medij itd.

3. Mediji, na katerih se razkrije sposobnost mikrobov za razbarvanje barvil, dodanih brozgi: metilensko modro, tionin, lakmus, nevtralno rdeče ali drugi (Rothbergerjev medij, Omelyanskyjev medij). V tretjo skupino spadajo tudi gojišča z nitrati, s katerimi ugotavljamo sposobnost mikrobov, da reducirajo soli dušikove kisline (nitrate) v soli dušikove kisline (nitrite) in nato v amoniak ali prosti dušik.

4. Gojišča, ki razkrivajo sposobnost mikrobov za asimilacijo snovi, ki jih drugi mikrobi ne prebavijo, na primer gojišče z natrijevim citratom (Simonsov citratni agar) za razlikovanje Escherichie coli, ki nima sposobnosti za asimilacijo tega medija, od drugih bakterij intestinalne skupine ali gojišče z natrijevo oleinsko kislino za razlikovanje difterijske bacile od lažne davice in difteroidov (Engeringov agar).

Diferencialno diagnostična gojišča vključujejo tudi gojišča za razlikovanje anaerobov, teluritna gojišča za diferenciacijo difteričnih bakterij, gojišča s sečnino, alkalna gojišča (Dieudonne agar) za gojenje Vibrio cholerae itd. Glej tudi Identifikacija mikrobov.

DIFERENCIALNO DIAGNOSTIČNO OKOLJE

diferencialno diagnostični mediji, posebna hranilna gojišča, ki se uporabljajo za identifikacijo mikroorganizmov, ki imajo selektivno biokemično delovanje na določene snovi. Mikrobi med svojim razvojem s pomočjo encimov razgrajujejo določene snovi, ki jih vsebuje okolje, kar določajo spremembe v okolju.

Številni patogeni mikroorganizmi razgrajujejo ogljikove hidrate in polihidrične alkohole s tvorbo kislin in plinov (ogljikov dioksid, vodik, metan), kar kaže na njihovo pripadnost določeni skupini ali vrsti bakterij. Za vzpostavitev teh lastnosti pripravite tekočino ali pol tekočino D.-D. z. z glukozo, laktozo, saharozo, manozo in drugimi ogljikovimi hidrati, polihidroksi alkoholi (pestre serije), z indikatorji (Andrade, Gissa), mediji z mlekom. Encimsko sposobnost mikrobov določa pojav plina ali sprememba barve indikatorja. Intenzivnost tvorbe kisline iz glukoze ugotavljamo na Clarkovem gojišču, tvorbo acetilmetilkarbonala z Voges-Proskauerjevo reakcijo, amilolitično sposobnost mikrobov pa na škrobnem agarju. Proteolitične lastnosti mikrobov ugotavljamo na gojiščih, ki ne vsebujejo glukoze in glicerola, mesno-peptonske želatine, koaguliranega konjskega seruma in mlečnega agarja. Mesno-peptonsko želatino inokuliramo z vbodom v dno epruvete in inkubiramo pri t 2022 °C, nato pa določimo stopnjo utekočinjenja želatine. Hemolitično sposobnost mikrobov določimo z nasaditvijo na krvni agar ali krvno juho. Za določitev redukcijske aktivnosti mikrobov uporabite D.-D. z. z barvili (lakmus, indidokarmin, tionin itd.). Ko mikrobi rastejo, pride do popolnega ali delnega razbarvanja ali spremembe barve barvila. Uporabljajo se tudi gojišča z nitrati, v katerih se pod vplivom encimov določenih mikrobov nitrati reducirajo v nitrite in nato v amoniak ali prosti dušik.

Veterinarski enciklopedični slovar. - M.: "Sovjetska enciklopedija". Glavni urednik V.P. Šiškov. 1981 .

Poglejte, kaj je "DIFERENCIALNO DIAGNOSTIČNO OKOLJE" v drugih slovarjih:

Diferencialno diagnostična okolja- posebne mešanice hranil (glej Hranilni mediji), na katerih gojimo mikroorganizme za določanje njihove vrste. Za D.d.s. vključujejo beljakovinske medije, ki se uporabljajo za določanje hemolitičnih in...

Hranilni mediji, substrati, ki se uporabljajo za gojenje v umetni pogoji mikroorganizmov in tkivnih kultur. V mikrobiološki praksi se S. p. pogosto uporablja za laboratorijsko diagnostiko nalezljivih bolezni, za... ... Veterinarski enciklopedični slovar

Bakteriološki hranilni mediji- tekoči, poltekoči ali trdni substrati, ki se uporabljajo za gojenje mikroorganizmov v laboratorijskih ali industrijskih pogojih. Uporablja se za izolacijo čistih bakterij, gliv in protozojev iz biogenih ali abiogenih predmetov, za... ... Mikrobiološki slovar

Kulturni mediji- tekoča ali trdna gojišča, ki se uporabljajo za gojenje bakterij, kvasovk, mikroskopskih gliv, alg, praživali, virusov in rastlinskih ali živalskih celičnih kultur v laboratorijskih ali industrijskih pogojih. Sintetični P. s....... Velika sovjetska enciklopedija

Gissa sreda- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, ameriški bakteriolog; sinonim: motley series, color series) tekoča ali poltekoča diferencialno diagnostična hranilna gojišča, namenjena prepoznavanju in razlikovanju bakterij glede na njihovo sposobnost razgradnje različnih ... ... Velik medicinski slovar

McConkey ob sredah- (A. Ma Conkey, 1861 1931, angleški bakteriolog) selektivni diferencialno diagnostični hranilni mediji za izolacijo bakterij iz družine. Enterobacteriaceae, npr. coli, ki vsebuje natrijevo tauroholno kislino in laktozo... Velik medicinski slovar

Hranilni mediji- podlage, sestavljene iz komponent, ki zagotavljajo potrebne pogoje za gojenje mikroorganizmov ali kopičenje produktov njihove presnove. Hranilni mediji se razlikujejo glede na namen, konsistenco in sestavo. Po njihovem namenu..... Medicinska enciklopedija

Mikrobiološka diagnostika- temelji na identifikaciji povzročitelja bolezni ali ugotavljanju bolnikovega imunskega odziva nanj. Začetna faza m.d. je izbor materiala in transport vzorcev v laboratorij. Vrsto materiala za raziskavo določajo značilnosti... ... Medicinska enciklopedija

Zdravilo- I Medicina Medicina je sistem znanstvenih spoznanj in praktične dejavnosti, katerega cilji so krepitev in ohranjanje zdravja, podaljševanje življenja ljudi, preprečevanje in zdravljenje bolezni ljudi. Za izpolnitev teh nalog M. preučuje strukturo in... ... Medicinska enciklopedija

Anaerobni organizmi- Aerobne in anaerobne bakterije so predhodno identificirane v tekočem hranilnem mediju z gradientom koncentracije O2: 1. Obligate aerobne (ki potrebujejo kisik) bakterije se večinoma zbirajo na vrhu epruvete, da absorbirajo ... ... Wikipedia

Za razlikovanje ene vrste bakterij od drugih na podlagi njihove encimsko aktivnost uporabiti diferencialno diagnostična okolja . Na primer okolje Hiss, okolje Endo, okolje Levin, okolje Ploskirev, okolje Olkenitsky. Mediji Endo, Levin in Ploskirev v petrijevkah se uporabljajo za razlikovanje črevesnih bakterij glede na njihovo sposobnost fermentacije laktoze. Ta gojišča vsebujejo hranilni agar, laktozo in indikator, ki spremeni barvo v kislem okolju (pH indikator). Če na takšno gojišče inokulirate bakterije, ki fermentirajo laktozo, na primer E. coli, potem kot posledica fermentacije laktoze nastane kislina, indikator pa spremeni barvo v kislem okolju. Zato bodo kolonije E. coli na takšnih medijih obarvane glede na barvo indikatorja: na mediju Endo in Ploskirev - rdeča, na mediju Levin - črna in modra. Če ta gojišča inokulirate z bakterijami, ki ne fermentirajo laktoze, na primer bacili tifusa ali dizenterije, potem ne bo nastala kislina, reakcija gojišča bo ostala rahlo alkalna in barva indikatorja se ne bo spremenila. Zato bodo kolonije bakterij, ki ne fermentirajo laktoze, na teh medijih brezbarvne. Ploskirjevo gojišče lahko uvrščamo tudi med elektivne gojišča za izolacijo dizenteričnih bacilov, saj vsebuje žolčne soli, ki zavirajo rast E. coli, in briljantno zeleno barvilo, ki zavira rast zračne kokalne mikroflore. Bizmutov sulfitni agar je diferencialno diagnostično sredstvo, ki se uporablja predvsem pri diagnozi salmoneloze. Ko salmonela raste, se bizmut zmanjša iz svojih soli in kolonije salmonele postanejo črne. Diferencialno diagnostični mediji Hiss ("pestre" serije) so pripravljeni na osnovi tekočega medija (peptonska voda) ali poltekočega mesno-peptonskega agarja. Vsebujejo poljubne ogljikove hidrate ali polihidrične alkohole (laktozo, glukozo, manitol, saharozo) in indikator, ki spremeni barvo v kislem okolju. Stekleni plovec se postavi v epruveto s tekočim Hissovim medijem. Če na Hissov medij nacepite mikrob, ki fermentira določen ogljikov hidrat s tvorbo kisline in plina, to je do končnih produktov, bo gojišče spremenilo barvo, v debelini agarja se bodo pojavili mehurčki in razpoke. poltekoči medij, v tekočem mediju pa se pojavi plinski mehurček v plovcu. Pri fermentaciji ogljikovih hidratov le do vmesnih produktov (do kisline) pride tudi do spremembe barve medija. Uporabljajo se tudi kombinirani mediji, ki ne vsebujejo enega ogljikovega hidrata, ampak dva ali tri, na primer medij Olkenitsky - tri sladkorja. agar z ureo. Ena epruveta gojišča Olkenicki nadomešča gojišča agar in Hiss z laktozo, saharozo in glukozo. Medij je pripravljen na osnovi manj goste MPA. Vsebuje laktozo (1%), saharozo (1%), glukozo (0,1%), sečnino, Mohrovo sol (železov sulfat), natrijev hiposulfit in indikator. Po sterilizaciji medij vlijemo v epruveto v poravnani obliki, tako da nastane stolpec in poševni del. Setev opravimo s črtami po poševnem delu in pikiranjem v steber. Pri fermentaciji ogljikovih hidratov, ki jih vsebuje več(laktoza, saharoza ali oba sladkorja), spremeni se barva celotnega medija; Ko fermentira samo glukoza, se barva kolone spremeni, pokošeni del pa ostane nespremenjen. Tvorba plina je določena s prisotnostjo mehurčkov v stolpcu agarja. Kulture, ki razgradijo sečnino in tvorijo amoniak, dajejo alkalno reakcijo. V tem primeru se kislina, ki nastane med fermentacijo ogljikovih hidratov, nevtralizira, barva medija pa se ne spremeni. Razgradnja sečnine je značilna za proteje in nekatere bakterije Escherichia coli. Patogene enterobakterije ne razgrajujejo sečnine. Dodatek Mohrove soli in hiposulfita omogoča tudi preučevanje sposobnosti bakterij, da tvorijo vodikov sulfid s črnenjem v stolpcu agarja kot rezultat pretvorbe železovega sulfata v črni sulfid.

Za ekspresno metodo določanja encimske aktivnosti mikroorganizmov se uporabljajo mikrotestni sistemi in sistem indikatorskih papirjev (SIB). Mikrotestni sistem je prozorna polistirenska posoda, sestavljena iz več celic. Celice vsebujejo posušene hranilne medije z ogljikovimi hidrati in indikatorji pH. V vsako celico nacepimo suspenzijo bakterijske kulture določene gostote. Fizikalna raztopina se vlije v kontrolne celice. rešitev. Rezultat se upošteva po 3-4 urah inkubacije v termostatu po spremembi barve indikatorskega papirja (IPS) za identifikacijo družine enterobakterij so diski ali trakovi kromatografskega papirja, prevlečeni z zaščitno folijo. polivinil alkohol in vsebuje poseben substrat in indikator. V epruveto s fiziološko ali pufrsko raztopino dodamo polno zanko testne kulture ali kapljico goste mikrobne suspenzije, ki jo s prežgano pinceto vstavimo v diske. Kontrolnim epruvetam se ne dodaja bakterijska kultura. Rezultat se upošteva s spremembo barve indikatorja. Za določanje vodikovega sulfida se disk postavi v epruveto na površino MPA, zasejanega z injekcijo, kar omogoča sočasno določanje mobilnosti. V vseh epruvetah se upošteva preliminarni rezultat še isti dan, končni rezultat pa po 18 do 24 urah. Aktivnost oksidaze se določi z drgnjenjem kulture na indikatorski papir po 30-60 sekundah.

Izolacija čistih kultur aerobnih in anaerobnih bakterij. Naštejte principe in metode pridobivanja izoliranih kolonij aerobov. Metode izolacije čistih kultur anaerobov. Opišite Weinbergovo metodo dan za dnem.

Gojenje in izolacija čistih kultur aerobnih bakterij

Za gojenje mikroorganizmov so potrebni določeni pogoji: temperatura, aerobni ali anaerobni pogoji.

Temperatura mora biti optimalna za to vrsto. Večina patogenih bakterij se namnoži pri 37°C. Vendar pa so za nekatere vrste optimalne nižje temperature, kar je posledica posebnosti njihove ekologije. Tako je za bacil kuge, katerega naravni habitat so glodalci med hibernacijo, optimalna temperatura 28 ° C, za leptospiro pa za bacil botulizma - 28 ° C-35 ° C.

Razen optimalna temperatura, za gojenje mikroorganizmov je odvisno od vrste potrebno aerobno ali anaerobno okolje.

Za preučevanje morfologije, kulture, biokemijskih in drugih lastnosti mikrobov je potrebno pridobiti čisto kulturo. Običajno se kultura mikrobov nanaša na njihovo kopičenje na hranilnem mediju v obliki motnosti, rasti dna (stene) ali filma na površini tekočega medija ali kolonij na trdnem mediju. Iz ene mikrobne celice se oblikuje ločena kolonija. Čista kultura je kultura mikrobov ene vrste, pridobljena iz ene kolonije. V laboratorijih se za različne študije uporabljajo nekateri znani sevi mikrobov. Sev je čista kultura mikrobov, pridobljena iz določenega vira, ob določenem času, z znanimi lastnostmi. Mikrobni sevi so praviloma označeni z določeno številko. Na primer, za določanje aktivnosti penicilina se uporablja sev Staphylococcus aureus 209P.

Izolacija čistih aerobnih kultur običajno traja tri dni in se izvaja po naslednji shemi:

1. dan - mikroskopija razmaza iz testnega materiala, obarvanega (običajno po Gramu) - za predhodno seznanitev z mikrofloro, kar je lahko koristno pri izbiri hranilnega medija za inokulacijo. Nato se material nacepi na površino strjenega hranilnega agarja, da se pridobijo izolirane kolonije. Sejanje lahko izvedemo po metodi Drigalskega v tri petrijevke s hranilnim medijem. Kapljico materiala nanesemo na prvo skodelico in jo z lopatko razporedimo po celotni skodelici. Nato z isto lopatko nanjo porazdelimo preostali pridelek na drugo skodelico in na enak način na tretjo. Največje število kolonij bo raslo na prvi plošči, najmanjše - na tretji. Odvisno od tega, koliko mikrobnih celic je bilo v proučevanem materialu, bodo na eni od posod zrasle izolirane kolonije.

Enak rezultat lahko dosežemo s presejanjem ene skodelice. Če želite to narediti, skodelico razdelite na štiri sektorje. Preiskovani material se inokulira z bakteriološko zanko v progah na prvem sektorju, nato pa se po kalcinaciji in ohlajanju zanke inokulacija porazdeli iz prvega sektorja v drugega in na enak način zaporedoma v tretji in četrti sektor. Iz posameznih mikrobnih celic po vsakodnevni inkubaciji v termostatu nastanejo izolirane kolonije.

2. dan - študija kolonij, ki rastejo na posodah, in njihov opis. Kolonije so lahko prozorne, prosojne ali motne, imajo različne velikosti, zaobljene pravilne ali nepravilne obrise, konveksne oz ravna oblika, gladka ali hrapava površina, gladki ali valoviti, nazobčani robovi. Lahko so brezbarvne ali pa bele, zlate, rdeče, rumena. Na podlagi proučevanja teh značilnosti se gojene kolonije razdelijo v skupine. Nato iz študijske skupine izberemo izolirano kolonijo in pripravimo bris za mikroskopsko preiskavo, da preverimo homogenost mikrobov v koloniji. Isto kolonijo nacepimo v epruveto s poševnim hranilnim agarjem.

3. dan - preverjanje čistosti kulture, gojene na poševnem agarju, z mikroskopijo razmaza. Če so proučevane bakterije homogene, se lahko šteje, da je izolacija čiste kulture končana.

Za identifikacijo izoliranih bakterij se preučujejo kulturne značilnosti, to je vzorec rasti na tekočih in trdnih hranilnih medijih. Na primer, streptokoki tvorijo usedline na dnu in stenah na sladkorni juhi in majhne, ​​pikčaste kolonije na krvnem agarju; Vibrio cholerae tvori film na površini alkalne peptonske vode, prozorne kolonije pa na alkalnem agarju; Bacil kuge na hranilnem agarju tvori kolonije v obliki "čipkastih robčkov" z gosto sredino in tankimi valovitimi robovi, v tekočem hranilnem mediju pa film na površini, nato pa niti, ki segajo od njega v obliki "kapnikov". ”.

Gojenje in izolacija čistih kultur anaerobnih bakterij

Za gojenje anaerobov je potrebno zmanjšati redoks potencial medija in ustvariti anaerobiozo z odstranitvijo kisika s fizikalnimi, kemičnimi ali biološkimi metodami.

Fizične metode vključujejo:

1) mehansko odstranjevanje zraka s črpalko iz anae-rostata, v katerega so nameščene skodelice s pridelki. Hkrati lahko zrak nadomestite z ravnodušnim plinom: dušikom, vodikom, ogljikovim dioksidom.

2) rast v okolju, ki vsebuje redukcijske snovi. Kitta-Tarozzi medium je sladkorna juha s koščki jeter ali mesa. Glukoza in delci organov imajo redukcijsko sposobnost. Medij se na vrhu prelije s plastjo vazelinskega olja, da se prepreči dostop kisika iz zraka.

3) Najenostavnejši, a manj zanesljiv način- raste v globini visokega stolpca sladkornega agarja.

Kemične metode sestoji iz dejstva, da se posode z inokuliranimi anaerobi postavijo v hermetično zaprt eksikator, kjer so kemikalije, na primer pirogalol in alkalije, reakcija med katerimi poteka z absorpcijo kisika.

Biološka metoda temelji na hkratnem gojenju anaerobov in aerobov na trdnih hranilnih gojiščih v petrijevkah, ki jih po setvi hermetično zapremo. Najprej kisik absorbirajo rastoči aerobi, nato pa se začne rast anaerobov.

Izolacija čiste kulture anaerobov se začne z akumulacijo anaerobnih bakterij z nasaditvijo na gojišče Kitta-Tarozzi. Nato se izolirane kolonije pridobijo na enega od dveh načinov:

1) Inokulacija materiala se izvede z mešanjem s staljenim toplim sladkornim agarjem v steklenih epruvetah. Ko se agar strdi, v njegovi globini zrastejo izolirane kolonije, ki jih odstranimo z rezom epruvete in prenesemo na gojišče Kitt-Tarozzi (metoda Weinberg);

2) material nacepimo na posodice s hranilnim medijem in inkubiramo v anaerostatu. Izolirane kolonije, ki so zrasle na posodi, se subkulturirajo na gojišču Kitt-Tarozzi (metoda Zeissler).