Каква е целта на медиите за диференциална диагностика? Примери и принципи на тяхната работа

Диференциална диагностична среда - специални смеси от хранителни вещества, използвани за определяне на видовете микроби и изследване на техните свойства. Когато бактериите растат върху диференциална диагностична среда, възникват химични процеси поради наличието на различни ензими в микробната клетка. Някои от тях са способни да разграждат белтъчини, други са въглехидрати, трети са способни да предизвикват окислителни и редукционни реакции и т. н. Поради действието на ензимите настъпват съответни изменения в диференциално-диагностичната среда. Средите за диференциална диагностика могат да бъдат разделени на четири основни групи.

• 1. Среда, съдържаща протеин и разкриваща способността на микробите да разграждат протеини (протеолитични свойства): месо-пептонова желатинова "колона", подкислен конски или говежди серум, мляко, кръвен агар. При засяване на бактерии чрез пункция в месо-пептонен желатин, "колона" в случай на разцепване на протеин, се наблюдава втечняване на средата. При засяване върху среда със съсирена суроватка, разцепването на протеина се определя от разреждането на средата и образуването на вдлъбнатини по нейната повърхност. Разграждането на млякото от микроб се разкрива чрез избистряне или разтваряне на първоначално коагулираното мляко. Наличието на хемолитична активност на изследваната култура се проверява чрез засяването й в петриева паничка върху специален кръвен агар. В резултат на разрушаването на еритроцитите около колониите (например хемолитичен стрептокок или стафилокок) се образуват зони на просветление.
• 2. Среди за идентифициране на способността на микробите да разграждат въглехидрати и високоатомни алкохоли (среда Ендо, среда на Левин, среда на Ръсел, среда на Дригалски - Конради, среда на Рапопорт - Вайнтрауб, среда на Шустова). За идентифициране на тези свойства на микроорганизмите се използва и "пъстра" серия, тоест серия от епруветки, съдържащи хранителни среди, включително различни въглехидрати, многовалентни алкохоли и индикатор. Като индикатори се използват лакмусова тинктура или бромтимолово синьо. Разлагането на всеки от въглехидратите с образуването на киселина се открива чрез промяна в цвета на индикатора, образуването на газ е чрез напълване с газ и появата на специален стъклен поплавък в течна среда. Или използвайте полутечна среда Giss (вижте) с 0,5% агар със съответните захари и индикатор Andrade. След засяване на микроба върху тези среди, образуването на киселина се открива чрез зачервяване на средата, а образуването на газ се открива по появата на неговите мехурчета в агара или по разкъсването и изместването на агаровата колона нагоре. Диференциално диагностичните среди от втората група включват и нишестен агар, който служи за определяне на способността на микробите да разграждат нишестето, средата на Кларк и др.
• 3. Среда, която разкрива способността на микробите да обезцветяват добавените към бульона багрила: метиленово синьо, тионин, лакмус, индиго кармин, неутрално червено или други (средата на Ротбергер, средата на Омелянски). Третата група включва и среди с нитрати, които служат за определяне на способността на микробите да редуцират соли на азотна киселина (нитрати) в соли на азотна киселина (нитрити) и след това в амоняк или свободен азот.
• 4. Среди, които разкриват способността на микробите да абсорбират вещества, които не се абсорбират от други микроби, например среда с натриев цитрат (Саймънс цитратен агар) за разграничаване на E. coli, която няма способността да усвоява тази среда, от други бактерии на чревната група или среда на натриев олеат за диференциация на дифтериен бацил от фалшива дифтерия и дифтероиди (agarEngiering).

Диференциално диагностичните среди включват също среди за диференциране на анаероби, телуритни среди за диференциация на дифтерийни бактерии, среди с урея, алкални среди (Dieudonneagar) за култивиране на Vibrio cholerae и др.

Ендо сряда. Състои се от MPA с добавка на 1% лактоза и обезцветен с натриев сулфит основен фуксин (индикатор). Средата на Endo има леко розов цвят. Използва се при диагностициране на чревни инфекции, за да се разграничат бактериите, които разграждат лактозата до кисели продукти от бактерии, които нямат тази способност. Колониите от позитивни за лактоза микроби (E. coli) са червени поради намаляването на магента. Колониите от лактозо-отрицателни микроорганизми - салмонела, шигела и др. - са безцветни.

Средите за диференциална диагностика включват къс и разширен пъстър ред. Състои се от среда с въглехидрати (Giss media), MPB, мляко, месо-пептонен желатин.

Средите за шипове се приготвят на базата на пептонна вода, към която се добавят химически чисти моно-, ди- или полизахариди (глюкоза, лактоза, нишесте и др.).

Към средата се добавя индикатор за откриване на промени в рН поради образуване на киселина и разграждане на въглехидрати. При по-дълбоко разграждане на въглехидратите се образуват газообразни продукти (CO 2, CH 4 и др.), които се улавят с помощта на плувки - малки епруветки, спуснати в средата с главата надолу. Средите с въглехидрати могат да се приготвят и плътни - с добавяне на 0,5-1% агар-агар. След това образуването на газ се улавя чрез образуване на мехурчета (разкъсвания) в колоната на средата.

На BCH, който е част от пъстрата серия, се откриват продукти, които се образуват при разграждането на аминокиселини и пептони (индол, сероводород). Сероводородът се открива чрез поставяне на лента от филтърна хартия, импрегнирана с разтвор на оловен ацетат в BCH след засяване на културата. По време на разграждането на аминокиселините, съдържащи сяра, се отделя сероводород, хартията става черна поради образуването на оловен сулфид. За определяне на индол може да се използва комплексен индикатор. Индолът се образува от разграждането на триптофан и може да бъде открит чрез добавяне на този индикатор към култура, отглеждана върху BCH. В присъствието на индол MPB става зелен или син.

В практическите бактериологични лаборатории микро- и експресните методи се използват широко за приблизително изследване на биохимичните свойства на микроорганизмите. За тази цел има много тестови системи. Най-често използваната система от индикаторни хартии (NIB). NIBs са дискове от филтърна хартия, импрегнирани с разтвори на захари или други субстрати в комбинация с индикатори. Такива дискове се спускат в епруветка с култура, отглеждана в течна хранителна среда. Чрез промяна на цвета на диска със субстрата се преценява работата на ензима. Микротестовите системи за изследване на идентифицирането на ентеробактерии са представени от пластмасови контейнери за еднократна употреба със среда, съдържаща различни субстрати, с добавка на индикатори. Посяването на чиста култура от микроорганизми в такива тест системи ви позволява бързо да идентифицирате способността на бактериите да използват цитрати, глюкоза, захароза, да отделят амоняк, индол, да разлагат урея, лизин, фенилаланин и др.

Сухи среди. Хранителният агар, както и основните диференциално диагностични среди, в момента се произвеждат под формата на сухи препарати, съдържащи всички необходими компоненти. Към такива прахове трябва да се добави само вода и да се вари и след това, след изливане, да се стерилизира.

Диференциалните диагностични среди са специални смеси от хранителни вещества, използвани за определяне на видовете микроби и изследване на техните свойства. Когато бактериите растат върху диференциално диагностични среди, възникват химични процеси поради наличието на различни микробни клетки. Някои от тях са способни да се разпадат, други -, трети - да предизвикват окислителни и редукционни реакции и т.н. Поради действието на ензимите настъпват съответни промени в диференциално-диагностичната среда.

Средите за диференциална диагностика могат да бъдат разделени на четири основни групи.

Ориз. 1-6. Различни форми на смилане на желатин. Ориз. 7 - 9. Течна среда с въглехидрати и индикатор Andrade: фиг. 7 - няма ферментация; ориз. 8 - ферментация с образуване на киселина; ориз. 9 - ферментация с образуване на киселина и газ. Ориз. 10 - 12. Полутечна среда с въглехидрат и индикатор за кръвно налягане (от суха среда): фиг. 10 - няма ферментация; ориз. 11 - ферментация с образуване на киселина; ориз. 12 - ферментация с образуване на киселина и газ. Ориз. 13-15. Изкуствен лакмусов серум по Seitz: фиг. 13 - няма ферментация; ориз. 14 - ферментация с образуване на киселина; ориз. 15 - ферментация с образуване на. Ориз. 16 и 17. Мляко с метиленово синьо: фиг. 16 - без намаляване; ориз. 17 - намаляване. Ориз. 18 и 19. Среда на Симонс: фиг. 18 - няма асимилация на цитрат; ориз. 19 - асимилация на цитрат. Ориз. 20 - 24. Лакмусово мляко: фиг. 20 - няма ферментация; ориз. 21 - ферментация с образуване на киселина; ориз. 22 - ферментация с образуване на алкали; ориз. 23 - пептонизация; ориз. 24 - намаляване. Ориз. 25. Разреждане на коагулирана (в пропусната светлина). Ориз. 26. Хемолиза върху кръвен агар (в пропусната светлина). Ориз. 27. Кръвна среда с калиев телурит.

1. Среда, съдържаща протеин и разкриваща способността на микробите да разграждат протеини (протеолитични свойства): месо-пептонова "колона", подкислен конски или говежди серум, мляко, кръвен агар. При засяване на бактерии чрез пункция в месо-пептонен желатин, "колона" в случай на разцепване на протеин, се наблюдава втечняване на средата. При засяване върху среда със съсирена суроватка, разцепването на протеина се определя от разреждането на средата и образуването на вдлъбнатини по нейната повърхност. Разграждането на млякото от микроб се разкрива чрез избистряне или разтваряне на първоначално коагулираното мляко. Наличието на хемолитична активност на изследваната култура се проверява чрез засяването й в специален кръвен агар. В резултат на унищожаване около колониите (например хемолитични или) се образуват зони на просветление.

2. Среди за откриване на способността на микробите да разграждат въглехидрати и силно атомарни (среда Ендо, среда на Левин, среда на Ръсел, среда на Дригалски - среда на Конради, среда на Рапопорт - среда на Вайнтрауб, среда на Шустов). За идентифициране на тези свойства на микроорганизмите се използва и „пъстра“ серия, тоест серия от епруветки, съдържащи, включително различни въглехидрати, многовалентни алкохоли и индикатор. Като индикатори се използват лакмусова тинктура или бромтимолово синьо. Разлагането на всеки от въглехидратите с образуването на киселина се открива чрез промяна в цвета на индикатора, образуването на газ се открива чрез напълване с газ и появата на специален стъклен поплавък в течна среда. Или използвайте полутечна среда Giss (вижте) с 0,5% агар със съответните захари и индикатор Andrade. След засяване на микроба върху тези среди, образуването на киселина се открива чрез зачервяване на средата, а образуването на газ се открива по появата на неговите мехурчета в агара или по разкъсването и изместването на агаровата колона нагоре. Диференциално диагностичните среди от втората група включват и нишестен агар, който служи за определяне на способността на микробите да разграждат нишестето, средата на Кларк и др.

3. Среди, върху които се разкрива способността на микробите да обезцветяват добавените към бульона багрила: метиленово синьо, тионин, лакмус, неутрално червено или други (среда на Ротбергер, среда на Омелянски). Третата група включва и среди с нитрати, които служат за определяне на способността на микробите да редуцират соли на азотна киселина (нитрати) в соли на азотна киселина (нитрити) и след това в амоняк или свободен азот.

4. Среди, които разкриват способността на микробите да абсорбират вещества, които не се абсорбират от други микроби, например среда с натриев цитрат (Саймънс цитратен агар) за разграничаване на E. coli, която няма способността да усвоява тази среда, от други бактерии на чревната група или среда на натриев олеат за диференциация на дифтериен бацил от фалшива дифтерия и дифтероиди (Engiering агар).

Диференциалната диагностична среда включва също среди за диференциране на анаероби, телуритни среди за диференциация на дифтерийни бактерии, среди с урея, алкална среда (агар Dieudonne) за култивиране на Vibrio cholerae и др. Вижте също Идентификация на микробите.

ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИЧНА СРЕДА

диференциално диагностични среди, специални хранителни среди, използвани за идентифициране на микроорганизми, които имат селективна биохимична активност по отношение на определени вещества. В процеса на развитие микробите с помощта на ензими разграждат определени вещества, които са част от околната среда, което се установява при промяна в околната среда.

Редица патогенни микроорганизми разграждат въглехидратите, многовалентните алкохоли с образуването на киселини и газове (въглероден диоксид, водород, метан), което показва, че те принадлежат към определена група или вид бактерии. За да установите тези свойства, пригответе течност или полутечна Д.-г. С.с глюкоза, лактоза, захароза, маноза и други въглехидрати, многовалентни алкохоли (пъстра серия), с индикатори (Andrade, Giss), среда с мляко. Ензимната способност на микробите се определя от появата на газ или промяна в цвета на индикатора. Интензитетът на образуване на киселина от глюкоза се определя върху средата на Кларк, образуването на ацетилметилкарбонал - с помощта на реакцията на Voges-Proskauer, амилолитичната способност на микробите - върху нишестен агар. Протеолитичните свойства на микробите се определят върху среди, които не съдържат глюкоза и глицерин - месо-пептонен желатин, коагулиран конски серум, млечен агар. Месо-пептонният желатин се инокулира чрез убождане на дъното на епруветката, инкубира се при т 20-22°C и след това се определя степента на втечняване на желатина. Хемолитичната способност на микробите се установява чрез засяване върху кръвен агар или бульон с кръв. За определяне на намаляващата активност на използваните микроби Д.-г. С.с багрила (лакмус, индокармин, тионин и др.). Тъй като микробите растат, настъпва пълно или частично обезцветяване или обезцветяване на багрилото. Използват се и среди с нитрати, в които под въздействието на ензими на определени микроби нитратите се редуцират до нитрити и след това до амоняк или свободен азот.

Ветеринарен енциклопедичен речник. - М.: "Съветска енциклопедия". Главен редактор В.П. Шишков. 1981 .

Вижте какво е "ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИЧНА СРЕДА" в други речници:

Диференциална диагностична среда- специални смеси от хранителни вещества (виж Хранителни среди), върху които се отглеждат микроорганизми, за да се определи техния вид. До Д. д. включват протеинови среди, използвани за определяне на хемолитични и ... ...

Хранителни среди, субстрати, използвани за култивиране при изкуствени условия на микроорганизми и тъканни култури. В микробиологичната практика S. p. се използва широко за извършване на лабораторна диагностика на инфекциозни заболявания, за ... ... Ветеринарен енциклопедичен речник

Бактериологични хранителни среди- течни, полутечни или твърди субстрати, използвани за култивиране на микроорганизми в лабораторни или промишлени условия. Използват се за изолиране на бактерии, гъбички и протозои, чисти до r от биогенни или абиогенни обекти, за ... ... Речник по микробиология

Хранителни среди- течни или твърди среди, използвани за отглеждане на бактерии, дрожди, микроскопични гъби, водорасли, протозои, вируси и култури от растителни или животински клетки в лабораторни или промишлени условия. Синтетичен P. s. ... ... Голяма съветска енциклопедия

Съскане сряда- (Ph. H. Hiss, 1868 1913, американски бактериолог; синоним: пъстър ред, цветен ред) течни или полутечни диференциално диагностични хранителни среди, предназначени да идентифицират и диференцират бактериите според способността им да разграждат различни ... .. . Голям медицински речник

Макконки сряда- (A. Ma Conkey, 1861 1931, английски бактериолог) селективна диференциално диагностична хранителна среда за изолиране на бактерии от семейството. Enterobacteriaceae, напр. coli, съдържащ натриева таурохолева киселина и лактоза... Голям медицински речник

Хранителни среди- субстрати, състоящи се от компоненти, които осигуряват необходимите условия за култивиране на микроорганизми или натрупване на техните метаболитни продукти. Хранителните среди се различават по предназначение, консистенция и състав. Според предназначението им... Медицинска енциклопедия

Микробиологична диагностика- въз основа на идентифицирането на патогена или идентифицирането на имунния отговор на тялото на пациента към него. Началният етап на M.d. е събиране на материал и транспортиране на проби до лабораторията. Видът на материала за изследване се определя от характеристиките ... ... Медицинска енциклопедия

Лекарството- I Medicine Medicine е система от научни познания и практики, насочени към укрепване и поддържане на здравето, удължаване на живота на хората, както и профилактика и лечение на човешки заболявания. За да изпълни тези задачи, М. изучава структурата и ... ... Медицинска енциклопедия

анаеробни организми- Аеробните и анаеробните бактерии се идентифицират предварително в течна хранителна среда чрез градиент на концентрация на O2: 1. Задължителните аеробни (нуждаещи се от кислород) бактерии се събират главно в горната част на епруветката, за да абсорбират ... ... Wikipedia

За да се разграничат някои видове бактерии от други въз основа на тяхната ензимна активност, диференциално диагностични среди . Например обкръжението на Хис, обкръжението на Ендо, обкръжението на Левин, обкръжението на Плоскирев, обкръжението на Олкеницки. Средите на Ендо, Левин, Плоскирев в петриевите блюда се използват за диференциране на бактериите от чревната група според способността им да ферментират лактозата. Тези среди съдържат хранителен агар, лактоза и индикатор, който променя цвета си в кисела среда (pH индикатор). Ако в такава среда се засяват бактерии, ферментиращи лактоза, като Escherichia coli, в резултат на ферментация на лактоза се образува киселина и индикаторът ще промени цвета си в кисела среда. Следователно колониите на Escherichia coli върху такива среди ще бъдат оцветени според цвета на индикатора: на средата на Ендо и средата на Плоскирев - в червено, на средата на Левин - в черно и синьо. Ако върху тези среди се засяват бактерии, които не ферментират лактозата, например бацили на коремен тиф или дизентериен бацил, не се образува киселина, реакцията на средата ще остане слабо алкална и цветът на индикатора няма да се промени. Следователно, колониите от не-лактозна ферментиращи бактерии ще бъдат безцветни върху тези среди. Средата на Плоскирев също може да се припише на селективна среда за изолиране на дизентерийни пръчици, тъй като тази среда съдържа жлъчни соли, които инхибират растежа на Escherichia coli, и брилянтно зелено багрило, което инхибира растежа на въздушната кокова микрофлора. Бисмутов сулфитен агар е диференциална диагностична среда, използвана главно при диагностициране на салмонелоза. С нарастването на Salmonella, бисмутът се намалява от неговите соли и колониите на Salmonella стават черни. Диференциално диагностичните среди на Hiss ("пъстра" серия) се приготвят на базата на течна среда (пептонна вода) или полутечен месо-пептонен агар. Те съдържат всякакви въглехидрати или многовалентни алкохоли (лактоза, глюкоза, манитол, захароза) и индикатор, който променя цвета си в кисела среда. Стъклен поплавък се поставя в епруветка с течна среда на Hiss. Ако върху средата на Giss се посее микроб, който ферментира този въглехидрат с образуването на киселина и газ, тоест до крайните продукти, тогава средата ще промени цвета си, ще се появят мехурчета и празнини в агара в полу- течна среда и в течната среда ще се появи мехурче газ в поплавъка. Когато въглехидратът ферментира само до междинни продукти (до киселина), се получава само промяна в цвета на средата.Използват се и комбинирани среди, съдържащи не един въглехидрат, а два или три, например средата на Олкеницки е тризахарен агар с урея. Една епруветка със среда на Olkenitzky замества агаровата наклонена и Hiss среда с лактоза, захароза и глюкоза. Средата се приготвя на базата на не много плътен MPA. Съдържа лактоза (1%), захароза (1%), глюкоза (0,1%), урея, сол на Мор (железен сулфат), натриев хипосулфит и индикатор. След стерилизация средата се излива в епруветка в изправена форма, така че да се получи колона и скосена част. Сеитбата се извършва чрез щрих по скосената част и инжектиране в колона. При ферментация на въглехидрати, които присъстват в по-големи количества (лактоза, захароза или и двете), цветът на цялата среда се променя; при ферментация само на глюкоза цветът на колоната се променя, а скосената част остава непроменена. Образуването на газ се определя от наличието на мехурчета в колоната с агар. Културите, които разграждат уреята с образуването на амоняк, дават алкална реакция. В този случай киселината, образувана по време на ферментацията на въглехидратите, се неутрализира и цветът на средата не се променя. Разграждането на уреята е характерно за Proteus и някои Escherichia coli. Патогенните ентеробактерии не разграждат уреята. Добавянето на сол на Мор и хипосулфит също дава възможност да се изследва способността на бактериите да образуват сероводород чрез почерняване в колоната на агара в резултат на превръщането на железен сулфат в черен сулфид.

За експресния метод за определяне на ензимната активност на микроорганизмите се използват микротест системи и система от индикаторни хартии (SIB). Microtestsystem е контейнер, изработен от прозрачен полистирол, състоящ се от няколко клетки. Клетките съдържат изсушена ямкови среда с въглехидрати и pH индикатори. Във всяка клетка се инокулира суспензия от бактериална култура с определена плътност. Физическото се излива в контролните клетки. решение. Резултатът се взема предвид след 3-4-часова инкубация в термостат чрез промяна в цвета на индикатора Индикаторни хартиени системи (NIB) за идентифициране на семейството Enterobacteriaceae са дискове или ленти от хроматографска хартия, покрити със защитен филм от поливинил алкохол и съдържащи специфичен субстрат и индикатор. В епруветка с физиологичен или буферен разтвор се въвежда пълен цикъл от изследваната култура или капка гъста микробна суспензия, след което се поставя в дискове с изгорени пинсети. Културата на бактериите не се въвежда в контролните епруветки. Резултатът се взема предвид от промяната в цвета на индикатора. За определяне на сероводород дискът се поставя в епруветка на повърхността на MPA, инокулирана с инжекция, която ви позволява едновременно да определите подвижността. Във всички епруветки предварителният резултат се взема предвид в същия ден, а крайният - след осемнадесет - двадесет и четири часа. Оксидазната активност се определя чрез триене на културата върху индикаторна хартия след 30-60 секунди.

Изолиране на чисти култури от аеробни и анаеробни бактерии. Избройте принципите и методите за получаване на изолирани колонии от аероби. Методи за изолиране на чисти култури от анаероби. Опишете метода на Вайнберг по ден.

Култивиране и изолиране на чисти култури от аеробни бактерии

За отглеждането на микроорганизми са необходими определени условия: температура, аеробни или анаеробни условия.

Температурата трябва да е оптимална за този вид. Повечето патогенни бактерии се размножават при 37°C. За някои видове обаче по-ниска температура е оптимална, което е свързано с особеностите на тяхната екология. И така, за чумния бацил, чието естествено местообитание са гризачи по време на хибернация, оптималната температура е 28°C, както за лептоспирата, за бацила на ботулизъм - 28°C-35°C.

В допълнение към оптималната температура, за култивирането на микроорганизми, в зависимост от вида, е необходима аеробна или анаеробна среда.

За да се изследват морфологията, културните, биохимичните и други свойства на микробите, е необходимо да се получи чиста култура. Обикновено културата на микроби се отнася до тяхното натрупване върху хранителна среда под формата на мътност, близо до дъното (париетален) растеж или филм върху повърхността на течна среда или колонии върху плътна среда. От една микробна клетка се образува отделна колония. Чистата култура е култура от микроби от същия вид, получена от една колония. В лабораториите определени известни щамове микроби се използват за различни изследвания. Щамът е чиста култура от микроби, получена от конкретен източник, в определено време, с известни свойства. По правило щамовете микроби се обозначават с определен номер. Например, щамът Staphylococcus aureus 209P се използва за определяне на активността на пеницилина.

Изолирането на чисти култури от аероби обикновено отнема три дни и се извършва по следната схема:

Ден 1 - микроскопия на намазка от тестовия материал, оцветена (обикновено по Грам) - за предварително запознаване с микрофлората, което може да бъде полезно при избора на хранителна среда за инокулация. След това инокулиране на материала върху повърхността на втвърдения хранителен агар за получаване на изолирани колонии. Пресяването може да се извърши по метода на Дригалски върху три петриеви блюда с хранителна среда. Капка материал се нанася върху първата чаша и се разнася с шпатула върху цялата чаша. След това със същата шпатула културата, останала върху нея, се разпределя върху втората чаша и по същия начин върху третата. Най-голям брой колонии ще растат в първата чиния, а най-малко в третата. В зависимост от това колко микробни клетки са били в тестовия материал, изолирани колонии ще растат върху една от чашите.

Същият резултат може да се постигне и чрез пресяване в една чиния. За да направите това, разделете чашата на четири сектора. Изследваният материал се инокулира с бактериологична примка с щрихи върху първия сектор, след което, след калциниране и охлаждане на цикъла, посевът се разпределя от първия сектор към втория и по същия начин последователно към третия и четвъртия сектор. Изолирани колонии се образуват от отделни микробни клетки след ежедневно инкубиране в термостат.

2-ри ден - изследване на колониите, отглеждани върху плочите, тяхното описание. Колониите могат да бъдат прозрачни, полупрозрачни или непрозрачни, имат различни размери, заоблени правилни или неправилни очертания, изпъкнала или плоска форма, гладка или грапава повърхност, равни или вълнообразни, назъбени ръбове. Те могат да бъдат безцветни или да имат бял, златист, червен, жълт цвят. Въз основа на изследването на тези характеристики, отглежданите колонии се разделят на групи. След това от изследваната група се избира изолирана колония, приготвя се намазка за микроскопско изследване, за да се провери хомогенността на микробите в колонията. От същата колония инокулацията се извършва в епруветка с наклонен хранителен агар.

3-ти ден - проверка на чистотата на културата, отгледана върху наклонения агар чрез микроскопия на намазка. С хомогенността на изследваните бактерии изолирането на чиста култура може да се счита за завършено.

За идентифициране на изолираните бактерии се изследват културните характеристики, тоест естеството на растеж върху течни и твърди хранителни среди. Например стрептококите върху захарен бульон образуват придънна и париетална утайка, върху кръвен агар - малки, пунктирани колонии; холерният вибрион образува филм върху повърхността на алкална пептонна вода, а върху алкален агар - прозрачни колонии; Чумният бацил върху хранителен агар образува колонии под формата на "дантелени кърпички" с плътен център и тънки вълнообразни ръбове, а в течна хранителна среда - филм на повърхността и след това нишки, простиращи се от него под формата на "сталактити" .

Култивиране и изолиране на чисти култури от анаеробни бактерии

За отглеждането на анаероби е необходимо да се намали редокс потенциалът на околната среда, да се създаде анаеробиоза чрез отстраняване на кислорода чрез физични, химични или биологични методи.

Физическите методи включват:

1) механично отстраняване на въздуха с помощта на аеростатна помпа, в която се поставят чаши с култури. В същото време въздухът може да бъде заменен от безразличен газ: азот, водород, въглероден диоксид.

2) култивиране в среда, съдържаща редуциращи вещества. Medium Kitta-Tarozzi е захарен бульон с парченца черен дроб или месо. Глюкозата и части от органи имат редуцираща способност. Средата се излива отгоре със слой вазелиново масло, за да блокира достъпа на атмосферен кислород.

3) Най-простият, но по-малко надежден начин е да отглеждате висока колона захарен агар в дълбините.

Химическите методи се състоят във факта, че чашите с анаеробни култури се поставят в херметически затворен ексикатор, където се поставят химикали, например пирогалол и алкали, реакцията между които протича с абсорбцията на кислород.

Биологичният метод се основава на едновременното култивиране на анаероби и аероби върху плътни хранителни среди в петриеви блюда, херметически затворени след засяване. Първо, кислородът се поема от нарастващите аероби и след това започва растежът на анаеробите.

Изолирането на чиста култура от анаероби започва с натрупване на анаеробни бактерии чрез инокулация върху среда Kitt-Tarozzi. В бъдеще изолираните колонии се получават по един от двата начина:

1) инокулацията на материала се извършва чрез смесване с разтопен топъл захарен агар в стъклени епруветки. След втвърдяване на агара в дълбочината му растат изолирани колонии, които се отстраняват чрез срязване на епруветката и се инокулират в средата на Kitta-Tarozzi (метод на Weinberg);

2) инокулацията на материала се извършва върху чаши с хранителна среда и се инкубира в аеростат. Изолираните колонии, отглеждани върху чашата, се субкултивират върху среда Kitt-Tarozzi (метод на Zeissler).