Ayırıcı tanılama ortamları hangi amaçla kullanılır? Çalışmalarının örnekleri ve ilkeleri

Diferansiyel teşhis ortamları -- özel karışımlar besinler Mikrop türlerini belirlemek ve özelliklerini incelemek için kullanılır. Bakteriler ayırıcı tanı ortamlarında çoğaldığında, mikrobiyal hücrede çeşitli enzimlerin varlığına bağlı olarak kimyasal işlemler meydana gelir. Bazıları proteinleri parçalayabilir, diğerleri - karbonhidratlar, diğerleri - oksidasyon ve redüksiyon reaksiyonlarına vb. neden olabilir. Enzimlerin etkisi sayesinde, ayırıcı tanı ortamında karşılık gelen değişiklikler meydana gelir. Ayırıcı tanı ortamları dört ana gruba ayrılabilir.

• 1. Protein içeren ve mikropların proteinleri parçalama yeteneğini ortaya koyan ortam (proteolitik özellikler): et-pepton jelatin “kolonu”, pıhtılaşmış at veya sığır serumu, süt, kanlı agar. Bakterileri et-pepton jelatinine delerek aşılarken, bir "sütun" içinde protein parçalanması durumunda ortamın sıvılaşması gözlenir. Pıhtılaşmış peynir altı suyu içeren bir ortama aşılandığında protein parçalanması, ortamın sıvılaşması ve yüzeyinde çöküntülerin oluşmasıyla belirlenir. Sütün bir mikrop tarafından parçalanması, başlangıçta kesilen sütün temizlenmesi veya çözünmesiyle ortaya çıkar. Test kültürünün hemolitik aktivitesinin varlığı, özel bir kan agarına sahip bir Petri kabına aşılanarak kontrol edilir. Kolonilerin etrafındaki kırmızı kan hücrelerinin (örneğin hemolitik streptokok veya stafilokok) yok edilmesi sonucu temizleme bölgeleri oluşur.
• 2. Mikropların karbonhidratları ve yüksek atomlu alkolleri parçalama yeteneğini belirlemeye yönelik ortamlar (Endo ortamı, Levin ortamı, Russell ortamı, Drigalsky - Conradi ortamı, Rapoport - Weintraub ortamı, Shustov ortamı). Mikroorganizmaların bu özelliklerini tanımlamak için "alacalı" bir sıra da kullanılır; yani çeşitli karbonhidratlar, polihidrik alkoller ve bir gösterge dahil olmak üzere besin ortamlarını içeren bir dizi test tüpü. Gösterge olarak turnusol tentürü veya bromotimol mavisi kullanılır. Karbonhidratlardan herhangi birinin asit oluşumu ile ayrışması, göstergenin rengindeki bir değişiklikle tespit edilir; gaz oluşumu, gazın doldurulması ve özel bir cam şamandıranın sıvı bir ortamda yüzdürülmesiyle tespit edilir. Veya uygun şekerler ve Andrade göstergesi ile %0,5 agar içeren yarı sıvı Hiss ortamını (bkz.) kullanın. Mikrop bu ortamlara aşılandıktan sonra asit oluşumu ortamın kızarması ile, gaz oluşumu ise agarda kabarcıklarının ortaya çıkması veya agar kolonunun yırtılması ve yukarı doğru kayması ile tespit edilir. İkinci grubun ayırıcı tanı ortamı ayrıca mikropların nişastayı, Clark ortamını vb. parçalama yeteneğini belirlemek için kullanılan nişasta agarını da içerir.
• 3. Mikropların et suyuna eklenen boyaların rengini giderme yeteneğinin ortaya çıktığı ortam: metilen mavisi, tiyonin, turnusol, indigo karmin, nötr kırmızı veya diğerleri (Rothberger ortamı, Omelyansky ortamı). Üçüncü grup ayrıca mikropların tuzları azaltma yeteneğini belirlemek için kullanılan nitratlı ortamları da içerir. Nitrik asit(nitratlar) nitröz asit tuzlarına (nitritler) ve daha sonra amonyak veya serbest nitrojene dönüşür.
• 4. Mikropların, diğer mikroplar tarafından sindirilemeyen maddeleri asimile etme yeteneğini ortaya koyan ortamlar; örneğin, bu ortamı özümseme yeteneği olmayan Escherichia coli'yi diğer bakterilerden ayırt etmek için sodyum sitratlı bir ortam (Simons sitrat agar) difteri basilini sahte difteri ve difteroidlerden (Engering agar) ayırmak için bağırsak grubundan bir ortam veya sodyum oleik asit içeren bir ortam.

Ayırıcı tanı ortamları aynı zamanda anaerobları ayırt etmek için ortamları, difteri bakterilerini ayırt etmek için tellürit ortamlarını, üre içeren ortamları, alkali ortam(Dieudonnéagar) Vibrio cholerae vb.'nin yetiştirilmesi için.

Endo ortamı. %1 laktoz ve sodyum sülfit (gösterge) ile rengi giderilmiş bazik fuksin ilavesiyle MPA'dan oluşur. Endo ortamı hafif pembe bir renge sahiptir. Bağırsak enfeksiyonlarının tanısında, laktozu asidik ürünler oluşturmak üzere parçalayan bakterileri, bu yeteneğe sahip olmayan bakterilerden ayırmak için kullanılır. Laktoz pozitif mikropların (Escherichia coli) kolonileri, fuksinin indirgenmesi nedeniyle kırmızıdır. Laktoz negatif mikroorganizmaların kolonileri - salmonella, shigella, vb. - renksizdir.

Ayırıcı teşhis ortamları, kısa ve genişletilmiş bir rengarenk seriyi içerir. Karbonhidratlar (Hiss media), MPB, süt ve et-pepton jelatin içeren ortamlardan oluşur.

Hiss ortamı, kimyasal olarak saf mono-, di- veya polisakkaritlerin (glikoz, laktoz, nişasta vb.) Eklendiği pepton suyu bazında hazırlanır.

Asit oluşumu ve karbonhidratların ayrışması sonucu oluşan pH değişimlerini tespit etmek için ortama bir gösterge eklenir. Karbonhidratların daha derin bir şekilde parçalanmasıyla, şamandıralar - ortama baş aşağı indirilen küçük test tüpleri - kullanılarak yakalanan gazlı ürünler (CO2, CH4, vb.) oluşur. Karbonhidrat içeren ortamlar,% 0,5-1 agar-agar ilavesiyle yoğun olarak da hazırlanabilir. Daha sonra ortamın kolonunda kabarcıkların (kırılmaların) oluşmasıyla gaz oluşumu tespit edilir.

Rengarenk serinin bir parçası olan MPB'de amino asitlerin ve peptonların (indol, hidrojen sülfür) parçalanması sırasında oluşan ürünler bulunur. Hidrojen sülfit, kültürün ekilmesinden sonra kurşun asetat çözeltisine batırılmış bir filtre kağıdı şeridinin MPB'ye yerleştirilmesiyle tespit edilir. Kükürt içeren amino asitler parçalandığında hidrojen sülfit açığa çıkar ve kurşun sülfit oluşumu nedeniyle kağıt siyaha döner. İndolü belirlemek için karmaşık bir gösterge kullanılabilir. İndol, triptofanın parçalanmasıyla oluşur ve bu gösterge MPB üzerinde yetiştirilen bir kültüre eklendiğinde tespit edilebilir. İndol varlığında MPB yeşile veya maviye döner.

Pratik bakteriyolojik laboratuvarlarda, mikro ve ekspres yöntemler, mikroorganizmaların biyokimyasal özelliklerinin gösterge niteliğindeki bir çalışması için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu amaçla birçok test sistemi bulunmaktadır. En yaygın kullanılan gösterge kağıtları sistemi (SIB). SIB'ler, göstergelerle birlikte şeker veya diğer substratların çözeltileri ile emprenye edilmiş filtre kağıdı diskleridir. Bu tür diskler, sıvı bir besin ortamında yetiştirilen bir kültürün bulunduğu bir test tüpüne indirilir. Substratla birlikte diskin rengindeki değişiklik, enzimin işleyişini yargılamak için kullanılır. Enterobakterilerin tanımlanmasını incelemek için mikro test sistemleri tek kullanımlık olarak sunulmaktadır. plastik konteynırlar göstergelerin eklenmesiyle çeşitli substratlar içeren ortamlarla. Bu tür test sistemlerine saf bir mikroorganizma kültürünün ekilmesi, bakterilerin sitrat, glikoz, sükroz kullanma, amonyak salma, indol salma, üre, lizin, fenilalanin vb. ayrıştırma yeteneklerini hızlı bir şekilde tanımlamanıza olanak tanır.

Kuru ortamlar. Besin agarı ve ana diferansiyel teşhis ortamı şu anda gerekli tüm bileşenleri içeren kuru preparatlar formunda üretilmektedir. Bu tür tozlara sadece su ekleyip kaynatmanız ve ardından döktükten sonra sterilize etmeniz yeterlidir.

Ayırıcı teşhis ortamları, mikrop türlerini belirlemek ve özelliklerini incelemek için kullanılan özel besin karışımlarıdır. Bakteriler ayırıcı tanı besiyerinde çoğaldığında, mikrobiyal hücrede çeşitli bakterilerin varlığına bağlı olarak kimyasal işlemler meydana gelir. Bazıları parçalanma yeteneğine sahiptir, diğerleri - diğerleri - oksidasyon ve redüksiyon reaksiyonlarına neden olur, vb. Enzimlerin etkisi sayesinde, ayırıcı tanı ortamında karşılık gelen değişiklikler meydana gelir.

Ayırıcı tanı ortamları dört ana gruba ayrılabilir.

Pirinç. 1-6. Çeşitli şekiller jelatinin parçalanması. Pirinç. 7 - 9. Karbonhidrat ve Andrade indikatörlü sıvı besiyeri: şek. 7 - fermantasyon yok; pirinç. 8 - asit oluşumuyla fermantasyon; pirinç. 9 - asit ve gaz oluşumu ile fermantasyon. Pirinç. 10 - 12. Karbonhidrat ve KB göstergesi içeren yarı sıvı ortam (kuru besin ortamından): şek. 10 - fermantasyon yok; pirinç. 11 - asit oluşumu ile fermantasyon; pirinç. 12 - asit ve gaz oluşumu ile fermantasyon. Pirinç. 13-15. Seitz yapay turnusol serumu: Şek. 13 - fermantasyon yok; pirinç. 14 - asit oluşumu ile fermantasyon; pirinç. 15 - oluşumlu fermantasyon. Pirinç. 16 ve 17. Metilen mavili süt: şek. 16 - azalma eksikliği; pirinç. 17 - azaltma. Pirinç. 18 ve 19. Simons'un ortamı: şek. 18 - sitrat asimilasyonunun olmaması; pirinç. 19 - sitrat asimilasyonu. Pirinç. 20 - 24. Turnusol sütü: pirinç. 20 - fermantasyon yok; pirinç. 21 - asit oluşumu ile fermantasyon; pirinç. 22 - alkali oluşumu ile fermantasyon; pirinç. 23 - peptonizasyon; pirinç. 24 - azaltma. Pirinç. 25. Sarılmış bir ürünün sıvılaştırılması (iletilen ışıkta). Pirinç. 26. Kanlı agarda hemoliz (iletilen ışıkta). Pirinç. 27. Potasyum tellüritli kan ortamı.

1. Protein içeren ve mikropların proteinleri parçalama yeteneğini ortaya koyan ortam (proteolitik özellikler): et-pepton “kolonu”, pıhtılaşmış at veya sığır serumu, süt, kanlı agar. Bakterileri et-pepton jelatinine delerek aşılarken, bir "sütun" içinde protein parçalanması durumunda ortamın sıvılaşması gözlenir. Pıhtılaşmış peynir altı suyu içeren bir ortama aşılandığında protein parçalanması, ortamın sıvılaşması ve yüzeyinde çöküntülerin oluşmasıyla belirlenir. Sütün bir mikrop tarafından parçalanması, başlangıçta kesilen sütün temizlenmesi veya çözünmesiyle ortaya çıkar. Test kültürünün hemolitik aktivitesinin varlığı, özel bir kan agarına aşılanarak kontrol edilir. Kolonilerin çevresinde tahribat sonucu (örneğin hemolitik veya) temizleme bölgeleri oluşur.

2. Mikropların karbonhidratları ve yüksek atomlu olanları parçalama yeteneğini belirleyen ortamlar (Endo ortamı, Levin ortamı, Russell ortamı, Drigalsky - Conradi ortamı, Rapoport - Weintraub ortamı, Shustov ortamı). Mikroorganizmaların bu özelliklerini tanımlamak için "alacalı" bir seri, yani çeşitli karbonhidratlar, polihidrik alkoller ve bir gösterge içeren bir dizi test tüpü de kullanılır. Gösterge olarak turnusol tentürü veya bromotimol mavisi kullanılır. Karbonhidratlardan herhangi birinin asit oluşumu ile ayrışması, göstergenin rengindeki değişiklikle, gaz oluşumu ise gazın doldurulması ve özel bir cam şamandıranın sıvı bir ortamda yüzdürülmesiyle tespit edilir. Veya uygun şekerler ve Andrade göstergesi ile %0,5 agar içeren yarı sıvı Hiss ortamını (bkz.) kullanın. Mikrop bu ortamlara aşılandıktan sonra asit oluşumu ortamın kızarması ile, gaz oluşumu ise agarda kabarcıklarının ortaya çıkması veya agar kolonunun yırtılması ve yukarı doğru kayması ile tespit edilir. İkinci grubun ayırıcı tanı ortamı ayrıca mikropların nişastayı, Clark ortamını vb. parçalama yeteneğini belirlemek için kullanılan nişasta agarını da içerir.

3. Mikropların et suyuna eklenen boyaların rengini giderme yeteneğinin ortaya çıktığı ortam: metilen mavisi, tiyonin, turnusol, nötr kırmızı veya diğerleri (Rothberger ortamı, Omelyansky ortamı). Üçüncü grup ayrıca mikropların nitrik asit tuzlarını (nitratlar) nitröz asit tuzlarına (nitritler) ve daha sonra amonyak veya serbest nitrojene indirgeme yeteneğini belirlemek için kullanılan nitratlı ortamları da içerir.

4. Mikropların, diğer mikroplar tarafından sindirilemeyen maddeleri asimile etme yeteneğini ortaya koyan ortamlar; örneğin, bu ortamı özümseme yeteneği olmayan Escherichia coli'yi diğer bakterilerden ayırt etmek için sodyum sitratlı bir ortam (Simons sitrat agar) difteri basilini sahte difteri ve difteroidlerden (Engering agar) ayırmak için bağırsak grubundan bir ortam veya sodyum oleik asit içeren bir ortam.

Ayırıcı tanı ortamları aynı zamanda anaerobları ayırt etmeye yönelik ortamları, difteri bakterilerini ayırt etmeye yönelik tellürit ortamını, üre içeren ortamı, Vibrio cholerae'nin yetiştirilmesi için alkalin ortamı (Dieudonne agar) vb. içerir. Ayrıca bkz. Mikropların tanımlanması.

DİFERANSİYEL TEŞHİS ORTAMLARI

diferansiyel teşhis ortamı belirli maddelere karşı seçici biyokimyasal aktiviteye sahip mikroorganizmaları tanımlamak için kullanılan özel besin ortamı. Gelişim sürecinde mikroplar, enzimlerin yardımıyla ortamda bulunan ve ortamdaki değişikliklerle belirlenen bazı maddeleri parçalarlar.

Bir dizi patojenik mikroorganizma, karbonhidratları ve polihidrik alkolleri asit ve gaz (karbon dioksit, hidrojen, metan) oluşumuyla ayrıştırır, bu da bunların belirli bir gruba veya bakteri türüne ait olduklarını gösterir. Bu özellikleri oluşturmak için sıvı veya yarı sıvı hazırlayın D.-D. İle. glikoz, laktoz, sükroz, mannoz ve diğer karbonhidratlar, polihidrik alkoller (alacalı seriler), göstergeler (Andrade, Gissa), sütlü ortamlar ile. Mikropların enzimatik yeteneği, gazın ortaya çıkması veya indikatörün rengindeki değişiklik ile belirlenir. Glikozdan asit oluşumunun yoğunluğu Clark ortamı, Voges-Proskauer reaksiyonu kullanılarak asetilmetilkarbonal oluşumu ve mikropların nişasta agar üzerindeki amilolitik yeteneği ile belirlenir. Mikropların proteolitik özellikleri, glikoz ve gliserol, et-pepton jelatin, pıhtılaşmış at serumu ve süt agar içermeyen besiyerlerinde belirlenir. Et-pepton jelatin, test tüpünün dibine batırılarak aşılanır, T 2022°C ve ardından jelatinin sıvılaşma derecesini belirleyin. Mikropların hemolitik yeteneği, kanlı agar veya kan suyu üzerine ekim yapılarak belirlenir. Mikropların indirgeyici aktivitesini belirlemek için şunları kullanın: D.-D. İle. boyalarla (, turnusol, indidokarmin, tiyonin vb.). Mikroplar büyüdükçe boyanın renginde tam veya kısmi renk değişikliği veya değişiklik meydana gelir. Belirli mikropların enzimlerinin etkisi altında nitratların nitritlere ve daha sonra amonyak veya serbest nitrojene indirgendiği nitratlı ortamlar da kullanılır.

Veteriner ansiklopedik sözlüğü. - M .: "Sovyet Ansiklopedisi". Genel Yayın Yönetmeni V.P. Şişkov. 1981 .

Diğer sözlüklerde “DİFERANSİYEL TEŞHİS ORTAMLARI”nın ne olduğuna bakın:

Diferansiyel teşhis ortamları- Mikroorganizmaların türlerini belirlemek için yetiştirildiği özel besin karışımları (bkz. Besin ortamları). D.d.s'ye. hemolitik belirlemek için kullanılan protein ortamını içerir ve...

Besin ortamı, yetiştirme için kullanılan substratlar yapay koşullar Mikroorganizmalar ve doku kültürleri. Mikrobiyolojik uygulamada, S. p. bulaşıcı hastalıkların laboratuvar teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır... ... Veteriner ansiklopedik sözlüğü

Bakteriyolojik besin ortamı- Laboratuvar veya endüstriyel koşullarda mikroorganizmaların yetiştirilmesi için kullanılan sıvı, yarı sıvı veya katı substratlar. Saf bakteri, mantar ve protozoaları biyojenik veya abiojenik nesnelerden izole etmek için kullanılır. Mikrobiyoloji sözlüğü

Kültür medyası- laboratuvar veya endüstriyel koşullarda bakteri, maya, mikroskobik mantar, alg, protozoa, virüs ve bitki veya hayvan hücre kültürlerinin yetiştirilmesi için kullanılan sıvı veya katı besiyeri. Sentetik P. s.... ... Büyük Sovyet Ansiklopedisi

Gissa Çarşamba- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, Amerikalı bakteriyolog; eşanlamlı: rengarenk seri, renk serisi) bakterileri çeşitli ayrıştırma yeteneklerine göre tanımlamak ve ayırt etmek için tasarlanmış sıvı veya yarı sıvı diferansiyel teşhis besin ortamı... ... Büyük tıp sözlüğü

McConkey Çarşamba günleri- (A. Ma Conkey, 1861 1931, İngiliz bakteriyolog) ailenin bakterilerini izole etmek için seçici ayırıcı tanısal besin ortamı. Enterobakteriaceae, ör. sodyum taurokolik asit ve laktoz içeren coli... Büyük tıp sözlüğü

Besin ortamı- sağlayan bileşenlerden oluşan alt tabakalar gerekli koşullar Mikroorganizmaların yetiştirilmesi veya metabolik ürünlerinin birikmesi için. Besin ortamları amaç, tutarlılık ve bileşim açısından farklılık gösterir. Amaçlarına göre... ... Tıp ansiklopedisi

Mikrobiyolojik teşhis- Patojenin tanımlanmasına veya hastanın buna karşı bağışıklık tepkisinin belirlenmesine dayanır. İlk aşama MD malzeme seçimi ve numunelerin laboratuvara taşınmasıdır. Araştırma için kullanılacak materyalin türü, özelliklerine göre belirlenir... ... Tıp ansiklopedisi

İlaç- I Tıp Tıp bir bilimsel bilgi sistemidir ve pratik aktiviteler Amacı sağlığı güçlendirmek ve korumak, insanların ömrünü uzatmak, insan hastalıklarını önlemek ve tedavi etmektir. Bu görevleri gerçekleştirmek için M. yapıyı inceliyor ve... ... Tıp ansiklopedisi

Anaerobik organizmalar- Aerobik ve anaerobik bakteriler, sıvı besin ortamında O2 konsantrasyon gradyanı ile ön olarak tanımlanır: 1. Zorunlu aerobik (oksijen gerektiren) bakteriler esas olarak test tüpünün üst kısmında toplanır ve ... ... Vikipedi

Bazı bakteri türlerini diğerlerinden özelliklerine göre ayırt etmek enzimatik aktivite uygula diferansiyel teşhis ortamları . Örneğin Hiss ortamı, Endo ortamı, Levin ortamı, Ploskirev ortamı, Olkenitsky ortamı. Petri kaplarındaki Endo, Levin ve Ploskirev ortamları, bağırsak bakterilerini laktozu fermente etme yeteneklerine göre ayırt etmek için kullanılır. Bu besiyerleri besin agarı, laktoz ve asidik ortamda renk değiştiren bir gösterge (pH göstergesi) içerir. Laktozu fermente eden bakterileri, örneğin E. coli'yi böyle bir ortama aşılarsanız, laktozun fermantasyonu sonucunda asit oluşur ve asidik ortamda gösterge rengini değiştirir. Bu nedenle, bu tür ortamlardaki E. coli kolonileri göstergenin rengine göre renklendirilecektir: Endo besiyerinde ve Ploskirev besiyerinde kırmızı, Levin besiyerinde siyah ve mavi. Bu ortamları laktozu fermente etmeyen bakterilerle, örneğin tifo basili veya dizanteri basili ile aşılarsanız, asit oluşmayacak, ortamın reaksiyonu hafif alkali kalacak ve göstergenin rengi değişmeyecektir. Dolayısıyla laktozu fermente etmeyen bakteri kolonileri bu besiyerlerinde renksiz olacaktır. Ploskirev ortamı aynı zamanda dizanteri basillerinin izolasyonu için seçici bir ortam olarak da sınıflandırılabilir, çünkü bu ortam E. coli'nin büyümesini engelleyen safra tuzları ve havadaki kokkal mikrofloranın büyümesini engelleyen parlak yeşil bir boya içerir. Bizmut sülfit agar, esas olarak salmonelloz tanısında kullanılan ayırıcı tanı ortamıdır. Salmonella büyüdüğünde bizmutun tuzları azalır ve salmonella kolonileri siyaha döner. Hiss'in ayırıcı tanı ortamı (“alacalı” seri), sıvı bir ortam (peptonlu su) veya yarı sıvı et-pepton agar temelinde hazırlanır. Herhangi bir karbonhidrat veya polihidrik alkol (laktoz, glikoz, mannitol, sükroz) ve asidik ortamda renk değiştiren bir gösterge içerirler. Sıvı Hiss ortamı içeren bir test tüpüne bir cam şamandıra yerleştirilir. Belirli bir karbonhidratı asit ve gaz oluşumu ile fermente eden, yani nihai ürünlere, Hiss ortamına bir mikrop aşılarsanız, ortamın rengi değişecek, yarı sıvı bir ortamda kabarcıklar ve kırılmalar görünecektir. Agarın kalınlığı sıvı ortamda şamandırada bir gaz kabarcığı görünecektir. Bir karbonhidrat yalnızca ara ürünlere (asite) fermente edildiğinde, yalnızca ortamın renginde bir değişiklik meydana gelir, bir karbonhidrat değil, iki veya üç, örneğin Olkenitsky ortamı - üç şeker içeren kombine ortamlar da kullanılır. üre ile agar. Olkenicki ortamının bir tüpü, agar slantlarının ve Hiss ortamının yerini laktoz, sükroz ve glikozla değiştirir. Ortam çok yoğun olmayan MPA bazında hazırlanır. Laktoz (%1), sükroz (%1), glikoz (%0,1), üre, Mohr tuzu (ferröz sülfat), sodyum hiposülfit ve indikatör içerir. Sterilizasyondan sonra ortam, bir sütun ve eğik bir kısım oluşacak şekilde düzleştirilmiş bir biçimde bir test tüpüne dökülür. Ekim, eğimli kısım boyunca çizilerek ve bir sütuna batırılarak yapılır. İçerisindeki karbonhidratları fermente ederken Daha(laktoz, sakaroz veya her iki şeker), tüm ortamın rengi değişir; Yalnızca glikoz fermente edildiğinde sütunun rengi değişir ancak biçilen kısım değişmeden kalır. Gaz oluşumu agar sütunundaki kabarcıkların varlığıyla belirlenir. Üreyi parçalayarak amonyak oluşturan kültürler alkali reaksiyon verir. Bu durumda karbonhidratların fermantasyonu sırasında oluşan asit nötralize edilir ve ortamın rengi değişmez. Ürenin parçalanması Proteas ve bazı Escherichia coli'nin karakteristik özelliğidir. Patojenik enterobakteriler üreyi ayrıştırmaz. Mohr tuzu ve hiposülfitin eklenmesi, demir sülfatın siyah sülfüre dönüştürülmesinin bir sonucu olarak agar kolonunda kararma yoluyla bakterilerin hidrojen sülfit oluşturma yeteneğinin incelenmesini de mümkün kılar.

Mikroorganizmaların enzimatik aktivitesinin belirlenmesine yönelik hızlı bir yöntem için, mikro test sistemleri ve bir gösterge kağıtları sistemi (SIB) kullanılır. Mikrotest sistemi, birkaç hücreden oluşan şeffaf bir polistiren kaptır. Hücreler, karbonhidratlar ve pH göstergeleri içeren kurutulmuş besin ortamı içerir. Her hücreye belirli bir yoğunluktaki bakteri kültürü süspansiyonu aşılanır. Fiziksel çözelti kontrol hücrelerine dökülür. çözüm. Sonuç, bir termostatta 3-4 saatlik inkübasyonun ardından göstergenin rengindeki değişiklikle dikkate alınır. Enterobakteri ailesini tanımlamak için gösterge kağıt sistemleri (IPS), koruyucu bir film ile kaplanmış kromatografik kağıt diskleri veya şeritleridir. polivinil alkol ve spesifik bir substrat ve gösterge içerir. Fizyolojik veya tampon çözeltili bir test tüpüne, test kültüründen tam bir halka veya bir damla kalın mikrobiyal süspansiyon ekleyin, ardından yanmış cımbızla disklerin içine yerleştirin. Kontrol tüplerine bakteri kültürü eklenmez. Sonuç, göstergenin rengindeki değişiklikle dikkate alınır. Hidrojen sülfiti belirlemek için disk, enjeksiyonla tohumlanan bir MPA'nın yüzeyindeki bir test tüpüne yerleştirilir ve bu, hareketliliğin eşzamanlı olarak belirlenmesine olanak tanır. Tüm test tüplerinde ön sonuç aynı gün dikkate alınır ve nihai sonuç on sekiz ila yirmi dört saat sonra dikkate alınır. Oksidaz aktivitesi, kültürün 30-60 saniye sonra gösterge kağıdına sürülmesiyle belirlenir.

Aerobik ve anaerobik bakterilerin saf kültürlerinin izolasyonu. İzole edilmiş aerob kolonileri elde etmek için ilke ve yöntemleri listeleyin. Anaerobların saf kültürlerini izole etme yöntemleri. Weinberg'in yöntemini gün gün anlatın.

Aerobik bakteri saf kültürlerinin yetiştirilmesi ve izolasyonu

Mikroorganizmaları yetiştirmek için belirli koşullar gereklidir: sıcaklık, aerobik veya anaerobik koşullar.

Sıcaklık bu tür için optimal olmalıdır. Çoğu patojen bakteri 37°C'de çoğalır. Bununla birlikte, bazı türler için, ekolojilerinin özelliklerinden dolayı daha düşük sıcaklıklar optimaldir. Bu nedenle, doğal yaşam alanı kış uykusu sırasındaki kemirgenler olan veba basili için optimum sıcaklık 28°C'dir, ayrıca Leptospira için botulizm basili için optimum sıcaklık - 28°C-35°C'dir.

Hariç optimum sıcaklık Mikroorganizmaların yetiştirilmesi için türüne bağlı olarak aerobik veya anaerobik bir ortam gereklidir.

Mikropların morfolojisini, kültürel, biyokimyasal ve diğer özelliklerini incelemek için saf bir kültür elde etmek gerekir. Tipik olarak bir mikrobiyal kültür, bulanıklık, dip (duvar) büyümesi veya sıvı bir ortamın yüzeyinde bir film veya katı bir ortam üzerinde koloniler şeklinde bir besin ortamı üzerinde birikimleri olarak tanımlanır. Bir mikrobiyal hücreden ayrı bir koloni oluşur. Saf kültür, bir koloniden elde edilen bir türün mikroplarının kültürüdür. Laboratuvarlarda çeşitli çalışmalar için bilinen bazı mikrop türleri kullanılmaktadır. Bir suş, belirli bir kaynaktan, belirli bir zamanda elde edilen ve özellikleri bilinen saf bir mikrop kültürüdür. Kural olarak mikrobiyal suşlar belirli bir sayıyla belirtilir. Örneğin penisilinin aktivitesini belirlemek için Staphylococcus aureus 209P suşu kullanılır.

Saf aerobik kültürlerin izolasyonu genellikle üç gün sürer ve aşağıdaki şemaya göre gerçekleştirilir:

1. Gün - mikroflorayı önceden tanımak için boyanmış (genellikle Gram ile) test materyalinden bir yaymanın mikroskopisi; bu, aşılama için bir besin ortamı seçiminde yararlı olabilir. Daha sonra materyal, izole edilmiş koloniler elde etmek için katılaşmış besin agarının yüzeyine aşılanır. Eleme, Drigalski yöntemi kullanılarak besin ortamına sahip üç Petri kabına yapılabilir. Birinci bardağa bir damla malzeme damlatılır ve bir spatula yardımıyla bardağın tamamına yayılır. Daha sonra aynı spatula ile kalan mahsulü ikinci bardağa ve aynı şekilde üçüncü bardağa dağıtın. En fazla koloni sayısı birinci plakada, en küçüğü ise üçüncü plakada büyüyecektir. İncelenen materyalde kaç mikrobiyal hücre bulunduğuna bağlı olarak, kaplardan birinde izole edilmiş koloniler gelişecektir.

Aynı sonuç bir bardağa elenerek de elde edilebilir. Bunu yapmak için bardağı dört sektöre bölün. İncelenen malzeme birinci sektördeki şeritler halinde bakteriyolojik bir döngü ile aşılanır, daha sonra döngünün kalsine edilmesi ve soğutulmasından sonra aşılama birinci sektörden ikinciye ve aynı şekilde sırayla üçüncü ve dördüncü sektörlere dağıtılır. İzole edilmiş koloniler, bir termostatta günlük inkübasyonun ardından bireysel mikrobiyal hücrelerden oluşturulur.

2. Gün - tabaklarda büyüyen kolonilerin incelenmesi ve bunların tanımlanması. Koloniler şeffaf, yarı saydam veya opak olabilir. çeşitli boyutlar, yuvarlak düzenli veya düzensiz hatlar, dışbükey veya Düz şekil, pürüzsüz veya pürüzlü yüzey, pürüzsüz veya dalgalı, pürüzlü kenarlar. Renksiz olabilirler veya beyaz, altın rengi, kırmızı, sarı. Bu özelliklerin incelenmesine dayanarak, yetiştirilen koloniler gruplara ayrılır. Daha sonra çalışma grubundan izole bir koloni seçilir ve kolonideki mikropların homojenliğini kontrol etmek amacıyla mikroskobik inceleme için smear hazırlanır. Aynı koloni, eğimli besinli agar içeren bir test tüpüne aşılanır.

3. Gün - agar slantı üzerinde yetiştirilen kültürün saflığının smear mikroskobu ile kontrol edilmesi. İncelenen bakteriler homojen ise saf kültürün izolasyonunun tamamlanmış olduğu düşünülebilir.

İzole edilmiş bakterileri tanımlamak için kültürel özellikler, yani sıvı ve katı besin ortamlarındaki büyüme modeli incelenir. Örneğin, streptokoklar şekerli besiyerinde dip ve duvar çökeltileri, kanlı agarda ise küçük, nokta şeklinde koloniler oluşturur; Vibrio cholerae, alkali peptonlu suyun yüzeyinde bir film ve alkalin agar üzerinde şeffaf koloniler oluşturur; Besleyici agar üzerindeki veba basili, yoğun bir merkeze ve ince dalgalı kenarlara sahip "dantel mendiller" şeklinde ve sıvı bir besin ortamında - yüzeyde bir film ve ardından ondan "sarkıt şeklinde uzanan iplikler" şeklinde koloniler oluşturur. ”.

Saf anaerobik bakteri kültürlerinin yetiştirilmesi ve izolasyonu

Anaerobların yetiştirilmesi için ortamın redoks potansiyelini azaltmak ve fiziksel, kimyasal veya biyolojik yöntemlerle oksijeni uzaklaştırarak anaerobiyoz oluşturmak gerekir.

Fiziksel yöntemler şunları içerir:

1) içine mahsullerin bulunduğu kapların yerleştirildiği anae-rostattan bir pompa kullanılarak havanın mekanik olarak uzaklaştırılması. Aynı zamanda havayı kayıtsız bir gazla değiştirebilirsiniz: nitrojen, hidrojen, karbondioksit.

2) indirgeyici maddeler içeren bir ortamda büyümek. Kitta-Tarozzi ortamı, karaciğer veya et parçaları içeren şekerli bir et suyudur. Glikoz ve organ parçalarını indirgeme özelliği vardır. Hava oksijeninin erişimini engellemek için ortamın üstüne bir Vazelin yağı tabakası dökülür.

3) En basit ama daha az güvenilir yol- yüksek bir şeker agar sütununun derinliklerinde büyüyor.

Kimyasal yöntemler aşılanmış anaeroblara sahip kapların, aralarında oksijenin emilmesiyle oluşan reaksiyonun örneğin pirogallol ve alkali gibi kimyasalların yerleştirildiği hava geçirmez şekilde kapatılmış bir kurutucuya yerleştirilmesinden oluşur.

Biyolojik yöntem Ekimden sonra hava geçirmez şekilde kapatılmış Petri kaplarındaki katı besin ortamlarında anaerob ve aerobların eş zamanlı yetiştirilmesine dayanmaktadır. Önce oksijen büyüyen aeroblar tarafından emilir ve ardından anaerobların büyümesi başlar.

Saf bir anaerob kültürünün izolasyonu, Kitta-Tarozzi ortamına aşılama yoluyla anaerobik bakterilerin birikmesiyle başlar. Daha sonra izole edilmiş koloniler iki yoldan biriyle elde edilir:

1) Malzemenin aşılanması, cam tüplerde erimiş ılık şeker agarı ile karıştırılarak gerçekleştirilir. Agar sertleştikten sonra derinliklerinde izole edilmiş koloniler büyür, bunlar tüpün kesilmesiyle çıkarılır ve Kitt-Tarozzi ortamına (Weinberg yöntemi) aktarılır;

2) materyal, besin ortamına sahip tabaklara aşılanır ve bir anaerostatta inkübe edilir. Bir kap üzerinde büyütülen izole koloniler, Kitt-Tarozzi ortamına (Zeissler yöntemi) alt kültüre edilir.