Para sa anong layunin ginagamit ang mga differential diagnostic na kapaligiran? Mga halimbawa at prinsipyo ng kanilang gawain

Differential diagnostic na kapaligiran -- mga espesyal na mixtures sustansya, ginagamit upang matukoy ang mga species ng microbes at pag-aralan ang kanilang mga katangian. Kapag lumalaki ang bakterya sa differential diagnostic media, nangyayari ang mga kemikal na proseso dahil sa pagkakaroon ng iba't ibang enzyme sa microbial cell. Ang ilan sa kanila ay may kakayahang masira ang mga protina, ang iba - carbohydrates, ang iba pa - na nagiging sanhi ng oksihenasyon at pagbabawas ng mga reaksyon, atbp Dahil sa pagkilos ng mga enzyme, ang mga kaukulang pagbabago ay nangyayari sa kaugalian na diagnostic na kapaligiran. Ang mga kapaligiran ng differential diagnostic ay maaaring nahahati sa apat na pangunahing grupo.

• 1. Media na naglalaman ng protina at inilalantad ang kakayahan ng mga microbes na masira ang mga protina (proteolytic properties): meat-peptone gelatin "column", coagulated horse o bovine serum, gatas, blood agar. Kapag ang inoculating bacteria sa pamamagitan ng pagbutas sa meat-peptone gelatin, sa isang "haligi", sa kaso ng pagkasira ng protina, ang liquefaction ng medium ay sinusunod. Kapag inoculated sa isang medium na may coagulated whey, ang pagkasira ng protina ay natutukoy sa pamamagitan ng pagkatunaw ng medium at ang pagbuo ng mga depressions sa ibabaw nito. Ang pagkasira ng gatas sa pamamagitan ng isang mikrobyo ay ipinahayag sa pamamagitan ng pag-clear o pagkatunaw ng unang curdled na gatas. Ang pagkakaroon ng aktibidad ng hemolytic ng kultura ng pagsubok ay nasuri sa pamamagitan ng pag-inoculate nito sa isang Petri dish sa isang espesyal na agar ng dugo. Bilang resulta ng pagkasira ng mga pulang selula ng dugo sa paligid ng mga kolonya (halimbawa, hemolytic streptococcus o staphylococcus), nabuo ang mga clearing zone.
• 2. Media para sa pagtukoy sa kakayahan ng mga microbes na masira ang mga carbohydrate at high-atomic na alkohol (Endo medium, Levin medium, Russell medium, Drigalsky - Conradi medium, Rapoport - Weintraub medium, Shustov medium). Upang matukoy ang mga katangiang ito ng mga microorganism, ginagamit din ang isang "variegated" na hilera, ibig sabihin, isang serye ng mga test tube na naglalaman ng nutrient media, kabilang ang iba't ibang carbohydrates, polyhydric alcohol at isang indicator. Ang litmus tincture o bromothymol blue ay ginagamit bilang mga indicator. Ang agnas ng alinman sa mga carbohydrates na may pagbuo ng acid ay napansin sa pamamagitan ng isang pagbabago sa kulay ng indicator; O gumamit ng semi-liquid Hiss media (tingnan) na may 0.5% agar na may naaangkop na sugars at Andrade indicator. Pagkatapos ng inoculating ang mikrobyo sa media na ito, ang pagbuo ng acid ay napansin sa pamamagitan ng pamumula ng daluyan, at ang pagbuo ng gas sa pamamagitan ng paglitaw ng mga bula nito sa agar o sa pamamagitan ng pagkalagot at pataas na paglipat ng haligi ng agar. Kasama rin sa differential diagnostic media ng pangalawang grupo ang starch agar, na ginagamit upang matukoy ang kakayahan ng mga microbes na masira ang starch, medium ng Clark, atbp.
• 3. Media kung saan ang kakayahan ng mga microbes na mag-decolorize ng mga tina na idinagdag sa sabaw ay ipinahayag: methylene blue, thionine, litmus, indigo carmine, neutral red o iba pa (Rothberger's medium, Omelyansky's medium). Kasama rin sa ikatlong grupo ang media na may nitrates, na ginagamit upang matukoy ang kakayahan ng mga mikrobyo na bawasan ang mga asin nitric acid(nitrates) sa mga nitrous acid salts (nitrites) at pagkatapos ay sa ammonia o libreng nitrogen.
• 4. Media na nagpapakita ng kakayahan ng mga microbes na mag-assimilate ng mga substance na hindi natutunaw ng ibang microbes, halimbawa, isang medium na may sodium citrate (Simons citrate agar) upang makilala ang Escherichia coli, na walang kakayahang i-assimilate ang medium na ito, mula sa iba pang bacteria ng pangkat ng bituka, o isang daluyan na may sodium oleic acid para sa pagkakaiba ng diphtheria bacillus mula sa false diphtheria at diphtheroids (Engering agar).

Kasama rin sa differential diagnostic media ang media para sa pagkakaiba-iba ng mga anaerobes, tellurite media para sa pag-iiba ng diphtheria bacteria, media na may urea, alkalina na media(Dieudonnéagar) para sa paglilinang ng Vibrio cholerae, atbp.

Endo na kapaligiran. Binubuo ng MPA na may pagdaragdag ng 1% lactose at basic fuchsin (indicator) na na-decolorize ng sodium sulfite. Ang endo medium ay may bahagyang kulay rosas na kulay. Ginagamit sa pag-diagnose ng mga impeksyon sa bituka upang pag-iba-ibahin ang bacteria na nabubulok ang lactose upang bumuo ng mga acidic na produkto mula sa bacteria na walang ganitong kakayahan. Ang mga kolonya ng lactose-positive microbes (Escherichia coli) ay pula dahil sa pagbawas ng fuchsin. Ang mga kolonya ng lactose-negative na microorganism - salmonella, shigella, atbp. - ay walang kulay.

Kasama sa mga differential diagnostic environment ang isang maikli at pinahabang serye ng motley. Binubuo ito ng media na may carbohydrates (Hiss media), MPB, gatas, at meat-peptone gelatin.

Ang hiss media ay inihanda sa batayan ng peptone water, kung saan ang chemically pure mono-, di- o polysaccharides (glucose, lactose, starch, atbp.) ay idinagdag.

Upang makita ang mga pagbabago sa pH bilang isang resulta ng pagbuo ng mga acid at ang agnas ng carbohydrates, isang tagapagpahiwatig ay idinagdag sa media. Sa isang mas malalim na pagkasira ng mga karbohidrat, ang mga produktong gas (CO 2, CH 4, atbp.) Ay nabuo, na nakuha gamit ang mga float - maliliit na tubo ng pagsubok na ibinaba nang baligtad sa daluyan. Ang media na may carbohydrates ay maaari ding ihanda bilang mga siksik - kasama ang pagdaragdag ng 0.5-1% agar-agar. Pagkatapos ang pagbuo ng gas ay napansin sa pamamagitan ng pagbuo ng mga bula (mga break) sa haligi ng daluyan.

Sa MPB, na bahagi ng serye ng motley, matatagpuan ang mga produktong nabuo sa panahon ng pagkasira ng mga amino acid at peptone (indole, hydrogen sulfide). Natutukoy ang hydrogen sulfide sa pamamagitan ng paglalagay ng isang strip ng filter na papel na binabad sa isang solusyon ng lead acetate sa MPB pagkatapos ng paghahasik ng kultura. Kapag ang mga amino acid na naglalaman ng sulfur ay nasira, ang hydrogen sulfide ay inilabas, at ang papel ay nagiging itim dahil sa pagbuo ng lead sulfide. Ang isang kumplikadong tagapagpahiwatig ay maaaring gamitin upang matukoy ang indole. Ang Indole ay nabuo sa pamamagitan ng pagkasira ng tryptophan at maaaring matukoy kapag ang tagapagpahiwatig na ito ay idinagdag sa isang kulturang lumaki sa MPB. Sa pagkakaroon ng indole, ang MPB ay nagiging berde o asul.

Sa mga praktikal na laboratoryo ng bacteriological, ang mga micro- at express na pamamaraan ay malawakang ginagamit para sa isang indikatibong pag-aaral ng mga biochemical na katangian ng mga microorganism. Mayroong maraming mga sistema ng pagsubok para sa layuning ito. Ang pinakakaraniwang ginagamit na sistema ng mga indicator paper (SIB). Ang mga SIB ay mga disk ng filter na papel na pinapagbinhi ng mga solusyon ng mga asukal o iba pang mga substrate kasama ng mga tagapagpahiwatig. Ang mga nasabing disk ay ibinababa sa isang test tube na may kultura na lumago sa isang likidong nutrient medium. Ang pagbabago sa kulay ng disk na may substrate ay ginagamit upang hatulan ang paggana ng enzyme. Ang mga micro-test system para sa pag-aaral ng pagkakakilanlan ng enterobacteria ay ipinakita bilang disposable Lalagyang plastik na may media na naglalaman ng iba't ibang mga substrate, kasama ang pagdaragdag ng mga tagapagpahiwatig. Ang paghahasik ng isang purong kultura ng mga mikroorganismo sa naturang mga sistema ng pagsubok ay nagbibigay-daan sa mabilis mong matukoy ang kakayahan ng bakterya na gumamit ng citrates, glucose, sucrose, pagpapalabas ng ammonia, indole, decompose urea, lysine, phenylalanine, atbp.

Mga tuyong kapaligiran. Ang nutrient agar, pati na rin ang pangunahing differential diagnostic media, ay kasalukuyang ginawa sa anyo ng mga tuyong paghahanda na naglalaman ng lahat ng kinakailangang sangkap. Sa gayong mga pulbos kailangan mo lamang magdagdag ng tubig at pakuluan ang mga ito, at pagkatapos, pagkatapos ibuhos, isteriliser ang mga ito.

Ang differential diagnostic media ay mga espesyal na pinaghalong nutrients na ginagamit upang matukoy ang mga species ng microbes at pag-aralan ang kanilang mga katangian. Kapag lumalaki ang bakterya sa differential diagnostic media, nangyayari ang mga kemikal na proseso dahil sa pagkakaroon ng iba't ibang bakterya sa microbial cell. Ang ilan sa mga ito ay may kakayahang masira, ang iba -, ang iba pa - na nagiging sanhi ng mga reaksyon ng oksihenasyon at pagbabawas, atbp. Salamat sa pagkilos ng mga enzyme, ang mga kaukulang pagbabago ay nagaganap sa kaugalian na diagnostic na kapaligiran.

Ang mga kapaligiran ng differential diagnostic ay maaaring nahahati sa apat na pangunahing grupo.

kanin. 1-6. Iba't ibang hugis pagkasira ng gulaman. kanin. 7 - 9. Liquid medium na may carbohydrate at Andrade indicator: fig. 7 - walang pagbuburo; kanin. 8 - pagbuburo na may pagbuo ng acid; kanin. 9 - pagbuburo sa pagbuo ng acid at gas. kanin. 10 - 12. Semi-liquid medium na may carbohydrate at BP indicator (mula sa dry nutrient medium): fig. 10 - walang pagbuburo; kanin. 11 - pagbuburo na may pagbuo ng acid; kanin. 12 - pagbuburo sa pagbuo ng acid at gas. kanin. 13-15. Seitz artipisyal na litmus serum: Fig. 13 - walang pagbuburo; kanin. 14 - pagbuburo na may pagbuo ng acid; kanin. 15 - pagbuburo na may pagbuo. kanin. 16 at 17. Gatas na may methylene blue: fig. 16 - kakulangan ng pagbawas; kanin. 17 - pagbabawas. kanin. 18 at 19. Midyum ni Simons: fig. 18 - kakulangan ng citrate assimilation; kanin. 19 - citrate assimilation. kanin. 20 - 24. Litmus milk: kanin. 20 - walang pagbuburo; kanin. 21 - pagbuburo na may pagbuo ng acid; kanin. 22 - pagbuburo sa pagbuo ng alkali; kanin. 23 - peptonization; kanin. 24 - pagbabawas. kanin. 25. Liquefaction ng isang coiled product (sa transmitted light). kanin. 26. Hemolysis sa blood agar (sa transmitted light). kanin. 27. Blood medium na may potassium tellurite.

1. Media na naglalaman ng protina at inilalantad ang kakayahan ng mga microbes na masira ang mga protina (proteolytic properties): meat-peptone "column", coagulated horse o bovine serum, gatas, blood agar. Kapag ang inoculating bacteria sa pamamagitan ng pagbutas sa meat-peptone gelatin, sa isang "haligi", sa kaso ng pagkasira ng protina, ang liquefaction ng medium ay sinusunod. Kapag inoculated sa isang medium na may coagulated whey, ang pagkasira ng protina ay natutukoy sa pamamagitan ng pagkatunaw ng medium at ang pagbuo ng mga depressions sa ibabaw nito. Ang pagkasira ng gatas sa pamamagitan ng isang mikrobyo ay ipinahayag sa pamamagitan ng pag-clear o pagkatunaw ng unang curdled na gatas. Ang pagkakaroon ng hemolytic na aktibidad ng kultura ng pagsubok ay sinuri sa pamamagitan ng inoculating ito sa isang espesyal na agar ng dugo. Bilang resulta ng pagkasira sa paligid ng mga kolonya (halimbawa, hemolytic o) mga clearing zone ay nabuo.

2. Media para sa pagtukoy ng kakayahan ng mga microbes na masira ang mga carbohydrate at mga high-atomic (Endo medium, Levin medium, Russell medium, Drigalsky - Conradi medium, Rapoport - Weintraub medium, Shustov medium). Upang matukoy ang mga katangiang ito ng mga mikroorganismo, ginagamit din ang isang "variegated" na serye, iyon ay, isang serye ng mga test tube na naglalaman ng iba't ibang carbohydrates, polyhydric alcohol at isang indicator. Ang litmus tincture o bromothymol blue ay ginagamit bilang mga tagapagpahiwatig. Ang agnas ng alinman sa mga carbohydrates na may pagbuo ng acid ay napansin ng isang pagbabago sa kulay ng tagapagpahiwatig, ang pagbuo ng gas ay napansin ng pagpuno ng gas at ang lumulutang ng isang espesyal na glass float sa isang likidong daluyan. O gumamit ng semi-liquid Hiss media (tingnan) na may 0.5% agar na may naaangkop na sugars at Andrade indicator. Pagkatapos ng inoculating microbe sa media na ito, ang pagbuo ng acid ay napansin sa pamamagitan ng pamumula ng medium, at ang pagbuo ng gas sa pamamagitan ng paglitaw ng mga bula nito sa agar o sa pamamagitan ng pagkalagot at pataas na paglipat ng haligi ng agar. Kasama rin sa differential diagnostic media ng pangalawang grupo ang starch agar, na ginagamit upang matukoy ang kakayahan ng mga microbes na masira ang starch, medium ng Clark, atbp.

3. Media kung saan ang kakayahan ng mga microbes na mag-decolorize ng mga tina na idinagdag sa sabaw ay ipinahayag: methylene blue, thionine, litmus, neutral red o iba pa (Rothberger's medium, Omelyansky's medium). Kasama rin sa ikatlong grupo ang media na may nitrates, na ginagamit upang matukoy ang kakayahan ng mga mikrobyo na bawasan ang mga asing-gamot ng nitric acid (nitrates) sa mga asing-gamot ng nitrous acid (nitrites) at pagkatapos ay sa ammonia o libreng nitrogen.

4. Media na nagpapakita ng kakayahan ng mga microbes na mag-assimilate ng mga substance na hindi natutunaw ng ibang microbes, halimbawa, isang medium na may sodium citrate (Simons citrate agar) upang makilala ang Escherichia coli, na walang kakayahang i-assimilate ang medium na ito, mula sa iba pang bacteria ng bituka na grupo, o isang daluyan na may sodium oleic acid para sa pagkakaiba ng diphtheria bacillus mula sa maling diphtheria at diphtheroids (Engering's agar).

Kasama rin sa differential diagnostic media ang media para sa pag-iiba ng anaerobes, tellurite media para sa pag-iiba ng diphtheria bacteria, media na may urea, alkaline media (Dieudonne agar) para sa paglilinang ng Vibrio cholerae, atbp. Tingnan din ang Pagkilala sa mga mikrobyo.

IBANG DIAGNOSTIKONG KAPALIGIRAN

differential diagnostic media, espesyal na nutrient media na ginagamit upang matukoy ang mga mikroorganismo na may pumipiling biochemical na aktibidad patungo sa ilang mga sangkap. Sa panahon ng kanilang pag-unlad, ang mga mikrobyo, sa tulong ng mga enzyme, ay sumisira sa ilang mga sangkap na nakapaloob sa kapaligiran, na tinutukoy ng mga pagbabago sa kapaligiran.

Ang isang bilang ng mga pathogenic microorganism ay nabubulok ang mga carbohydrate at polyhydric na alkohol na may pagbuo ng mga acid at gas (carbon dioxide, hydrogen, methane), na nagpapahiwatig na sila ay kabilang sa isang partikular na grupo o uri ng bakterya. Upang maitatag ang mga katangiang ito, maghanda ng likido o semi-likido DD. Sa. may glucose, lactose, sucrose, mannose at iba pang carbohydrates, polyhydric alcohols (variegated series), na may indicators (Andrade, Gissa), media na may gatas. Ang kakayahan ng enzymatic ng microbes ay natutukoy sa pamamagitan ng hitsura ng gas o isang pagbabago sa kulay ng indicator. Ang intensity ng acid formation mula sa glucose ay tinutukoy sa Clark's medium, ang pagbuo ng acetylmethylcarbonal gamit ang Voges-Proskauer reaction, at ang amylolytic na kakayahan ng microbes sa starch agar. Ang mga proteolytic na katangian ng mga mikrobyo ay tinutukoy sa media na hindi naglalaman ng glucose at glycerol, meat-peptone gelatin, coagulated horse serum, at milk agar. Ang karne-peptone gelatin ay inoculated sa pamamagitan ng iniksyon sa ilalim ng test tube, incubated sa t 2022°C, at pagkatapos ay matukoy ang antas ng liquefaction ng gelatin. Ang hemolytic na kakayahan ng mga mikrobyo ay natutukoy sa pamamagitan ng paglalagay sa blood agar o sabaw ng dugo. Upang matukoy ang pagbabawas ng aktibidad ng microbes, gamitin DD. Sa. may mga tina (, litmus, indidocarmine, thionin, atbp.). Habang lumalaki ang mga mikrobyo, nangyayari ang kumpleto o bahagyang pagkawalan ng kulay o pagbabago sa kulay ng tina. Ginagamit din ang media na may nitrates, kung saan, sa ilalim ng impluwensya ng mga enzyme ng ilang microbes, ang mga nitrates ay nabawasan sa nitrite at pagkatapos ay sa ammonia o libreng nitrogen.

Veterinary encyclopedic dictionary. - M.: "Soviet Encyclopedia". Editor-in-Chief V.P. Shishkov. 1981 .

Tingnan kung ano ang "DIFFERENTIAL DIAGNOSTIC ENVIRONMENTS" sa iba pang mga diksyunaryo:

Differential diagnostic na kapaligiran- mga espesyal na pinaghalong nutrients (tingnan ang Nutrient media) kung saan lumaki ang mga mikroorganismo upang matukoy ang kanilang mga species. Sa D.d.s. isama ang protein media na ginagamit upang matukoy ang hemolytic at...

Nutrient media, mga substrate na ginagamit para sa paglilinang sa artipisyal na kondisyon microorganism at tissue culture. Sa microbiological practice, ang S. p ay malawakang ginagamit para sa pagsusuri sa laboratoryo ng mga nakakahawang sakit, para sa... ... Veterinary encyclopedic dictionary

Bacteriological nutrient media- likido, semi-likido o solidong substrate na ginagamit para sa mga lumalagong mikroorganismo sa mga kondisyon ng laboratoryo o pang-industriya. Ginagamit upang ihiwalay ang purong bacteria, fungi at protozoa mula sa biogenic o abiogenic na mga bagay, para sa... ... Diksyunaryo ng microbiology

Culture Media- likido o solid na media na ginagamit para sa lumalaking bacteria, yeast, microscopic fungi, algae, protozoa, mga virus at mga kultura ng cell ng halaman o hayop sa mga kondisyon ng laboratoryo o pang-industriya. Sintetikong P. s....... Great Soviet Encyclopedia

Gissa Miyerkules- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, American bacteriologist; kasingkahulugan: motley series, color series) liquid o semi-liquid differential diagnostic nutrient media na nilalayon para sa pagkilala at pag-iba ng bacteria ayon sa kanilang kakayahang mabulok ang iba't ibang ... ... Malaking medikal na diksyunaryo

McConkey Miyerkules- (A. Ma Conkey, 1861 1931, English bacteriologist) selective differential diagnostic nutrient media para sa paghihiwalay ng bacteria ng pamilya. Enterobacteriaceae, hal. coli na naglalaman ng sodium taurocholic acid at lactose... Malaking medikal na diksyunaryo

Nutrient media- mga substrate na binubuo ng mga sangkap na nagbibigay mga kinakailangang kondisyon para sa paglilinang ng mga mikroorganismo o ang akumulasyon ng kanilang mga produktong metabolic. Iba-iba ang nutrient media sa layunin, pagkakapare-pareho at komposisyon. Ayon sa kanilang layunin ... ... Ensiklopedya sa medisina

Mga diagnostic ng microbiological- ay batay sa pagtukoy sa pathogen o pagtukoy sa immune response ng pasyente dito. Paunang yugto M.d. ay ang pagpili ng materyal at transportasyon ng mga sample sa laboratoryo. Ang uri ng materyal para sa pananaliksik ay tinutukoy ng mga katangian... ... Ensiklopedya sa medisina

Gamot- I Medicine Medicine ay isang sistema ng siyentipikong kaalaman at praktikal na gawain, ang mga layunin ay palakasin at pangalagaan ang kalusugan, pahabain ang buhay ng mga tao, maiwasan at gamutin ang mga sakit ng tao. Upang magawa ang mga gawaing ito, pinag-aaralan ni M. ang istruktura at... ... Ensiklopedya sa medisina

Mga anaerobic na organismo- Ang aerobic at anaerobic bacteria ay paunang kinilala sa isang likidong nutrient medium sa pamamagitan ng gradient ng konsentrasyon ng O2: 1. Ang mga obligadong aerobic (nangangailangan ng oxygen) na bakterya ay pangunahing nagtitipon sa tuktok ng test tube upang sumipsip ... ... Wikipedia

Upang makilala ang ilang uri ng bakterya mula sa iba batay sa kanilang aktibidad ng enzymatic mag-apply differential diagnostic na kapaligiran . Halimbawa, Hiss environment, Endo environment, Levin environment, Ploskirev environment, Olkenitsky environment. Ang Endo, Levin, at Ploskirev media sa mga Petri dish ay ginagamit upang pag-iba-ibahin ang bituka bacteria batay sa kanilang kakayahang mag-ferment ng lactose. Ang media na ito ay naglalaman ng nutrient agar, lactose at isang indicator na nagbabago ng kulay sa isang acidic na kapaligiran (pH indicator). Kung inoculate mo ang bakterya na nagbuburo ng lactose, halimbawa, E. coli, sa naturang daluyan, kung gayon bilang resulta ng pagbuburo ng lactose, ang acid ay nabuo, at ang tagapagpahiwatig ay magbabago ng kulay nito sa isang acidic na kapaligiran. Samakatuwid, ang mga kolonya ng E. coli sa naturang media ay makulayan ayon sa kulay ng tagapagpahiwatig: sa Endo's medium at Ploskirev's medium - pula, sa Levin's medium - black and blue. Kung inoculate mo ang media na ito ng bakterya na hindi nagbuburo ng lactose, halimbawa, typhoid bacilli o dysentery bacilli, kung gayon walang acid na mabubuo, ang reaksyon ng medium ay mananatiling bahagyang alkaline at ang kulay ng indicator ay hindi magbabago. Samakatuwid, ang mga kolonya ng bakterya na hindi nagbuburo ng lactose ay magiging walang kulay sa mga media na ito. Ang daluyan ng Ploskirev ay maaari ding mauri bilang isang elective medium para sa paghihiwalay ng dysentery bacilli, dahil ang daluyan na ito ay naglalaman ng mga apdo salts na pumipigil sa paglaki ng E. coli, at isang makinang na berdeng tina na pumipigil sa paglaki ng aerial coccal microflora. Ang Bismuth sulfite agar ay isang differential diagnostic medium na pangunahing ginagamit sa diagnosis ng salmonellosis. Kapag lumaki ang salmonella, nababawasan ang bismuth mula sa mga asin nito at nagiging itim ang mga kolonya ng salmonella. Ang differential diagnostic media ng Hiss (“variegated” series) ay inihanda batay sa likidong daluyan (peptone water) o semi-liquid meat-peptone agar. Naglalaman ang mga ito ng anumang carbohydrate o polyhydric alcohol (lactose, glucose, mannitol, sucrose) at isang indicator na nagbabago ng kulay sa isang acidic na kapaligiran. Ang isang glass float ay inilalagay sa isang test tube na may likidong Hiss medium. Kung nag-inoculate ka ng microbe sa Hiss medium na nagbuburo ng isang naibigay na carbohydrate na may pagbuo ng acid at gas, iyon ay, sa mga huling produkto, kung gayon ang medium ay magbabago ng kulay nito, lilitaw ang mga bula at mga break sa kapal ng agar sa isang semi-liquid medium, at isang gas bubble sa float ay lilitaw sa isang likidong medium. Kapag ang isang carbohydrate ay fermented lamang sa mga intermediate na produkto (sa acid), ang isang pagbabago lamang sa kulay ng medium ay ginagamit din, na naglalaman ng hindi isang carbohydrate, ngunit dalawa o tatlo, halimbawa, ang medium ng Olkenitsky - tatlong-asukal. agar na may urea. Pinapalitan ng isang tube ng Olkenicki medium ang agar slants at Hiss media ng lactose, sucrose at glucose. Ang daluyan ay inihanda batay sa hindi masyadong siksik na MPA. Naglalaman ng lactose (1%), sucrose (1%), glucose (0.1%), urea, Mohr's salt (ferrous sulfate), sodium hyposulfite at indicator. Pagkatapos ng isterilisasyon, ang daluyan ay ibinubuhos sa isang test tube sa isang straightened form upang ang isang haligi at isang pahilig na bahagi ay nabuo. Ang paghahasik ay ginagawa sa pamamagitan ng pagguhit sa may tapyas na bahagi at pagtusok sa isang haligi. Kapag nagbuburo ng carbohydrates na nakapaloob sa higit pa(lactose, sucrose o parehong asukal), ang kulay ng buong daluyan ay nagbabago; Kapag ang glucose lamang ang na-ferment, nagbabago ang kulay ng column, ngunit ang mowed na bahagi ay nananatiling hindi nagbabago. Ang pagbuo ng gas ay tinutukoy ng pagkakaroon ng mga bula sa haligi ng agar. Ang mga kulturang sumisira sa urea upang bumuo ng ammonia ay nagbibigay ng alkaline na reaksyon. Sa kasong ito, ang acid na nabuo sa panahon ng pagbuburo ng carbohydrates ay neutralized, at ang kulay ng daluyan ay hindi nagbabago. Ang pagkasira ng urea ay katangian ng Proteas at ilang Escherichia coli. Ang pathogenic enterobacteria ay hindi nabubulok ang urea. Ang pagdaragdag ng Mohr's salt at hyposulfite ay ginagawang posible rin na pag-aralan ang kakayahan ng bakterya na bumuo ng hydrogen sulfide sa pamamagitan ng pag-blackening sa column ng agar bilang resulta ng conversion ng ferrous sulfate sa black sulfide.

Para sa isang malinaw na pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad ng enzymatic ng mga microorganism, ginagamit ang mga microtest system at isang sistema ng mga indicator paper (SIB). Ang microtest system ay isang transparent na lalagyan ng polystyrene na binubuo ng ilang mga cell. Ang mga cell ay naglalaman ng pinatuyong nutritional media na may carbohydrates at pH indicator. Ang isang bacterial culture suspension ng isang tiyak na density ay inoculated sa bawat cell. Ang pisikal na solusyon ay ibinubuhos sa mga control cell. solusyon. Ang resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 3-4 na oras ng pagpapapisa ng itlog sa isang termostat sa pamamagitan ng pagbabago sa kulay ng indicator na mga sistema ng papel (IPS) para sa pagkilala sa pamilya ng enterobacteria ay mga disc o mga piraso ng chromatographic na papel na pinahiran ng isang proteksiyon na pelikula ng. polyvinyl alcohol at naglalaman ng isang tiyak na substrate at indicator. Sa isang test tube na may physiological o buffer solution, magdagdag ng isang buong loop ng test culture o isang patak ng isang makapal na microbial suspension, pagkatapos ay ilagay ito sa mga disk na may sinunog na sipit. Walang bacterial culture ang idinagdag upang makontrol ang mga tubo. Ang resulta ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng pagbabago sa kulay ng tagapagpahiwatig. Upang matukoy ang hydrogen sulfide, ang disk ay inilalagay sa isang test tube sa ibabaw ng isang MPA na may binhi na may iniksyon, na nagbibigay-daan sa sabay-sabay na pagpapasiya ng kadaliang kumilos. Sa lahat ng mga test tube, ang isang paunang resulta ay isinasaalang-alang sa parehong araw at isang huling resulta pagkatapos ng labingwalong hanggang dalawampu't apat na oras. Natutukoy ang aktibidad ng oxidase sa pamamagitan ng pagkuskos ng kultura sa indicator paper pagkatapos ng 30-60 segundo.

Paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobic at anaerobic bacteria. Ilista ang mga prinsipyo at pamamaraan para sa pagkuha ng mga hiwalay na kolonya ng aerobes. Mga pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng anaerobes. Ilarawan ang pamamaraan ni Weinberg araw-araw.

Paglilinang at paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobic bacteria

Upang linangin ang mga mikroorganismo, kinakailangan ang ilang kundisyon: temperatura, aerobic o anaerobic na kondisyon.

Ang temperatura ay dapat na pinakamainam para sa species na ito. Karamihan sa mga pathogen bacteria ay dumarami sa 37°C. Gayunpaman, para sa ilang mga species, ang mas mababang temperatura ay pinakamainam, na dahil sa mga kakaibang katangian ng kanilang ekolohiya. Kaya, para sa plague bacillus, ang natural na tirahan kung saan ay mga rodent sa panahon ng hibernation, ang pinakamabuting kalagayan na temperatura ay 28°C, gayundin para sa Leptospira, para sa botulism bacillus - 28°C-35°C.

Maliban sa pinakamainam na temperatura, para sa paglilinang ng mga microorganism, depende sa uri, kinakailangan ang isang aerobic o anaerobic na kapaligiran.

Upang mapag-aralan ang morpolohiya, kultura, biochemical at iba pang mga katangian ng mga mikrobyo, kinakailangan upang makakuha ng isang purong kultura. Karaniwan, ang kultura ng mga mikrobyo ay tumutukoy sa kanilang akumulasyon sa isang nutrient medium sa anyo ng labo, ilalim (pader) na paglaki o isang pelikula sa ibabaw ng isang likidong daluyan o mga kolonya sa isang solidong daluyan. Ang isang hiwalay na kolonya ay nabuo mula sa isang microbial cell. Ang isang purong kultura ay isang kultura ng mga mikrobyo ng isang species na nakuha mula sa isang kolonya. Sa mga laboratoryo, ang ilang kilalang strain ng microbes ay ginagamit para sa iba't ibang pag-aaral. Ang strain ay isang purong kultura ng mga mikrobyo na nakuha mula sa isang tiyak na pinagmulan, sa isang tiyak na oras, na may mga kilalang katangian. Bilang isang patakaran, ang mga microbial strain ay itinalaga ng isang tiyak na numero. Halimbawa, ang Staphylococcus aureus 209P strain ay ginagamit upang matukoy ang aktibidad ng penicillin.

Ang paghihiwalay ng mga purong aerobic na kultura ay karaniwang tumatagal ng tatlong araw at isinasagawa ayon sa sumusunod na pamamaraan:

Araw 1 - mikroskopya ng isang smear mula sa materyal na pagsubok, stained (karaniwan ay sa pamamagitan ng Gram) - para sa paunang pamilyar sa microflora, na maaaring maging kapaki-pakinabang sa pagpili ng isang nutrient medium para sa inoculation. Pagkatapos ang materyal ay inoculated sa ibabaw ng solidified nutrient agar upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya. Maaaring gawin ang pagsasala gamit ang Drigalski method sa tatlong Petri dishes na may nutrient medium. Ang isang patak ng materyal ay inilapat sa unang tasa at kumalat sa isang spatula sa buong tasa. Pagkatapos, gamit ang parehong spatula, ipamahagi ang natitirang pananim dito sa pangalawang tasa at sa parehong paraan sa pangatlo. Ang pinakamalaking bilang ng mga kolonya ay lalago sa unang plato, ang pinakamaliit sa pangatlo. Depende sa kung gaano karaming mga microbial cell ang mayroon sa materyal na pinag-aaralan, ang mga nakahiwalay na kolonya ay lalago sa isa sa mga pinggan.

Ang parehong resulta ay maaaring makamit sa pamamagitan ng pagsala sa isang tasa. Upang gawin ito, hatiin ang tasa sa apat na sektor. Ang materyal sa ilalim ng pag-aaral ay inoculated na may bacteriological loop sa mga streaks sa unang sektor, pagkatapos, pagkatapos ng calcining at paglamig ng loop, ang inoculation ay ipinamamahagi mula sa unang sektor hanggang sa pangalawa at sa parehong paraan nang sunud-sunod sa ikatlo at ikaapat na sektor. Ang mga nakahiwalay na kolonya ay nabuo mula sa mga indibidwal na microbial cell pagkatapos ng araw-araw na pagpapapisa ng itlog sa isang thermostat.

Araw 2 - pag-aaral ng mga kolonya na lumaki sa mga pinggan, na naglalarawan sa kanila. Ang mga kolonya ay maaaring maging transparent, translucent o opaque, mayroon sila iba't ibang laki, bilugan na regular o hindi regular na mga balangkas, matambok o patag na hugis, makinis o magaspang na ibabaw, makinis o kulot, tulis-tulis ang mga gilid. Maaari silang walang kulay o may puti, ginto, pula, dilaw. Batay sa pag-aaral ng mga katangiang ito, ang mga lumaking kolonya ay nahahati sa mga pangkat. Pagkatapos ay pipiliin ang isang nakahiwalay na kolonya mula sa pangkat ng pag-aaral, at ang isang pahid ay inihanda para sa mikroskopikong pagsusuri upang suriin ang homogeneity ng mga mikrobyo sa kolonya. Ang parehong kolonya ay inoculated sa isang test tube na may slanted nutrient agar.

Araw 3 - suriin ang kadalisayan ng kultura na lumago sa agar slant sa pamamagitan ng smear microscopy. Kung homogenous ang bacteria na pinag-aaralan, ang paghihiwalay ng purong kultura ay maituturing na kumpleto.

Upang makilala ang mga nakahiwalay na bakterya, pinag-aralan ang mga katangian ng kultura, iyon ay, ang pattern ng paglago sa likido at solidong nutrient media. Halimbawa, ang streptococci ay bumubuo ng mga sediment sa ilalim at dingding sa sabaw ng asukal, at maliliit, pinpoint na mga kolonya sa agarang dugo; Ang Vibrio cholerae ay bumubuo ng isang pelikula sa ibabaw ng alkaline na tubig na peptone, at mga transparent na kolonya sa alkaline agar; Ang plague bacillus sa nutrient agar ay bumubuo ng mga kolonya sa anyo ng "mga panyo ng puntas" na may siksik na sentro at manipis na kulot na mga gilid, at sa isang likidong nutrient medium - isang pelikula sa ibabaw, at pagkatapos ay mga thread na umaabot mula dito sa anyo ng "stalactites. ”.

Paglilinang at paghihiwalay ng mga purong kultura ng anaerobic bacteria

Upang linangin ang mga anaerobes, kinakailangan na bawasan ang potensyal na redox ng medium at lumikha ng anaerobiosis sa pamamagitan ng pag-alis ng oxygen sa pamamagitan ng pisikal, kemikal o biological na pamamaraan.

Kasama sa mga pisikal na pamamaraan ang:

1) mekanikal na pag-alis ng hangin gamit ang isang bomba mula sa anae-rostat, kung saan inilalagay ang mga tasa na may mga pananim. Kasabay nito, maaari mong palitan ang hangin ng isang walang malasakit na gas: nitrogen, hydrogen, carbon dioxide.

2) lumalaki sa isang kapaligiran na naglalaman ng mga nagpapababang sangkap. Ang Kitta-Tarozzi medium ay isang sabaw ng asukal na may mga piraso ng atay o karne. Ang glucose at mga piraso ng organ ay may kakayahang magpababa. Ang daluyan ay ibinubuhos sa itaas na may isang layer ng Vaseline oil upang harangan ang pag-access ng air oxygen.

3) Ang pinakasimpleng, ngunit mas kaunti maaasahang paraan- lumalaki sa lalim ng isang mataas na hanay ng agarang asukal.

Mga pamamaraan ng kemikal binubuo sa katotohanan na ang mga pinggan na may inoculated anaerobes ay inilalagay sa isang hermetically sealed desiccator, kung saan inilalagay ang mga kemikal, halimbawa, pyrogallol at alkali, ang reaksyon sa pagitan ng kung saan ay nangyayari sa pagsipsip ng oxygen.

Biyolohikal na pamamaraan ay batay sa sabay-sabay na paglilinang ng anaerobes at aerobes sa solid nutrient media sa Petri dishes, hermetically sealed pagkatapos ng paghahasik. Una, ang oxygen ay nasisipsip ng lumalaking aerobes, at pagkatapos ay nagsisimula ang paglago ng anaerobes.

Ang paghihiwalay ng isang purong kultura ng anaerobes ay nagsisimula sa akumulasyon ng anaerobic bacteria sa pamamagitan ng inoculation sa Kitta-Tarozzi medium. Kasunod nito, ang mga nakahiwalay na kolonya ay nakukuha sa isa sa dalawang paraan:

1) ang pagbabakuna ng materyal ay isinasagawa sa pamamagitan ng paghahalo sa tinunaw na mainit na agarang asukal sa mga tubo ng salamin. Matapos tumigas ang agar, ang mga hiwalay na kolonya ay lumalaki sa kalaliman nito, na inaalis sa pamamagitan ng pagputol ng tubo at inilipat sa Kitt-Tarozzi medium (Weinberg method);

2) ang materyal ay inoculated sa mga pinggan na may isang nutrient medium at incubated sa isang anaerostat. Ang mga hiwalay na kolonya na lumaki sa isang ulam ay nilagyan ng subculture sa Kitt-Tarozzi medium (Zeissler method).