Kakšen je namen uporabe diferencialnih diagnostičnih okolij? Primeri in kako delujejo

Diferencialni diagnostični mediji so posebne mešanice hranil, ki se uporabljajo za določanje vrste mikrobov in preučevanje njihovih lastnosti. Ko bakterije rastejo na diferencialnih diagnostičnih medijih, se pojavijo kemični procesi zaradi prisotnosti različnih encimov v mikrobni celici. Nekateri od njih so sposobni razgraditi beljakovine, drugi so ogljikovi hidrati, tretji pa lahko povzročijo oksidacijske in redukcijske reakcije itd. Zaradi delovanja encimov pride do ustreznih sprememb v diferencialno diagnostičnem okolju. Diferencialna diagnostična okolja lahko razdelimo v štiri glavne skupine.

• 1. Medij, ki vsebuje beljakovine in razkriva sposobnost mikrobov za razgradnjo beljakovin (proteolitične lastnosti): mesno-peptonski želatinski "stolpec", zvit konjski ali goveji serum, mleko, krvni agar. Ko bakterije inokuliramo s punkcijo v mesno-peptonsko želatino, opazimo utekočinjenje medija v primeru razgradnje beljakovin. Pri inokulaciji na gojišče s koaguliranim serumom je razgradnja beljakovin določena z redčenjem medija in tvorbo vdolbinic na njegovi površini. Razgradnjo mleka s strani mikroba razkrije razsvetljenje ali raztapljanje prvotno sesirjenega mleka. Prisotnost hemolitične aktivnosti testne kulture preverimo tako, da jo inokuliramo v petrijevko na posebnem krvnem agarju. Zaradi uničenja rdečih krvnih celic okoli kolonij (na primer hemolitični streptokok ali stafilokok) nastanejo čistilne cone.
• 2. Mediji za odkrivanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo ogljikovih hidratov in visoko atomskih alkoholov (Endo sreda, Levinovo okolje, Russellovo okolje, Drygalskyjevo - Konradijevo okolje, Rapoportovo - Weintraubovo okolje, Šustovo okolje). Za identifikacijo teh lastnosti mikroorganizmov se uporablja tudi "pestra" serija, to je serija epruvet, ki vsebujejo hranilne medije, vključno z različnimi ogljikovimi hidrati, polihidričnimi alkoholi in indikatorjem. Kot indikatorji se uporablja lakmusova tinktura ali bromotimol modro. Razgradnjo katerega koli od ogljikovih hidratov s tvorbo kisline zaznamo s spremembo barve indikatorja, tvorbo plina - s polnjenjem s plinom in pojavom posebnega steklenega plovca v tekočem mediju. Ali pa uporabite poltekoč medij Gissa (glej) z 0,5 % agarja z ustreznimi sladkorji in Andradejevim indikatorjem. Po setvi mikroba na ta gojišča se tvorba kisline pokaže z pordelostjo gojišča, nastajanje plina pa s pojavom njegovih mehurčkov v agarju ali z razpokom in premikom agarskega stolpca navzgor. Med diferencialno diagnostične medije druge skupine spada tudi škrobni agar, ki služi za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo škroba, Clarkov medij ipd.
• 3. Medij, na katerem se razkrije sposobnost mikrobov, da razbarvajo barvila, dodana juhi: metilensko modro, tionin, lakmus, indigo karmin, nevtralno rdečo ali drugo (Rothbergerjev medij, medij Omelyanskyja). V tretjo skupino sodijo tudi gojišča z nitrati, ki služijo ugotavljanju sposobnosti mikrobov, da reducirajo soli dušikove kisline (nitrate) v soli dušikove kisline (nitrite) in nato v amoniak ali prosti dušik.
• 4. Medij, ki razkriva sposobnost mikrobov za asimilacijo snovi, ki jih drugi mikrobi ne asimilirajo, na primer medij z natrijevim citratom (Simons citratni agar) za razlikovanje E. coli, ki je brez sposobnosti asimilacije tega medija, iz drugih bakterij črevesne skupine ali medij z natrijevo oleinsko kislino za diferenciacijo bacila davice od psevdo-difterije in difteroidov (agarEngering).

Diferencialna diagnostična sredstva vključujejo tudi gojišča za diferenciacijo anaerobov, teluritna sredstva za diferenciacijo bakterij davice, gojišča s sečnino, alkalna gojišča (Dieudonneagar) za gojenje Vibrio cholerae itd.

sreda Endo. Sestoji iz MPA z dodatkom 1 % laktoze in bazičnega fuksina, razbarvanega z natrijevim sulfitom (indikator). Endo medij ima rahlo rožnato barvo. Uporablja se pri diagnostiki črevesnih okužb za razlikovanje bakterij, ki razgradijo laktozo, da tvorijo kisle produkte iz bakterij, ki te sposobnosti nimajo. Kolonije na laktozo pozitivnih mikrobov (Escherichia coli) so rdeče zaradi zmanjšanja fuksina. Kolonije laktozo-negativnih mikroorganizmov - Salmonella, Shigella in drugi - so brezbarvne.

Diferencialna diagnostična okolja vključujejo kratko in razširjeno pestro vrsto. Sestavljajo ga mediji z ogljikovimi hidrati (Giss media), MPB, mleko, mezopatamijska želatina.

Giss gojišča pripravimo na osnovi peptonske vode, ki ji dodamo kemično čiste mono-, di- ali polisaharide (glukozo, laktozo, škrob itd.).

Za odkrivanje premikov pH, ki so posledica tvorbe kisline in razgradnje ogljikovih hidratov, se v medij doda indikator. Pri globlji razgradnji ogljikovih hidratov nastanejo plinasti produkti (CO 2, CH 4 itd.), ki jih zajamejo s pomočjo plovcev - majhnih epruvet, spuščenih v medij narobe. Medije z ogljikovimi hidrati lahko pripravimo tudi gosto - z dodatkom 0,5-1% agar-agarja. Nato se zajetje plina s tvorbo mehurčkov (rupture) v stolpcu medija.

Na BCH, ki je del pestre vrste, najdemo produkte, ki nastanejo med razgradnjo aminokislin in peptonov (indol, vodikov sulfid). Vodikov sulfid zaznamo tako, da po inokulaciji kulture v BCH položimo trak filtrirnega papirja, namočenega v raztopino svinčevega acetata. Ko se aminokisline, ki vsebujejo žveplo, razdelijo, se sprosti vodikov sulfid, kos papirja postane črn zaradi tvorbe svinčevega sulfida. Za določitev indola je mogoče uporabiti kompleksen indikator. Indol nastane z razpadom triptofana in ga je mogoče zaznati, ko ta indikator dodamo kulturi, ki se goji na BCH. V prisotnosti indola se MPB obarva zeleno ali modro.

V praktičnih bakterioloških laboratorijih se mikro in ekspresne metode pogosto uporabljajo za približne študije biokemičnih lastnosti mikroorganizmov. V ta namen obstaja veliko testnih sistemov. Najpogosteje uporabljen sistem indikatorskih vrednostnih papirjev (NIB). NIB so diski iz filtrirnega papirja, impregnirani z raztopinami sladkorjev ali drugih substratov v kombinaciji z indikatorji. Takšne diske potopimo v epruveto s kulturo, vzgojeno v tekočem hranilnem mediju. Sprememba barve diska s substratom se uporablja za presojo delovanja encima. Mikrotestni sistemi za preučevanje identifikacije Enterobacteriaceae so predstavljeni v plastičnih posodah za enkratno uporabo z nosilci, ki vsebujejo različne substrate, z dodatkom indikatorjev. Sejanje čiste kulture mikroorganizmov v takšne testne sisteme vam omogoča hitro odkrivanje sposobnosti bakterij, da izkoristijo citrate, glukozo, saharozo, sproščajo amoniak, indol, razgradijo sečnino, lizin, fenilalanin itd.

Suha okolja. Hranilni agar, kot tudi glavni diferencialni diagnostični mediji, se trenutno proizvajajo v obliki suhih pripravkov, ki vsebujejo vse potrebne sestavine. Takšnim praškom morate samo dodati vodo in kuhati, nato pa po vlivanju sterilizirati.

Diferencialni diagnostični mediji so posebne mešanice hranil, ki se uporabljajo za določanje vrste mikrobov in preučevanje njihovih lastnosti. Z rastjo bakterij na diferencialnih diagnostičnih medijih se pojavijo kemični procesi zaradi prisotnosti različnih v mikrobni celici. Nekateri od njih se lahko cepijo, drugi - in tretji - povzročijo oksidacijske in redukcijske reakcije itd. Zaradi delovanja encimov v diferencialno diagnostičnem okolju pride do ustreznih sprememb.

Diferencialna diagnostična okolja lahko razdelimo v štiri glavne skupine.

riž. 1-6. Različne oblike razgradnje želatine. riž. 7 - 9. Tekoči medij z ogljikovimi hidrati in Andradejevim indikatorjem: sl. 7 - brez fermentacije; riž. 8 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 9 - fermentacija s tvorbo kisline in plina. riž. 10 - 12. Poltekoč medij z ogljikovimi hidrati in indikatorjem BP (iz suhega gojišča): sl. 10 - brez fermentacije; riž. 11 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 12 - fermentacija s tvorbo kisline in plina. riž. 13-15. Umetni lakmusov serum po Seitzu: riž. 13 - brez fermentacije; riž. 14 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 15 - fermentacija do oblike. riž. 16 in 17. Mleko z metilensko modrim: sl. 16 - brez zmanjšanja; riž. 17 -zmanjšanje. riž. 18 in 19. Sreda Simons: sl. 18 - pomanjkanje asimilacije citrata; riž. 19 - asimilacija citrata. riž. 20 - 24. Lakmusovo mleko: riž. 20 - brez fermentacije; riž. 21 - fermentacija s tvorbo kisline; riž. 22 - fermentacija s tvorbo alkalije; riž. 23 - peptonizacija; riž. 24 - zmanjšanje. riž. 25. Utekočinjanje valjano (v prepuščeni svetlobi). riž. 26. Hemoliza na krvnem agarju (v prepuščeni svetlobi). riž. 27. Krvno okolje s kalijevim teluritom.

1. Medij, ki vsebuje beljakovine in razkriva sposobnost mikrobov za razgradnjo beljakovin (proteolitične lastnosti): mesno-peptonski "stolpec", zvit konjski ali goveji serum, mleko, krvni agar. Ko bakterije inokuliramo s punkcijo v mesno-peptonsko želatino, "stolpec" v primeru razgradnje beljakovin opazimo utekočinjenje medija. Pri inokulaciji na gojišče s koaguliranim serumom se razgradnja beljakovin določi z redčenjem medija in tvorbo vdolbinic na njegovi površini. Razgradnjo mleka s strani mikroba razkrije razsvetljenje ali raztapljanje prvotno sesirjenega mleka. Prisotnost hemolitične aktivnosti testne kulture preverimo tako, da jo inokuliramo v poseben krvni agar. Zaradi uničenja okoli kolonij (na primer hemolitične ali) nastanejo čistilne cone.

2. Mediji za odkrivanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo ogljikovih hidratov in visoko atomsko (Endo sreda, Levinovo okolje, Russellovo okolje, Drygalskyjevo - Konradijevo okolje, Rapoportovo - Weintraubovo okolje, Šustovojevo okolje). Za prepoznavanje teh lastnosti mikroorganizmov se uporablja tudi "pestra" vrstica, to je serija epruvet, ki vsebujejo različne ogljikove hidrate, polihidrične alkohole in indikator. Kot indikatorji se uporablja lakmusova tinktura ali bromotimol modro. Razgradnjo katerega koli od ogljikovih hidratov s tvorbo kisline zaznamo s spremembo barve indikatorja, tvorbo plina - s polnjenjem s plinom in pojavom posebnega steklenega plovca v tekočem mediju. Ali pa uporabite poltekoč medij Gissa (glej) z 0,5 % agarja z ustreznimi sladkorji in Andradejevim indikatorjem. Po setvi mikroba na ta gojišča zaznamo nastanek kisline po pordelosti gojišča, nastajanje plina pa po pojavu njegovih mehurčkov v agarju ali po pretrganju in premikanju agarskega stolpca navzgor. Med diferencialno diagnostične medije druge skupine spada tudi škrobni agar, ki služi za ugotavljanje sposobnosti mikrobov za razgradnjo škroba, Clarkov medij ipd.

3. Medij, na katerem se razkrije sposobnost mikrobov, da razbarvajo barvila, dodana juhi: metilensko modro, tionin, lakmus, nevtralno rdečo ali drugo (Rothbergerjev medij, medij Omelyanskyja). V tretjo skupino sodijo tudi gojišča z nitrati, ki služijo ugotavljanju sposobnosti mikrobov, da reducirajo soli dušikove kisline (nitrate) v soli dušikove kisline (nitrite) in nato v amoniak ali prosti dušik.

4. Medij, ki razkriva sposobnost mikrobov za asimilacijo snovi, ki jih drugi mikrobi ne asimilirajo, na primer medij z natrijevim citratom (Simons citratni agar) za razlikovanje E. coli, ki je brez sposobnosti asimilacije tega medija, iz drugih bakterij črevesne skupine ali medij z natrijevo oleinsko kislino za diferenciacijo bacila davice od lažne davice in difteroidov (Engering agar).

Diferencialna diagnostična sredstva vključujejo tudi gojišča za diferenciacijo anaerobov, teluritna sredstva za diferenciacijo bakterij davice, gojišča s sečnino, alkalna gojišča (Dieudonne agar) za gojenje Vibrio cholerae itd. Glej tudi Identifikacija mikrobov.

DIFERENCIALNI DIAGNOSTIČNI MEDIJI

diferencialni diagnostični mediji, posebni hranilni mediji, ki se uporabljajo za identifikacijo mikroorganizmov s selektivno biokemično aktivnostjo v zvezi z določenimi snovmi. Mikrobi v procesu razvoja s pomočjo encimov razgradijo določene snovi, ki sestavljajo okolje, kar se vzpostavi s spremembo okolja.

Številni patogeni mikroorganizmi razgrajujejo ogljikove hidrate, polihidrične alkohole s tvorbo kislin in plinov (ogljikov dioksid, vodik, metan), kar kaže, da pripadajo določeni skupini ali vrsti bakterij. Za določitev teh lastnosti pripravite tekočino ali poltekočo D.-d. z. z glukozo, laktozo, saharozo, manozo in drugimi ogljikovimi hidrati, polihidričnimi alkoholi (pestrega obsega), z indikatorji (Andrade, Gissa), medij z mlekom. Encimska sposobnost mikrobov je določena s pojavom plina ali spremembo barve indikatorja. Intenzivnost tvorbe kisline iz glukoze se določi na Clarkovem mediju, tvorba acetilmetilkarbonala - z Voges-Proskauerjevo reakcijo, amilolitična sposobnost mikrobov - na škrobnem agarju. Proteolitične lastnosti mikrobov se določijo na gojiščih, ki ne vsebujejo glukoze in glicerina - mesno-peptonska želatina, koagulirana konjska sirotka, mlečni agar. Mesno-peptonsko želatino inokuliramo z vbodom na dno epruvete, inkubiramo pri t 20-22 ° C, nato pa določite stopnjo utekočinjenja želatine. Hemolitična sposobnost mikrobov se ugotavlja z nanosom na krvni agar ali krvno juho. Za določitev zmanjšanja aktivnosti mikrobov uporabite D.-d. z. z barvili (, lakmus, indokarmin, tionin itd.). Ko mikrobi rastejo, pride do popolne ali delne obarvanosti ali razbarvanja barvila. Uporabljajo se tudi gojišča z nitrati, v katerih se pod vplivom encimov določenih mikrobov nitrati reducirajo v nitrite in nato v amoniak ali prosti dušik.

Veterinarski enciklopedični slovar. - M .: "Sovjetska enciklopedija". Glavni urednik V.P. Šiškov. 1981 .

Poglejte, kaj je "DIFERENCIALNO-DIAGNOSTIČNI MEDIJI" v drugih slovarjih:

Diferencialna diagnostična okolja- posebne mešanice hranil (glej. Gojišča), na katerih se gojijo mikroorganizmi za določitev njihove vrste. Za D. d. With. vključujejo beljakovinske medije, ki se uporabljajo za določanje hemolitičnih in ... ...

Hranilni mediji, substrati, ki se uporabljajo za gojenje v umetnih pogojih mikroorganizmov in tkivnih kultur. V mikrobiološki praksi se S. predmeta pogosto uporablja za laboratorijsko diagnostiko nalezljivih bolezni, za ... ... Veterinarski enciklopedični slovar

Bakteriološka gojišča- tekoči, poltekoči ali trdni substrati, ki se uporabljajo za gojenje mikroorganizmov v laboratorijskih ali industrijskih pogojih. Uporabljajo se za izolacijo bakterij, gliv in protozojev iz biogenih ali abiogenih objektov, čistih do p, za ... ... Mikrobiološki slovar

Kulturni mediji- tekoči ali trdni mediji, ki se uporabljajo za gojenje bakterij, kvasovk, mikroskopskih gliv, alg, protozojev, virusov in kultur rastlinskih ali živalskih celic v laboratorijskih ali industrijskih pogojih. Sintetični P. z ... ... ... Velika sovjetska enciklopedija

Gissa sreda- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, ameriški bakteriolog; sinonim: pestra vrsta, obarvana vrsta) tekoči ali poltekoč diferencialno diagnostični hranilni mediji, namenjeni določanju in razlikovanju bakterij po njihovi sposobnosti razgradnje različnih ... ... Celovit medicinski slovar

McConkey v sredo- (A. Ma Conkey, 1861 1931, angleški bakteriolog) selektivni diferencialno diagnostični hranilni mediji za izolacijo bakterij družine. Enterobacteriaceae, npr. Escherichia coli, ki vsebuje natrijevo tauroholno kislino in laktozo ... Celovit medicinski slovar

Hranila- substrati, sestavljeni iz komponent, ki zagotavljajo potrebne pogoje za gojenje mikroorganizmov ali kopičenje njihovih odpadnih produktov. Gojišča se razlikujejo po namenu, konsistenci in sestavi. Glede na njihov namen ... ... Medicinska enciklopedija

Mikrobiološka diagnostika- na podlagi identifikacije povzročitelja ali ugotavljanja imunskega odziva bolnikovega telesa nanj. Začetna faza M.D. je izbira materiala in prevoz vzorcev v laboratorij. Vrsta materiala za raziskavo določajo značilnosti ... ... Medicinska enciklopedija

Zdravilo- I Medicina Medicina je sistem znanstvenih spoznanj in praktične dejavnosti, katerega cilji so krepitev in ohranjanje zdravja, podaljševanje življenja ljudi, preprečevanje in zdravljenje človeških bolezni. Za izpolnitev teh nalog M. preučuje strukturo in ... ... Medicinska enciklopedija

Anaerobni organizmi- Aerobne in anaerobne bakterije se v tekočem hranilnem mediju predhodno identificirajo z gradientom koncentracije O2: 1. Obvezne aerobne (ki potrebujejo) bakterije se večinoma zbirajo v zgornjem delu cevi, da absorbirajo ... ... Wikipedia

Za razlikovanje nekaterih vrst bakterij od drugih na podlagi njihove encimske aktivnosti se uporabljajo diferencialno diagnostična okolja ... Na primer okolje Giss, okolje Endo, okolje Levina, okolje Ploskirev, okolje Olkenitsky. Mediji Endo, Levin, Ploskirev v petrijevki se uporabljajo za razlikovanje bakterij črevesne skupine glede na njihovo sposobnost fermentacije laktoze. Ta gojišča vsebujejo hranilni agar, laktozo in indikator, ki spreminja barvo v kislem mediju (pH indikator). Če v takšno okolje posejemo bakterije, ki fermentirajo laktozo, kot je E. coli, nastane kislina kot posledica fermentacije laktoze, indikator pa bo v kislem okolju spremenil barvo. Zato bodo kolonije Escherichia coli na takšnih medijih obarvane glede na barvo indikatorja: na Endovem in Ploskirevem mediju - v rdečo, na Levinovem mediju - v črno-modro. Če so ti mediji posejani z bakterijami, ki ne fermentirajo laktoze, na primer s palicami za tifus ali grižo, potem kislina ne nastane, reakcija medija bo ostala rahlo alkalna in barva indikatorja se ne bo spremenila. Zato bodo kolonije bakterij, ki ne fermentirajo laktoze, na teh medijih brezbarvne. Ploskirev medij lahko pripišemo tudi elektivnim medijem za izolacijo grižnih palic, saj ta medij vsebuje žolčne soli, ki zavirajo rast E. coli, in briljantno zeleno barvilo, ki zavira rast zračne kokne mikroflore. Bizmutov sulfitni agar je diferencialno diagnostični medij, ki se uporablja predvsem pri diagnostiki salmoneloze. Z rastjo salmonele se bizmut obnovi iz njegovih soli in kolonije salmonele postanejo črne. Diferencialna diagnostična gojišča Giss (serija "motley") so pripravljena na osnovi tekočega medija (peptonska voda) ali poltekočega mesno-peptonskega agarja. Vsebujejo vse ogljikove hidrate ali polihidrični alkohol (laktozo, glukozo, manitol, saharozo) in indikator, ki spremeni barvo v kislem okolju. Stekleni plovec postavimo v epruveto s tekočim Gissovim medijem. Če na medij Giss posejemo mikrob, ki ta ogljikov hidrat fermentira s tvorbo kisline in plina, torej do končnih produktov, bo medij spremenil svojo barvo, v poltekočem mediju se pojavijo mehurčki in razpoke. debelina agarja, v tekočem mediju - plinski mehurček v plovcu. Ko ogljikov hidrat fermentira le do vmesnih produktov (do kisline), se spremeni samo barva medija.Uporabljajo se tudi kombinirani mediji, ki ne vsebujejo enega ogljikovega hidrata, ampak dva ali tri, na primer medij Olkenitsky - trisladkorni agar s sečnino. Ena epruveta Olkenitskyjevega medija nadomesti agar poševni in Gissov medij z laktozo, saharozo in glukozo. Sreda je pripravljena na podlagi ne zelo gostega MPA. Vsebuje laktozo (1%), saharozo (1%), glukozo (0,1%), sečnino, Mohrovo sol (železov sulfat), natrijev hiposulfit in indikator. Po sterilizaciji medij v sploščeni obliki vlijemo v epruveto, tako da dobimo kolono in poševni del. Setev se opravi s potezo na poševnem delu in vbodom v kolono. Ko fermentirate več ogljikovih hidratov (laktozo, saharozo ali oba sladkorja), se spremeni barva celotnega medija; ko fermentira samo glukoza, se barva palice spremeni, poševni del pa ostane nespremenjen. Nastajanje plina je označeno s prisotnostjo mehurčkov v stolpcu agarja. Kulture, ki razgradijo sečnino v amoniak, dajejo alkalno reakcijo. V tem primeru se kislina, ki nastane med fermentacijo ogljikovih hidratov, nevtralizira in barva medija se ne spremeni. Razgradnja sečnine je značilna za beljakovine in nekaj E. coli. Patogene enterobakterije ne razgradijo sečnine. Dodatek Mohrove soli in hiposulfita omogoča tudi preučevanje sposobnosti bakterij, da tvorijo vodikov sulfid s črnitvijo v stolpcu agarja kot posledica pretvorbe železovega sulfata v črni sulfid.

Za ekspresno metodo za določanje encimske aktivnosti mikroorganizmov se uporabljajo mikrotestni sistemi in sistem indikatorskih papirjev (NIB). Mikrotest sistem je prozorna polistirenska posoda, sestavljena iz več celic. Celice vsebujejo posušene jamice z ogljikovimi hidrati in indikatorji pH. V vsako celico se inokulira suspenzija kulture bakterij določene gostote. Fizični se vlije v kontrolne celice. rešitev. Rezultat se upošteva po 3-4 urah inkubacije v termostatu glede na spremembo barve indikatorja Sistemi indikatorskih papirjev (NIB) za identifikacijo družine Enterobacteriaceae so diski ali trakovi kromatografskega papirja, prekriti z zaščitno folijo iz polivinilalkohola in vsebuje poseben substrat in indikator. V epruveto s fiziološko ali pufrsko raztopino vnesemo celotno zanko testne kulture ali kapljico goste mikrobne suspenzije, ki jo nato s prežgano pinceto damo v diske. Kultura bakterij se ne dodaja kontrolnim epruvetam. Rezultat se upošteva s spremembo barve indikatorja. Za določanje vodikovega sulfida se disk postavi v epruveto na površino MPA, inokulirane z vbodom, kar omogoča hkratno določanje mobilnosti. V vseh epruvetah se upošteva predhodni rezultat istega dne in končni rezultat po štiriindvajsetih do štiriindvajsetih urah. Aktivnost oksidaze določimo z mletjem kulture na indikatorskem papirju po 30-60 sekundah.

Izolacija čistih kultur aerobnih in anaerobnih bakterij. Naštejte načela in metode pridobivanja izoliranih kolonij aerobov. Metode za izolacijo čistih kultur anaerobov. Opišite Weinbergovo metodo po dnevih.

Gojenje in izolacija čistih kultur aerobnih bakterij

Za gojenje mikroorganizmov so potrebni določeni pogoji: temperatura, aerobni ali anaerobni pogoji.

Temperatura mora biti optimalna za vrsto. Večina patogenih bakterij uspeva pri 37 °C. Vendar pa je za nekatere vrste optimalna nižja temperatura, kar je povezano s posebnostmi njihove ekologije. Torej, za bacil kuge, katerega naravni habitat so glodalci med hibernacijo, je optimalna temperatura 28 ° C, kot tudi za leptospire, za bacil botulizma - 28 ° C-35 ° C.

Poleg optimalne temperature je za gojenje mikroorganizmov, odvisno od vrste, potrebno aerobno ali anaerobno okolje.

Za preučevanje morfologije, kulturnih, biokemičnih in drugih lastnosti mikrobov je potrebno pridobiti čisto kulturo. Običajno se kultura mikrobov imenuje njihovo kopičenje na hranilnem mediju v obliki motnosti, rasti pri dnu (stena) ali filma na površini tekočega medija ali kolonij na gostem mediju. Ena kolonija nastane iz ene mikrobne celice. Čista kultura je kultura mikrobov iste vrste, pridobljena iz ene kolonije. V laboratorijih se nekateri znani sevi mikrobov uporabljajo za različne študije. Sev je čista kultura mikrobov, pridobljena iz določenega vira, v določenem času, z znanimi lastnostmi. Običajno so mikrobni sevi označeni s posebno številko. Na primer, sev Staphylococcus aureus 209P se uporablja za določanje aktivnosti penicilina.

Izolacija čistih kultur aerobov običajno traja tri dni in se izvaja po naslednji shemi:

1. dan - mikroskopija razmaza iz testnega materiala, obarvanega (običajno po Gramu) - za predhodno seznanitev z mikrofloro, ki je lahko koristna pri izbiri gojišča za inokulacijo. Nato inokulacijo materiala na površino zamrznjenega hranilnega agarja, da dobimo izolirane kolonije. Sejanje se lahko izvede po metodi Drygalsky v tri petrijevke s hranilnim medijem. Na prvo skodelico nanesemo kapljico materiala in z lopatico razporedimo po celotni skodelici. Nato z isto lopatico na njej porazdelimo preostalo kulturo na drugo skodelico in na enak način na tretjo. Največje število kolonij bo zraslo na prvi plošči, najmanj na tretji. Izolirane kolonije bodo rasle na eni od plošč, odvisno od tega, koliko mikrobnih celic je bilo v testnem materialu.

Enak rezultat lahko dosežemo s presejanjem na eno skodelico. Če želite to narediti, razdelite skodelico na štiri sektorje. Preučevani material se inokulira z bakteriološko zanko s potezami na prvem sektorju, nato pa se po kalciniranju in hlajenju zanke inokulacija porazdeli iz prvega sektorja v drugi in na enak način zaporedno v tretji in četrti sektor. Izolirane kolonije nastanejo iz posameznih mikrobnih celic po 24-urni inkubaciji v termostatu.

2. dan - študij kolonij, ki so rasle na ploščah, njihov opis. Kolonije so lahko prozorne, prosojne ali neprozorne, imajo različne velikosti, zaobljene pravilne ali nepravilne obrise, konveksno ali ravno obliko, gladko ali hrapavo površino, gladke ali valovite, nazobčane robove. Lahko so brezbarvne ali bele, zlate, rdeče, rumene. Na podlagi preučevanja teh značilnosti so gojene kolonije razdeljene v skupine. Nato iz študijske skupine izberemo izolirano kolonijo, pripravimo bris za mikroskopsko preiskavo, da se preveri homogenost mikrobov v koloniji. Isto kolonijo inokuliramo v epruveto s poševnim hranilnim agarjem.

3. dan - preverjanje čistosti kulture, vzgojene na poševnem agarju, z mikroskopijo razmaza. S homogenostjo proučevanih bakterij se lahko izolacija čiste kulture šteje za popolno.

Za identifikacijo izoliranih bakterij preučujemo kulturne lastnosti, to je naravo rasti na tekočih in trdnih hranilnih medijih. Na primer, streptokoki na sladkorni juhi tvorijo dno in parietalno usedlino, na krvnem agarju - majhne, ​​natančne kolonije; kolera vibrio tvori film na površini alkalne peptonske vode in prozorne kolonije na alkalnem agarju; bacil kuge na hranilnem agarju tvori kolonije v obliki "čipkastih robčkov" z gosto sredino in tankimi valovitimi robovi, v tekočem hranilnem mediju - film na površini, nato pa filamente, ki segajo od njega v obliki "kapnikov". ".

Gojenje in izolacija čistih kultur anaerobnih bakterij

Za gojenje anaerobov je potrebno znižati oksidacijsko-redukcijski potencial gojišča, ustvariti anaerbiozo z odstranjevanjem kisika s fizikalnimi, kemičnimi ali biološkimi metodami.

Fizične metode vključujejo:

1) mehansko odstranjevanje zraka s črpalko iz anae-rostata, v katero so nameščene posode z inokulacijami. Hkrati lahko zrak zamenjate z indiferentnim plinom: dušikom, vodikom, ogljikovim dioksidom.

2) gojenje v mediju, ki vsebuje redukcijske snovi. Kitta-Tarozzi sreda je sladkorna juha s koščki jeter ali mesa. Glukoza in deli organov imajo zmanjševalno sposobnost. Medij se na vrhu prelije s plastjo vazelinskega olja, da prepreči dostop kisika v zraku.

3) Najenostavnejša, a manj zanesljiva metoda je gojenje globoko v visokem stolpcu sladkornega agarja.

Kemične metode so v tem, da se posode z pridelki anaerobov postavijo v hermetično zaprt eksikator, kjer se namestijo kemikalije, na primer pirogalol in alkalije, reakcija med katerimi poteka z absorpcijo kisika.

Biološka metoda temelji na hkratnem gojenju anaerobov in aerobov na trdnih hranilih v petrijevkah, hermetično zaprtih po inokulaciji. Na začetku rastoči aerobi absorbirajo kisik, nato pa se začne rast anaerobov.

Izolacija čiste kulture anaerobov se začne s kopičenjem anaerobnih bakterij z inokulacijo na medij Kitta-Tarozzi. V prihodnosti se izolirane kolonije pridobijo na enega od dveh načinov:

1) material inokuliramo z mešanjem s stopljenim toplim sladkornim agarjem v steklenih epruvetah. Ko se agar strdi, v njegovi globini zrastejo izolirane kolonije, ki jih odstranimo z rezanjem epruvete in subkultiramo na gojišču Kitt-Tarozzi (Weinbergova metoda);

2) inokulacija materiala se izvede na ploščah s hranilnim medijem in inkubira v anaerostatu. Izolirane kolonije, gojene na krožniku, se subkulturi na gojišču Kitt-Tarozzi (Zeisslerjeva metoda).