À quoi sert l'utilisation d'environnements de diagnostic différentiel ? Exemples et comment ils fonctionnent

Les milieux de diagnostic différentiel sont des mélanges spéciaux de nutriments utilisés pour déterminer les espèces de microbes et étudier leurs propriétés. Lorsque les bactéries se développent sur des supports de diagnostic différentiel, des processus chimiques se produisent en raison de la présence de diverses enzymes dans la cellule microbienne. Certains d'entre eux sont capables de décomposer les protéines, d'autres sont des glucides et d'autres encore sont capables de provoquer des réactions d'oxydation et de réduction, etc. En raison de l'action des enzymes, des changements correspondants se produisent dans l'environnement de diagnostic différentiel. Les environnements de diagnostic différentiel peuvent être divisés en quatre groupes principaux.

• 1. Milieux contenant des protéines et révélant la capacité des microbes à décomposer les protéines (Propriétés protéolytiques) : viande-gélatine peptonée "colonne", roulé de sérum de cheval ou de bovin, lait, gélose au sang. Lorsque les bactéries sont inoculées avec une piqûre dans de la viande-gélatine peptonée, une liquéfaction du milieu est observée en cas de dégradation protéique. En cas d'ensemencement sur milieu avec du sérum coagulé, la dégradation des protéines est déterminée par la dilution du milieu et la formation de dépressions à sa surface. La décomposition du lait par le microbe est révélée par l'éclaircissement ou la dissolution du lait initialement caillé. La présence d'activité hémolytique de la culture d'essai est vérifiée en l'inoculant dans une boîte de Pétri sur une gélose au sang spéciale. À la suite de la destruction des globules rouges autour des colonies (par exemple, streptocoque hémolytique ou staphylocoque), des zones de dégagement se forment.
• 2. Milieux de détection de la capacité des microbes à décomposer les glucides et les alcools hautement atomiques (Endo Wednesday, environnement de Levin, environnement de Russell, environnement de Drygalsky - environnement de Konradi, environnement de Rapoport - Weintraub, environnement de Shustov). Pour identifier ces propriétés des micro-organismes, une série « hétéroclite » est également utilisée, c'est-à-dire une série de tubes à essai contenant des milieux nutritifs, notamment divers glucides, des alcools polyhydriques et un indicateur. La teinture de tournesol ou le bleu de bromothymol sont utilisés comme indicateurs. La décomposition de l'un des glucides avec formation d'acide est détectée par un changement de couleur de l'indicateur, la formation de gaz - par remplissage de gaz et l'émergence d'un flotteur de verre spécial dans un milieu liquide. Ou utilisez du milieu de Gissa semi-liquide (voir) avec de la gélose à 0,5% avec les sucres correspondants et l'indicateur d'Andrade. Après avoir semé le microbe sur ces milieux, la formation d'acide est détectée par le rougissement du milieu, et la formation de gaz - par l'apparition de ses bulles dans la gélose ou par la rupture et le déplacement vers le haut de la colonne de gélose. Les milieux de diagnostic différentiel du deuxième groupe comprennent également la gélose à l'amidon, qui sert à déterminer la capacité des microbes à décomposer l'amidon, le milieu de Clark, etc.
• 3. Milieux sur lesquels se révèle la capacité des microbes à décolorer les colorants ajoutés au bouillon : bleu de méthylène, thionine, tournesol, carmin d'indigo, rouge neutre ou autres (milieu de Rothberger, milieu d'Omelyansky). Le troisième groupe comprend également les milieux contenant des nitrates, qui servent à déterminer la capacité des microbes à réduire les sels d'acide nitrique (nitrates) en sels d'acide nitreux (nitrites) puis en ammoniac ou en azote libre.
• 4. Des milieux qui révèlent la capacité des microbes à assimiler des substances qui ne sont pas assimilées par d'autres microbes, par exemple, un milieu avec du citrate de sodium (Gélose au citrate de Simons) pour distinguer E. coli, qui est dépourvu de la capacité d'assimiler ce milieu, provenant d'autres bactéries du groupe intestinal, ou un milieu avec de l'acide oléique sodique pour différencier le bacille diphtérique de la pseudo-diphtérie et des diphtéroïdes (agarEngering).

Les milieux de diagnostic différentiel comprennent également les milieux pour la différenciation des anaérobies, les milieux tellurites pour la différenciation des bactéries diphtériques, les milieux à l'urée, les milieux alcalins (Dieudonneagar) pour la culture de Vibrio cholerae, etc.

Mercredi Endo. Composé de MPA additionné de 1% de lactose et de fuchsine basique décolorée au sulfite de sodium (indicateur). Le médium Endo a une couleur légèrement rose. Il est utilisé dans le diagnostic des infections intestinales pour différencier les bactéries qui décomposent le lactose pour former des produits acides des bactéries qui n'ont pas cette capacité. Les colonies de microbes lactose-positifs (Escherichia coli) sont rouges en raison de la réduction de la fuchsine. Les colonies de micro-organismes lactose-négatifs - Salmonella, Shigella et autres - sont incolores.

Les environnements de diagnostic différentiel comprennent une rangée hétéroclite courte et étendue. Il se compose de milieux avec glucides (Giss media), MPB, lait, gélatine mésopatamique.

Les milieux Giss sont préparés à base d'eau peptonée, à laquelle sont ajoutés des mono-, di- ou polysaccharides chimiquement purs (glucose, lactose, amidon, etc.).

Pour détecter les changements de pH résultant de la formation d'acide et de la décomposition des glucides, un indicateur est ajouté au milieu. Avec une dégradation plus profonde des glucides, des produits gazeux (CO 2, CH 4, etc.) se forment, qui sont capturés au moyen de flotteurs - de petits tubes à essai descendus dans le milieu à l'envers. Les milieux contenant des glucides peuvent également être préparés denses - avec l'ajout de 0,5 à 1% d'agar-agar. Ensuite, le gazage est capté par la formation de bulles (ruptures) dans la colonne du milieu.

Sur le BCH, qui fait partie de la rangée hétéroclite, on trouve des produits qui se forment lors de la dégradation des acides aminés et des peptones (indole, sulfure d'hydrogène). L'hydrogène sulfuré est détecté en plaçant une bande de papier filtre imbibée d'une solution d'acétate de plomb dans le BCH après inoculation de la culture. Lorsque les acides aminés contenant du soufre sont divisés, du sulfure d'hydrogène est libéré, le morceau de papier devient noir en raison de la formation de sulfure de plomb. Un indicateur complexe peut être utilisé pour déterminer l'indole. L'indole est formé par la dégradation du tryptophane et peut être détecté lorsque cet indicateur est ajouté à une culture cultivée sur BCH. En présence d'indole, le MPB devient vert ou bleu.

Dans les laboratoires bactériologiques pratiques, les méthodes micro et express sont largement utilisées pour l'étude approximative des propriétés biochimiques des micro-organismes. Il existe de nombreux systèmes de test à cet effet. Le système de valeurs indicatrices (NIB) le plus couramment utilisé. Les NIB sont des disques de papier filtre imprégnés de solutions de sucres ou d'autres substrats en combinaison avec des indicateurs. De tels disques sont immergés dans un tube à essai avec une culture cultivée dans un milieu nutritif liquide. Le changement de couleur du disque avec le substrat est utilisé pour juger du travail de l'enzyme. Des systèmes de micro-tests pour étudier l'identification des entérobactéries sont présentés dans des récipients en plastique jetables avec des supports contenant divers substrats, avec l'ajout d'indicateurs. Semer une culture pure de micro-organismes dans de tels systèmes de test vous permet de révéler rapidement la capacité des bactéries à utiliser les citrates, le glucose, le saccharose, à libérer de l'ammoniac, de l'indole, à décomposer l'urée, la lysine, la phénylalanine, etc.

Environnements secs. La gélose nutritive, ainsi que les principaux milieux de diagnostic différentiel, sont actuellement produits sous forme de préparations sèches contenant tous les composants nécessaires. À de telles poudres, il vous suffit d'ajouter de l'eau et de cuire, puis, après avoir versé, de stériliser.

Les milieux de diagnostic différentiel sont des mélanges spéciaux de nutriments utilisés pour déterminer les espèces de microbes et étudier leurs propriétés. Avec la croissance de bactéries sur des supports de diagnostic différentiel, des processus chimiques se produisent en raison de la présence de divers dans la cellule microbienne. Certains d'entre eux sont capables de se scinder, d'autres - et d'autres encore - de provoquer des réactions d'oxydation et de réduction, etc. En raison de l'action des enzymes dans l'environnement de diagnostic différentiel, des changements correspondants se produisent.

Les environnements de diagnostic différentiel peuvent être divisés en quatre groupes principaux.

Riz. 1-6. Diverses formes de dégradation de la gélatine. Riz. 7 - 9. Milieu liquide avec glucides et indicateur Andrade : fig. 7 - pas de fermentation; riz. 8 - fermentation avec formation d'acide; riz. 9 - fermentation avec formation d'acide et de gaz. Riz. 10 - 12. Milieu semi-liquide avec glucides et indicateur BP (issu du milieu de culture sec) : fig. 10 - pas de fermentation; riz. 11 - fermentation avec formation d'acide; riz. 12 - fermentation avec formation d'acide et de gaz. Riz. 13-15. Sérum de tournesol artificiel selon Seitz : riz. 13 - pas de fermentation; riz. 14 - fermentation avec formation d'acide; riz. 15 - fermentation pour former. Riz. 16 et 17. Lait au bleu de méthylène : fig. 16 - pas de réduction ; riz. 17 -réduction. Riz. 18 et 19. Mercredi Simons : fig. 18 - manque d'assimilation du citrate; riz. 19 - assimilation du citrate. Riz. 20 - 24. Lait de tournesol : riz. 20 - pas de fermentation; riz. 21 - fermentation avec formation d'acide; riz. 22 - fermentation avec formation d'alcali; riz. 23 - peptonisation; riz. 24 - réduction. Riz. 25. Liquéfaction roulée (en lumière transmise). Riz. 26. Hémolyse sur gélose au sang (en lumière transmise). Riz. 27. Environnement sanguin avec tellurite de potassium.

1. Milieux contenant des protéines et révélant la capacité des microbes à décomposer les protéines (Propriétés protéolytiques) : viande-peptone "colonne", roulé de sérum de cheval ou de bovin, lait, gélose au sang. Lorsque les bactéries sont inoculées avec une piqûre dans de la viande-gélatine peptonée, une "colonne" en cas de dégradation des protéines, une liquéfaction du milieu est observée. En cas d'ensemencement sur milieu avec du sérum coagulé, la dégradation des protéines est déterminée par la dilution du milieu et la formation de dépressions à sa surface. La décomposition du lait par le microbe est révélée par l'éclaircissement ou la dissolution du lait initialement caillé. La présence d'activité hémolytique de la culture d'essai est vérifiée en l'inoculant dans une gélose au sang spéciale. À la suite de la destruction autour des colonies (par exemple, hémolytiques ou), des zones de dégagement se forment.

2. Milieux de détection de la capacité des microbes à décomposer les glucides et hautement atomiques (Endo mercredi, environnement de Levin, environnement de Russell, Drygalsky - environnement de Konradi, Rapoport - environnement de Weintraub, Shustovoy mercredi). Pour identifier ces propriétés des micro-organismes, une rangée "panachée" est également utilisée, c'est-à-dire une série de tubes à essai contenant divers glucides, des alcools polyhydriques et un indicateur. La teinture de tournesol ou le bleu de bromothymol sont utilisés comme indicateurs. La décomposition de l'un des glucides avec formation d'acide est détectée par un changement de couleur de l'indicateur, la formation de gaz - par remplissage de gaz et l'émergence d'un flotteur de verre spécial dans un milieu liquide. Ou utilisez du milieu de Gissa semi-liquide (voir) avec de la gélose à 0,5% avec les sucres correspondants et l'indicateur d'Andrade. Après avoir semé le microbe sur ces milieux, la formation d'acide est révélée par le rougissement du milieu, et la formation de gaz - par l'apparition de ses bulles dans la gélose ou par la rupture et le déplacement vers le haut de la colonne de gélose. Les milieux de diagnostic différentiel du deuxième groupe comprennent également la gélose à l'amidon, qui sert à déterminer la capacité des microbes à décomposer l'amidon, le milieu de Clark, etc.

3. Milieux sur lesquels se révèle la capacité des microbes à décolorer les colorants ajoutés au bouillon : bleu de méthylène, thionine, tournesol, rouge neutre ou autres (milieu de Rothberger, milieu d'Omelyansky). Le troisième groupe comprend également les milieux contenant des nitrates, qui servent à déterminer la capacité des microbes à réduire les sels d'acide nitrique (nitrates) en sels d'acide nitreux (nitrites) puis en ammoniac ou en azote libre.

4. Des milieux révélant la capacité des microbes à assimiler des substances qui ne sont pas assimilées par d'autres microbes, par exemple, un milieu avec du citrate de sodium (Gélose au citrate de Simons) pour distinguer E. coli, qui est dépourvu de la capacité d'assimiler ce milieu, provenant d'autres bactéries du groupe intestinal, ou un milieu avec de l'acide oléique sodique pour différencier le bacille diphtérique de la fausse diphtérie et des diphtéroïdes (Engering agar).

Les milieux de diagnostic différentiel comprennent également les milieux pour la différenciation des anaérobies, les milieux tellurites pour la différenciation des bactéries diphtériques, les milieux à l'urée, les milieux alcalins (agar Dieudonne) pour la culture de Vibrio cholerae, etc. Voir aussi Identification des microbes.

MÉDIAS DIFFÉRENTIELS DE DIAGNOSTIC

support de diagnostic différentiel, milieu nutritif spécial utilisé pour identifier les micro-organismes ayant une activité biochimique sélective par rapport à certaines substances. En cours de développement, les microbes, à l'aide d'enzymes, décomposent certaines substances qui composent l'environnement, ce qui est établi par un changement dans l'environnement.

Un certain nombre de micro-organismes pathogènes décomposent les glucides, les alcools polyhydriques avec formation d'acides et de gaz (dioxyde de carbone, hydrogène, méthane), ce qui indique qu'ils appartiennent à un certain groupe ou type de bactéries. Pour établir ces propriétés, préparez un liquide ou un semi-liquide D.-d. avec. avec glucose, lactose, saccharose, mannose et autres glucides, alcools polyhydriques (gamme variée), avec indicateurs (Andrade, Gissa), milieu avec du lait. La capacité enzymatique des microbes est déterminée par l'apparition de gaz ou un changement de couleur de l'indicateur. L'intensité de la formation d'acide à partir du glucose est déterminée sur le milieu de Clark, la formation d'acétylméthylcarbonal - en utilisant la réaction de Voges-Proskauer, la capacité amylolytique des microbes - sur la gélose à l'amidon. Les propriétés protéolytiques des microbes sont déterminées sur des milieux ne contenant ni glucose ni glycérine - gélatine de viande-peptone, lactosérum coagulé, gélose au lait. La gélatine de viande-peptone est inoculée par piqûre au fond du tube à essai, incubée à t 20-22°C, puis déterminer le degré de liquéfaction de la gélatine. La capacité hémolytique des microbes est établie par placage sur gélose au sang ou bouillon de sang. Pour déterminer l'activité réductrice des microbes, utilisez D.-d. avec. avec des colorants (, tournesol, indocarmine, thionine, etc.). Au fur et à mesure que les microbes se développent, une décoloration complète ou partielle ou une décoloration du colorant se produit. On utilise également des milieux aux nitrates, dans lesquels, sous l'influence des enzymes de certains microbes, les nitrates sont réduits en nitrites puis en ammoniac ou en azote libre.

Dictionnaire encyclopédique vétérinaire. - M. : "Encyclopédie soviétique". Rédacteur en chef V.P. Chichkov. 1981 .

Voyez ce qu'est « MÉDIAS DIFFÉRENTIELS DE DIAGNOSTIC » dans d'autres dictionnaires :

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Média culturel- milieux liquides ou solides utilisés pour la culture de bactéries, levures, champignons microscopiques, algues, protozoaires, virus et cultures de cellules végétales ou animales dans des conditions de laboratoire ou industrielles. Synthétique P. avec. ... ... Grande Encyclopédie soviétique

Gissa mercredi- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, bactériologiste américain ; synonyme : rangée panachée, rangée colorée) milieu nutritif de diagnostic différentiel liquide ou semi-liquide conçu pour déterminer et différencier les bactéries par leur capacité à décomposer divers ... ... Dictionnaire médical complet

Mercredi McConkey- (A. Ma Conkey, 1861 1931, bactériologiste anglais) milieux nutritifs de diagnostic différentiel sélectif pour l'isolement des bactéries de la famille. Entérobactéries, par ex. Escherichia coli contenant de l'acide taurocholique sodique et du lactose ... Dictionnaire médical complet

Nutriments- des substrats constitués de composants qui fournissent les conditions nécessaires à la culture de micro-organismes ou à l'accumulation de leurs déchets. Les milieux de culture diffèrent par leur objectif, leur consistance et leur composition. Selon leur but ...... Encyclopédie médicale

Diagnostic microbiologique- sur la base de l'identification de l'agent pathogène ou de l'identification de la réponse immunitaire du corps du patient à celui-ci. L'étape initiale de M.D. est la sélection du matériel et le transport des échantillons au laboratoire. Le type de matériau pour la recherche est déterminé par les caractéristiques ... ... Encyclopédie médicale

Médicament- I Médecine La médecine est un système de connaissances scientifiques et d'activités pratiques dont les objectifs sont de renforcer et de maintenir la santé, de prolonger la vie des personnes, de prévenir et de traiter les maladies humaines. Pour accomplir ces tâches, M. étudie la structure et ... ... Encyclopédie médicale

Organismes anaérobies- Les bactéries aérobies et anaérobies sont préalablement identifiées dans un milieu nutritif liquide par le gradient de concentration en O2 : 1. Les bactéries aérobies obligatoires (nécessitant de l'oxygène) se rassemblent principalement dans la partie supérieure du tube pour absorber ... ... Wikipedia

Pour distinguer certains types de bactéries des autres sur la base de leur activité enzymatique, ils sont utilisés environnements de diagnostic différentiel ... Par exemple, l'environnement Giss, l'environnement Endo, l'environnement Levin, l'environnement Ploskirev, l'environnement Olkenitsky. Les médias Endo, Levin, Ploskirev dans les boîtes de Pétri sont utilisés pour différencier les bactéries du groupe intestinal selon leur capacité à fermenter le lactose. Ces milieux contiennent de la gélose nutritive, du lactose et un indicateur qui change de couleur en milieu acide (indicateur de pH). Si des bactéries qui fermentent le lactose, telles que E. coli, sont semées dans un tel environnement, de l'acide se forme à la suite de la fermentation du lactose et l'indicateur changera de couleur dans un environnement acide. Ainsi, les colonies d'Escherichia coli sur ces milieux seront colorées selon la couleur de l'indicateur : sur milieu d'Endo et de Ploskirev - en rouge, sur milieu de Levin - en noir et bleu. Si ces milieux sont semés avec des bactéries qui ne fermentent pas le lactose, par exemple des bâtons de fièvre typhoïde ou de dysenterie, alors il ne se forme pas d'acide, la réaction du milieu restera légèrement alcaline et la couleur de l'indicateur ne changera pas. Par conséquent, les colonies de bactéries qui ne fermentent pas le lactose seront incolores sur ces milieux. Le milieu de Ploskirev peut également être attribué aux milieux électifs pour l'isolement des bâtonnets de dysenterie, car ce milieu contient des sels biliaires, qui inhibent la croissance d'E. coli, et un colorant vert brillant, qui inhibe la croissance de la microflore de l'air. La gélose au sulfite de bismuth est un milieu de diagnostic différentiel utilisé principalement dans le diagnostic de la salmonellose. Avec la croissance de Salmonella, le bismuth est restauré à partir de ses sels et les colonies de Salmonella deviennent noires. Les milieux de diagnostic différentiel de Giss (série « hétéroclite ») sont préparés à partir d'un milieu liquide (eau peptonée) ou semi-liquide viande-peptone gélose. Ils contiennent n'importe quel glucide ou alcool polyhydrique (lactose, glucose, mannitol, saccharose) et un indicateur qui change de couleur en milieu acide. Un flotteur en verre est placé dans un tube à essai avec un milieu de Giss liquide. Si un microbe est semé sur le milieu Giss, qui fermente ce glucide avec formation d'acide et de gaz, c'est-à-dire jusqu'aux produits finaux, alors le milieu changera de couleur, dans un milieu semi-liquide des bulles et des ruptures apparaissent dans le épaisseur de la gélose, en milieu liquide - une bulle de gaz dans le flotteur. Lorsqu'un glucide est fermenté uniquement en produits intermédiaires (en acide), seule la couleur du milieu change.Les milieux combinés ne contenant pas un glucide, mais deux ou trois sont également utilisés, par exemple le milieu d'Olkenitsky - gélose à trois sucres avec de l'urée. Un tube de milieu Olkenitsky remplace le milieu gélosé incliné et Giss par du lactose, du saccharose et du glucose. Le mercredi est préparé sur la base d'AMP peu denses. Contient du lactose (1 %), du saccharose (1 %), du glucose (0,1 %), de l'urée, du sel de Mohr (sulfate ferreux), de l'hyposulfite de sodium et un indicateur. Après stérilisation, le milieu est versé sous forme aplatie dans une éprouvette de manière à obtenir une colonne et une partie biseautée. Le semis se fait d'un coup sur la partie biseautée et d'une piqûre dans une colonne. Lorsque vous fermentez plus de glucides (lactose, saccharose ou les deux sucres), la couleur de l'ensemble du milieu change ; lorsque seul le glucose est fermenté, la couleur de la barre change et la partie biseautée reste inchangée. La formation de gaz est indiquée par la présence de bulles dans la colonne de gélose. Les cultures qui décomposent l'urée pour former de l'ammoniac donnent une réaction alcaline. Dans ce cas, l'acide formé lors de la fermentation des glucides est neutralisé, et la couleur du milieu ne change pas. La dégradation de l'urée est caractéristique des protéines et de certains E. coli. Les entérobactéries pathogènes ne décomposent pas l'urée. L'ajout de sel de Mohr et d'hyposulfite nous permet également d'étudier la capacité des bactéries à former du sulfure d'hydrogène en noircissant dans la colonne de gélose à la suite de la conversion du sulfate ferreux en sulfure noir.

Pour la méthode expresse de détermination de l'activité enzymatique des micro-organismes, des systèmes de microtest et un système de papiers indicateurs (NIB) sont utilisés. Le système de microtest est un conteneur en polystyrène transparent, composé de plusieurs cellules. Les cellules contiennent des milieux de noyau séchés avec des glucides et des indicateurs de pH. Une suspension d'une culture de bactéries d'une certaine densité est inoculée dans chaque cellule. Physique est versé dans des cellules de contrôle. Solution. Le résultat est pris en compte après 3-4 heures d'incubation dans un thermostat selon le changement de couleur de l'indicateur.Les systèmes de papiers indicateurs (NIB) pour l'identification de la famille des Enterobacteriaceae sont des disques ou bandes de papier chromatographique recouverts d'un film protecteur d'alcool polyvinylique et contenant un substrat et un indicateur spécifiques. Dans un tube à essai avec une solution saline ou tampon, une boucle complète de la culture d'essai ou une goutte d'une suspension microbienne épaisse est introduite, puis placée dans les disques avec une pince à épiler brûlée. La culture de bactéries n'est pas ajoutée aux tubes témoins. Le résultat est pris en compte en changeant la couleur de l'indicateur. Pour doser l'hydrogène sulfuré, le disque est placé dans une éprouvette à la surface de l'AMP ensemencée avec une piqûre, ce qui permet de déterminer simultanément la mobilité. Dans toutes les éprouvettes, le résultat préliminaire le même jour et le résultat final après dix-huit à vingt-quatre heures sont pris en compte. L'activité oxydase est déterminée en broyant la culture sur un papier indicateur après 30-60 secondes.

Isolement de cultures pures de bactéries aérobies et anaérobies. Énumérez les principes et les méthodes d'obtention de colonies isolées d'aérobies. Méthodes d'isolement de cultures pures d'anaérobies. Décrivez la méthode Weinberg par jour.

Culture et isolement de cultures pures de bactéries aérobies

Pour la culture de micro-organismes, certaines conditions sont nécessaires : température, conditions aérobies ou anaérobies.

La température doit être optimale pour l'espèce. La plupart des bactéries pathogènes se développent à 37°C. Cependant, pour certaines espèces, une température plus basse est optimale, ce qui est associé aux particularités de leur écologie. Ainsi, pour le bacille de la peste, dont l'habitat naturel est le rongeur pendant l'hibernation, la température optimale est de 28°C, ainsi que pour le leptospira, pour le bacille du botulisme - 28°C-35°C.

En plus de la température optimale, pour la culture des micro-organismes, selon les espèces, un environnement aérobie ou anaérobie est requis.

Afin d'étudier la morphologie, les propriétés culturelles, biochimiques et autres des microbes, il est nécessaire d'obtenir une culture pure. Habituellement, une culture de microbes est appelée leur accumulation sur un milieu nutritif sous forme de turbidité, de croissance près du fond (paroi) ou d'un film à la surface d'un milieu liquide ou de colonies sur un milieu dense. Une seule colonie est formée à partir d'une cellule microbienne. Une culture pure est une culture de microbes de la même espèce obtenue à partir d'une seule colonie. Dans les laboratoires, certaines souches connues de microbes sont utilisées pour diverses études. Une souche est une culture pure de microbes obtenus à partir d'une source spécifique, à un moment précis, avec des propriétés connues. Typiquement, les souches microbiennes sont désignées par un numéro spécifique. Par exemple, la souche Staphylococcus aureus 209P est utilisée pour déterminer l'activité de la pénicilline.

L'isolement de cultures pures d'aérobies prend généralement trois jours et s'effectue selon le schéma suivant :

1er jour - microscopie d'un frottis du matériel de test, coloré (généralement par Gram) - pour une connaissance préliminaire de la microflore, qui peut être utile pour choisir un milieu de culture pour l'inoculation. Puis ensemencement du matériel sur la surface de la gélose nutritive congelée pour obtenir des colonies isolées. Le tamisage peut se faire selon la méthode Drygalsky dans trois boîtes de Pétri avec un milieu nutritif. Une goutte de matière est appliquée sur le premier gobelet et étalée à la spatule sur l'ensemble du gobelet. Ensuite, avec la même spatule, répartissez le reste de culture dessus sur la deuxième tasse et de la même manière sur la troisième. Le plus grand nombre de colonies se développera sur la première plaque, le moins sur la troisième. Des colonies isolées se développeront sur l'une des plaques, en fonction du nombre de cellules microbiennes présentes dans le matériel d'essai.

Le même résultat peut être obtenu en tamisant sur une tasse. Pour ce faire, divisez la tasse en quatre secteurs. Le matériel à l'étude est ensemencé avec une anse bactériologique avec des coups sur le premier secteur, puis, après calcination et refroidissement de l'anse, l'inoculation est répartie du premier secteur au deuxième et de la même manière séquentiellement dans les troisième et quatrième secteurs. Des colonies isolées sont formées à partir de cellules microbiennes individuelles après 24 h d'incubation dans un thermostat.

2ème jour - l'étude des colonies qui se sont développées sur les plaques, leur description. Les colonies peuvent être transparentes, translucides ou opaques, elles ont des tailles différentes, des contours arrondis réguliers ou irréguliers, une forme convexe ou plate, une surface lisse ou rugueuse, lisse ou ondulée, des bords déchiquetés. Ils peuvent être incolores ou blancs, dorés, rouges, jaunes. Sur la base de l'étude de ces caractéristiques, les colonies cultivées sont divisées en groupes. Ensuite, une colonie isolée est sélectionnée dans le groupe d'étude, un frottis est préparé pour un examen microscopique afin de vérifier l'homogénéité des microbes dans la colonie. La même colonie est inoculée dans un tube à essai avec une gélose nutritive inclinée.

3ème jour - vérification de la pureté de la culture cultivée sur gélose inclinée par microscopie de frottis. Avec l'homogénéité des bactéries étudiées, l'isolement d'une culture pure peut être considéré comme complet.

Pour identifier les bactéries isolées, des traits culturels sont étudiés, c'est-à-dire la nature de la croissance sur des milieux nutritifs liquides et solides. Par exemple, les streptocoques sur le bouillon de sucre forment un sédiment de fond et pariétal, sur de la gélose au sang - de petites colonies ponctuelles; le vibrion cholérique forme un film à la surface de l'eau peptonée alcaline et des colonies transparentes sur la gélose alcaline ; le bacille de la peste sur gélose nutritive forme des colonies sous forme de "mouchoirs en dentelle" avec un centre dense et de fins bords ondulés, et dans un milieu nutritif liquide - un film à la surface, puis des filaments s'étendant à partir de celui-ci sous la forme de "stalactites ".

Culture et isolement de cultures pures de bactéries anaérobies

Pour la culture des anaérobies, il est nécessaire d'abaisser le potentiel d'oxydoréduction du milieu, de créer une anaérobiose en éliminant l'oxygène par des méthodes physiques, chimiques ou biologiques.

Les méthodes physiques comprennent :

1) élimination mécanique de l'air au moyen d'une pompe de l'anae-rostat, dans laquelle des boîtes avec des inoculations sont placées. En même temps, vous pouvez remplacer l'air par un gaz indifférent : azote, hydrogène, dioxyde de carbone.

2) croissance dans un milieu contenant des substances réductrices. Kitta-Tarozzi mercredi est un bouillon de sucre avec des morceaux de foie ou de viande. Le glucose et les morceaux d'organes ont une capacité réductrice. Le milieu est versé sur le dessus avec une couche d'huile de vaseline pour bloquer l'accès de l'oxygène de l'air.

3) La méthode la plus simple, mais la moins fiable, consiste à faire pousser profondément dans une haute colonne de gélose au sucre.

Les méthodes chimiques consistent dans le fait que des plats contenant des cultures d'anaérobies sont placés dans un dessiccateur hermétiquement fermé, où sont placés des produits chimiques, par exemple du pyrogallol et des alcalis, entre lesquels la réaction se déroule avec l'absorption d'oxygène.

La méthode biologique est basée sur la culture simultanée d'anaérobies et d'aérobies sur des milieux nutritifs solides dans des boîtes de Pétri, hermétiquement fermées après inoculation. Initialement, l'oxygène est absorbé par les aérobies en croissance, puis la croissance des anaérobies commence.

L'isolement d'une culture pure d'anaérobies commence par l'accumulation de bactéries anaérobies par inoculation sur milieu Kitta-Tarozzi. À l'avenir, les colonies isolées sont obtenues de l'une des deux manières suivantes :

1) le matériel est ensemencé par mélange avec de la gélose au sucre chaud fondu dans des tubes en verre. Après solidification de la gélose, des colonies isolées se développent dans ses profondeurs, qui sont prélevées en coupant le tube et repiquées sur milieu Kitt-Tarozzi (méthode de Weinberg) ;

2) l'ensemencement du matériel est réalisé sur des plaques avec un milieu nutritif et incubé en anaérostat. Les colonies isolées cultivées sur plaque sont repiquées sur milieu Kitt-Tarozzi (méthode Zeissler).