محیط های تشخیص افتراقی برای چه منظوری استفاده می شود؟ نمونه ها و اصول کار آنها

محیط های تشخیص افتراقی -- مخلوط های خاص مواد مغذی، برای تعیین گونه های میکروب ها و بررسی خواص آنها استفاده می شود. هنگامی که باکتری ها در محیط های تشخیص افتراقی رشد می کنند، فرآیندهای شیمیایی به دلیل وجود آنزیم های مختلف در سلول میکروبی رخ می دهد. برخی از آنها قادر به تجزیه پروتئین ها هستند، برخی دیگر - کربوهیدرات ها، برخی دیگر - باعث واکنش های اکسیداسیون و کاهش و غیره می شوند. به لطف عملکرد آنزیم ها، تغییرات مربوطه در محیط تشخیص افتراقی رخ می دهد. محیط های تشخیص افتراقی را می توان به چهار گروه اصلی تقسیم کرد.

• 1. محیط های حاوی پروتئین و نشان دهنده توانایی میکروب ها برای تجزیه پروتئین ها (خواص پروتئولیتیک): "ستون" ژلاتین گوشت-پپتون، سرم اسب یا گاو منعقد شده، شیر، آگار خون. هنگام تلقیح باکتری با سوراخ کردن به ژلاتین پپتون گوشت، در یک "ستون"، در صورت تجزیه پروتئین، مایع شدن محیط مشاهده می شود. هنگامی که روی یک محیط با آب پنیر منعقد شده تلقیح می شود، تجزیه پروتئین با مایع شدن محیط و ایجاد فرورفتگی در سطح آن تعیین می شود. تجزیه شیر توسط یک میکروب با پاکسازی یا انحلال شیر در ابتدا منعقد شده آشکار می شود. وجود فعالیت همولیتیک کشت آزمایشی با تلقیح آن در پتری دیش روی آگار خون مخصوص بررسی می شود. در نتیجه تخریب گلبول های قرمز خون در اطراف مستعمرات (به عنوان مثال، استرپتوکوک همولیتیک یا استافیلوکوک)، مناطق پاکسازی تشکیل می شوند.
• 2. محیطی برای شناسایی توانایی میکروب ها در تجزیه کربوهیدرات ها و الکل های با اتم بالا (مدیوم اندو، محیط لوین، محیط راسل، دریگالسکی - محیط کنرادی، محیط راپوپورت - واینتراب، محیط شوستوف). برای شناسایی این ویژگی‌های میکروارگانیسم‌ها، از یک ردیف "متنوع" نیز استفاده می‌شود، یعنی یک سری لوله آزمایش حاوی مواد مغذی، از جمله کربوهیدرات‌های مختلف، الکل‌های پلی‌هیدریک و یک نشانگر. تنتور لیتموس یا بروموتیمول آبی به عنوان شاخص استفاده می شود. تجزیه هر یک از کربوهیدرات ها با تشکیل اسید با تغییر رنگ نشانگر تشخیص داده می شود. یا از مدیا هیس نیمه مایع (نگاه کنید به) با آگار 0.5 درصد با قندهای مناسب و نشانگر آندراد استفاده کنید. پس از تلقیح میکروب روی این محیط ها، تشکیل اسید با قرمز شدن محیط و تشکیل گاز با ظاهر شدن حباب های آن در آگار یا با پارگی و جابجایی ستون آگار به سمت بالا مشخص می شود. رسانه های تشخیص افتراقی گروه دوم نیز شامل نشاسته آگار است که برای تعیین توانایی میکروب ها در تجزیه نشاسته، محیط کلارک و ... استفاده می شود.
• 3. محیطی که توانایی میکروب‌ها برای رنگ‌زدایی رنگ‌های اضافه شده به آبگوشت بر روی آن آشکار می‌شود: متیلن بلو، تیونین، تورنسل، کارمین نیلی، قرمز خنثی یا موارد دیگر (محیط روتبرگر، محیط اوملیانسکی). گروه سوم نیز شامل محیط های حاوی نیترات است که برای تعیین توانایی میکروب ها در کاهش نمک ها استفاده می شود اسید نیتریک(نیترات ها) به نمک های اسید نیتروژن (نیتریت ها) و سپس به آمونیاک یا نیتروژن آزاد.
• 4. محیط هایی که توانایی میکروب ها را در جذب مواد غیر قابل هضم توسط میکروب های دیگر نشان می دهد، به عنوان مثال، محیطی با سیترات سدیم (Simons citrate agar) برای تشخیص اشریشیا کلی که فاقد توانایی جذب این محیط است از سایر باکتری ها. از گروه روده، یا محیطی با اسید اولئیک سدیم برای تمایز باسیل دیفتری از دیفتری کاذب و دیفتروئیدها (انجرینگ آگار).

محیط های تشخیصی افتراقی نیز شامل محیط هایی برای افتراق بی هوازی ها، محیط های تلوریت برای تمایز باکتری های دیفتری، محیط های حاوی اوره، رسانه قلیایی(Dieudonnéagar) برای کشت ویبریو کلرا و غیره.

محیط اندو شامل MPA با افزودن 1% لاکتوز و فوشین بازی بی رنگ شده با سولفیت سدیم (نشانگر). مدیوم اندو رنگ کمی صورتی دارد. در تشخیص عفونت های روده ای برای تمایز باکتری هایی که لاکتوز را تجزیه می کنند و محصولات اسیدی تشکیل می دهند از باکتری هایی که این توانایی را ندارند استفاده می شود. کلنی های میکروب های لاکتوز مثبت (اشریشیا کلی) به دلیل کاهش فوشسین قرمز هستند. کلنی های میکروارگانیسم های لاکتوز منفی - سالمونلا، شیگلا و غیره - بی رنگ هستند.

محیط‌های تشخیصی افتراقی شامل یک سری متلای کوتاه و طولانی است. این شامل محیط هایی با کربوهیدرات (Hiss media)، MPB، شیر و ژلاتین گوشت-پپتون است.

محیط هیس بر اساس آب پپتون تهیه می شود که مونو، دی یا پلی ساکاریدهای خالص شیمیایی (گلوکز، لاکتوز، نشاسته و غیره) به آن اضافه می شود.

برای تشخیص تغییرات pH در نتیجه تشکیل اسیدها و تجزیه کربوهیدرات ها، یک نشانگر به رسانه اضافه می شود. با تجزیه عمیق تر کربوهیدرات ها، محصولات گازی (CO 2، CH 4، و غیره) تشکیل می شوند که با استفاده از شناورها - لوله های آزمایش کوچک که به صورت وارونه در محیط پایین می آیند، گرفته می شوند. محیط های حاوی کربوهیدرات را می توان به عنوان مواد متراکم - با افزودن 0.5-1٪ آگار-آگار - تهیه کرد. سپس تشکیل گاز با تشکیل حباب ها (شکستن) در ستون محیط تشخیص داده می شود.

در MPB، که بخشی از سری متلایی است، محصولاتی که در طی تجزیه اسیدهای آمینه و پپتون ها (ایندول، سولفید هیدروژن) تشکیل شده اند، یافت می شوند. سولفید هیدروژن با قرار دادن یک نوار کاغذ صافی آغشته به محلول استات سرب در MPB پس از کاشت کشت شناسایی می شود. هنگامی که اسیدهای آمینه حاوی گوگرد تجزیه می شوند، سولفید هیدروژن آزاد می شود و به دلیل تشکیل سولفید سرب، کاغذ سیاه می شود. برای تعیین ایندول می توان از یک شاخص پیچیده استفاده کرد. ایندول از تجزیه تریپتوفان تشکیل می شود و زمانی که این شاخص به کشت رشد یافته روی MPB اضافه شود، قابل تشخیص است. در حضور ایندول، MPB سبز یا آبی می شود.

در آزمایشگاه های باکتری شناسی عملی، روش های میکرو و بیان به طور گسترده ای برای مطالعه شاخصی از خواص بیوشیمیایی میکروارگانیسم ها استفاده می شود. سیستم های آزمایشی زیادی برای این منظور وجود دارد. متداول ترین سیستم کاغذهای شاخص (SIB) مورد استفاده قرار می گیرد. SIB ها دیسک های کاغذ صافی آغشته به محلول های قند یا سایر بسترها در ترکیب با نشانگرها هستند. چنین دیسک‌هایی با کشت در یک محیط غذایی مایع در یک لوله آزمایش فرو می‌روند. تغییر رنگ دیسک با سوبسترا برای قضاوت در مورد عملکرد آنزیم استفاده می شود. سیستم های میکرو تست برای مطالعه شناسایی انتروباکتری ها به صورت یکبار مصرف ارائه می شوند ظروف پلاستیکیبا رسانه های حاوی بسترهای مختلف، با افزودن نشانگرها. کاشت یک کشت خالص از میکروارگانیسم ها در چنین سیستم های آزمایشی به شما امکان می دهد تا به سرعت توانایی باکتری ها در استفاده از سیترات، گلوکز، ساکارز، آزادسازی آمونیاک، ایندول، تجزیه اوره، لیزین، فنیل آلانین و غیره را شناسایی کنید.

محیط های خشک نوترینت آگار و همچنین رسانه های تشخیص افتراقی اصلی در حال حاضر به صورت آماده سازی خشک حاوی تمام اجزای لازم تولید می شوند. به چنین پودرهایی فقط باید آب اضافه کنید و آنها را بجوشانید و بعد از ریختن آنها را استریل کنید.

رسانه های تشخیص افتراقی مخلوط های خاصی از مواد مغذی هستند که برای تعیین گونه های میکروب ها و مطالعه خواص آنها استفاده می شوند. هنگامی که باکتری ها در محیط های تشخیص افتراقی رشد می کنند، به دلیل وجود باکتری های مختلف در سلول میکروبی، فرآیندهای شیمیایی رخ می دهد. برخی از آنها قادر به شکستن هستند، برخی دیگر - و برخی دیگر - باعث واکنش های اکسیداسیون و کاهش و غیره می شوند. به لطف عمل آنزیم ها، تغییرات مربوطه در محیط تشخیص افتراقی رخ می دهد.

محیط های تشخیص افتراقی را می توان به چهار گروه اصلی تقسیم کرد.

برنج. 1-6. اشکال مختلفتجزیه ژلاتین برنج. 7 - 9. محیط مایع با کربوهیدرات و نشانگر آندراد: شکل. 7 - عدم تخمیر; برنج. 8 - تخمیر با تشکیل اسید; برنج. 9- تخمیر با تشکیل اسید و گاز. برنج. 10 - 12. محیط نیمه مایع با کربوهیدرات و شاخص BP (از محیط غذایی خشک): شکل. 10 - عدم تخمیر; برنج. 11 - تخمیر با تشکیل اسید. برنج. 12- تخمیر با تشکیل اسید و گاز. برنج. 13-15. سرم تورنسل مصنوعی Seitz: شکل. 13 - عدم تخمیر; برنج. 14 - تخمیر با تشکیل اسید. برنج. 15 - تخمیر با تشکیل. برنج. 16 و 17. شیر با متیلن بلو: شکل. 16 - عدم کاهش; برنج. 17 - کاهش. برنج. 18 و 19. رسانه سیمونز: شکل. 18 - عدم جذب سیترات. برنج. 19 - جذب سیترات. برنج. 20 - 24. شیر تورنسل: برنج. 20 - عدم تخمیر; برنج. 21 - تخمیر با تشکیل اسید. برنج. 22 - تخمیر با تشکیل قلیایی. برنج. 23 - پپتونیزاسیون; برنج. 24 - کاهش. برنج. 25. مایع شدن محصول سیم پیچ (در نور عبوری). برنج. 26. همولیز بر روی آگار خون (در نور عبوری). برنج. 27. محیط خونی با تلوریت پتاسیم.

1. محیط های حاوی پروتئین و نشان دهنده توانایی میکروب ها برای تجزیه پروتئین ها (خواص پروتئولیتیک): "ستون" گوشت-پپتون، سرم اسب یا گاو منعقد شده، شیر، آگار خون. هنگام تلقیح باکتری با سوراخ کردن به ژلاتین پپتون گوشت، در یک "ستون"، در صورت تجزیه پروتئین، مایع شدن محیط مشاهده می شود. هنگامی که روی یک محیط با آب پنیر منعقد شده تلقیح می شود، تجزیه پروتئین با مایع شدن محیط و ایجاد فرورفتگی در سطح آن تعیین می شود. تجزیه شیر توسط یک میکروب با پاکسازی یا انحلال شیر در ابتدا منعقد شده آشکار می شود. وجود فعالیت همولیتیک کشت آزمایشی با تلقیح آن بر روی آگار خون مخصوص بررسی می شود. در نتیجه تخریب در اطراف مستعمرات (به عنوان مثال، همولیتیک یا) مناطق پاکسازی تشکیل می شود.

2. رسانه ای برای شناسایی توانایی میکروب ها در تجزیه کربوهیدرات ها و کربوهیدرات های پر اتم (مدیوم اندو، محیط لوین، محیط راسل، دریگالسکی - محیط کنرادی، محیط راپوپورت - واینتراب، محیط شوستوف). برای شناسایی این ویژگی های میکروارگانیسم ها، از یک سری "متنوع" نیز استفاده می شود، یعنی یک سری لوله های آزمایش حاوی کربوهیدرات های مختلف، الکل های پلی هیدریک و یک نشانگر. تنتور لیتموس یا بروموتیمول آبی به عنوان شاخص استفاده می شود. تجزیه هر یک از کربوهیدرات ها با تشکیل اسید با تغییر رنگ نشانگر، تشکیل گاز با پر شدن با گاز و شناور شدن یک شناور شیشه ای ویژه در یک محیط مایع تشخیص داده می شود. یا از مدیا هیس نیمه مایع (نگاه کنید به) با آگار 0.5 درصد با قندهای مناسب و نشانگر آندراد استفاده کنید. پس از تلقیح میکروب بر روی این محیط ها، تشکیل اسید با قرمز شدن محیط و تشکیل گاز با ظاهر شدن حباب های آن در آگار یا با پارگی و جابجایی ستون آگار به سمت بالا مشخص می شود. رسانه های تشخیص افتراقی گروه دوم نیز شامل نشاسته آگار است که برای تعیین توانایی میکروب ها در تجزیه نشاسته، محیط کلارک و ... استفاده می شود.

3. محیطی که توانایی میکروب‌ها برای رنگ‌زدایی رنگ‌های اضافه‌شده به آبگوشت بر روی آن آشکار می‌شود: متیلن بلو، تیونین، تورنسل، قرمز خنثی یا موارد دیگر (محیط Rothberger، Medium Omelyansky). گروه سوم همچنین شامل محیط های حاوی نیترات است که برای تعیین توانایی میکروب ها در کاهش نمک های اسید نیتریک (نیترات ها) به نمک های اسید نیتروژن (نیتریت ها) و سپس به آمونیاک یا نیتروژن آزاد استفاده می شود.

4. محیط هایی که توانایی میکروب ها را در جذب مواد غیر قابل هضم توسط میکروب های دیگر نشان می دهد، به عنوان مثال، محیطی با سیترات سدیم (Simons citrate agar) برای تشخیص اشریشیا کلی که فاقد توانایی جذب این محیط است از سایر باکتری ها. از گروه روده، یا محیطی با اسید اولئیک سدیم برای تمایز باسیل دیفتری از دیفتری کاذب و دیفتروئیدها (انجرینگ آگار).

محیط‌های تشخیصی افتراقی نیز شامل محیط‌هایی برای تمایز بی‌هوازی‌ها، محیط‌های تلوریت برای تمایز باکتری‌های دیفتری، محیط‌های حاوی اوره، محیط‌های قلیایی (Dieudonne agar) برای کشت Vibrio cholerae و غیره است. همچنین به شناسایی میکروب‌ها مراجعه کنید.

محیط های تشخیصی افتراقی

رسانه های تشخیص افتراقیمحیط های غذایی ویژه ای که برای شناسایی میکروارگانیسم هایی که فعالیت بیوشیمیایی انتخابی نسبت به مواد خاصی دارند استفاده می شود. میکروب ها در طول رشد خود با کمک آنزیم ها مواد خاصی را که در محیط وجود دارد تجزیه می کنند که با تغییرات محیطی مشخص می شود.

تعدادی از میکروارگانیسم های بیماری زا با تشکیل اسیدها و گازها (دی اکسید کربن، هیدروژن، متان) کربوهیدرات ها و الکل های پلی هیدرویک را تجزیه می کنند که نشان دهنده تعلق آنها به گروه یا نوع خاصی از باکتری ها است. برای ایجاد این خواص، مایع یا نیمه مایع تهیه کنید DD. با.با گلوکز، لاکتوز، ساکارز، مانوز و سایر کربوهیدرات‌ها، الکل‌های پلی‌هیدریک (سری‌های متنوع)، با شاخص‌ها (Andrade، Gissa)، رسانه‌ها با شیر. توانایی آنزیمی میکروب ها با ظاهر گاز یا تغییر رنگ نشانگر تعیین می شود. شدت تشکیل اسید از گلوکز بر روی محیط کلارک، تشکیل استیل متیل کربنال با استفاده از واکنش Voges-Proskauer، و توانایی آمیلولیتیک میکروب ها روی نشاسته آگار تعیین می شود. خواص پروتئولیتیک میکروب ها بر روی محیط هایی که حاوی گلوکز و گلیسرول، ژلاتین گوشت-پپتون، سرم اسب منعقد شده و شیر آگار نیستند تعیین می شود. ژلاتین پپتون گوشت با سوراخ کردن ته لوله آزمایش تلقیح می شود و در انکوبه می شود.تی DD. با. 2022 درجه سانتیگراد، و سپس درجه مایع شدن ژلاتین را تعیین کنید. توانایی همولیتیک میکروب ها با آبکاری بر روی آگار خون یا براث خون تعیین می شود. برای تعیین فعالیت کاهنده میکروب ها، استفاده کنید

با رنگها (، تورنسل، ایندیدوکارمین، تیونین، و غیره). با رشد میکروب ها، تغییر رنگ کامل یا جزئی یا تغییر رنگ رنگ رخ می دهد. از محیط های حاوی نیترات نیز استفاده می شود که در آن نیترات ها تحت تأثیر آنزیم های میکروب های خاص به نیتریت و سپس به آمونیاک یا نیتروژن آزاد تبدیل می شوند.. فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی. - م.: "دایره المعارف شوروی". 1981 .

سردبیر V.P. شیشکوف

ببینید «محیط‌های تشخیصی متفاوت» در فرهنگ‌های دیگر چیست:محیط های تشخیص افتراقی

- مخلوط های ویژه ای از مواد مغذی (به محیط های غذایی مراجعه کنید) که میکروارگانیسم ها بر روی آنها رشد می کنند تا گونه های آنها مشخص شود. به D.d.s. شامل محیط های پروتئینی مورد استفاده برای تعیین همولیتیک و... محیط های غذایی، بسترهای مورد استفاده برای کشت درمیکروارگانیسم ها و کشت بافت در عمل میکروبیولوژیک، S.p به طور گسترده ای برای تشخیص آزمایشگاهی بیماری های عفونی، برای... ... فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی

محیط های غذایی باکتریولوژیکی- بسترهای مایع، نیمه مایع یا جامد که برای رشد میکروارگانیسم ها در شرایط آزمایشگاهی یا صنعتی استفاده می شود. برای جداسازی باکتری‌ها، قارچ‌ها و تک یاخته‌های خالص از اجسام بیوژنیک یا زیست‌زا استفاده می‌شود، برای... ... فرهنگ لغت میکروبیولوژی

رسانه فرهنگ- محیط های مایع یا جامد مورد استفاده برای رشد باکتری ها، مخمرها، قارچ های میکروسکوپی، جلبک ها، تک یاخته ها، ویروس ها و کشت سلول های گیاهی یا حیوانی در شرایط آزمایشگاهی یا صنعتی. P. s مصنوعی... ... دایره المعارف بزرگ شوروی

گیسا چهارشنبه- (Ph. N. Hiss، 1868 1913، باکتری شناس آمریکایی؛ مترادف: سری رنگارنگ، سری رنگی) محیط های مغذی تشخیصی دیفرانسیل مایع یا نیمه مایع که برای شناسایی و تمایز باکتری ها بر اساس توانایی آنها در تجزیه انواع مختلف... ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

چهارشنبه های مک کانکی- (A. Ma Conkey، 1861 1931، باکتری شناس انگلیسی) محیط های مغذی تشخیصی افتراقی انتخابی برای جداسازی باکتری های خانواده. انتروباکتریاسه، به عنوان مثال. کولی حاوی اسید تاوروکولیک سدیم و لاکتوز... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

رسانه های مغذی- بسترهای متشکل از اجزایی که فراهم می کنند شرایط لازمبرای کشت میکروارگانیسم ها یا تجمع محصولات متابولیکی آنها. مواد مغذی از نظر هدف، قوام و ترکیب متفاوت است. با توجه به هدفشون...... دایره المعارف پزشکی

تشخیص میکروبیولوژیکی- مبتنی بر شناسایی پاتوژن یا شناسایی پاسخ ایمنی بیمار به آن است. مرحله اولیه M.d. انتخاب مواد و انتقال نمونه ها به آزمایشگاه است. نوع مواد برای تحقیق بر اساس ویژگی ها تعیین می شود... ... دایره المعارف پزشکی

دارو- I Medicine پزشکی سیستمی از دانش علمی و فعالیت های عملیکه اهداف آن تقویت و حفظ سلامت، افزایش طول عمر افراد، پیشگیری و درمان بیماری های انسانی است. برای انجام این وظایف، M. ساختار و... ... دایره المعارف پزشکی

موجودات بی هوازی- باکتری های هوازی و بی هوازی به طور مقدماتی در یک محیط غذایی مایع با گرادیان غلظت O2 شناسایی می شوند: 1. باکتری های هوازی اجباری (نیاز به اکسیژن) عمدتاً در بالای لوله آزمایش جمع می شوند تا جذب ... ... ویکی پدیا

برای تشخیص برخی از انواع باکتری ها از سایرین بر اساس آنها فعالیت آنزیمیدرخواست دادن محیط های تشخیص افتراقی . مثلا محیط هیس، محیط اندو، محیط لوین، محیط پلوسکیرو، محیط اولکنیتسکی. محیط های اندو، لوین و پلوسکیرو در ظروف پتری برای تمایز باکتری های روده بر اساس توانایی آنها در تخمیر لاکتوز استفاده می شود. این محیط ها حاوی مواد مغذی آگار، لاکتوز و شاخصی است که در محیط اسیدی تغییر رنگ می دهد (نشانگر pH). اگر باکتری هایی را که لاکتوز را تخمیر می کنند، به عنوان مثال E. coli، روی چنین محیطی تلقیح کنید، در نتیجه تخمیر لاکتوز، اسید تشکیل می شود و نشانگر در یک محیط اسیدی رنگ خود را تغییر می دهد. بنابراین، کلنی های E. coli در چنین رسانه هایی با توجه به رنگ نشانگر رنگ می شوند: در محیط Endo و متوسط ​​Ploskirev - قرمز، در محیط Levin - سیاه و آبی. اگر این محیط ها را با باکتری هایی تلقیح کنید که لاکتوز را تخمیر نمی کنند، به عنوان مثال، باسیل های تیفوئید یا باسیل های اسهال خونی، هیچ اسیدی تشکیل نمی شود، واکنش محیط کمی قلیایی باقی می ماند و رنگ نشانگر تغییر نمی کند. بنابراین، کلنی هایی از باکتری ها که لاکتوز را تخمیر نمی کنند، روی این محیط ها بی رنگ خواهند بود. محیط Ploskirev را همچنین می توان به عنوان یک محیط انتخابی برای جداسازی باسیل های اسهال خونی طبقه بندی کرد، زیرا این محیط حاوی نمک های صفراوی است که رشد E. coli را مهار می کند، و یک رنگ سبز درخشان که رشد میکرو فلور کوکال هوایی را مهار می کند. بیسموت سولفیت آگار یک محیط تشخیص افتراقی است که عمدتاً در تشخیص سالمونلوز استفاده می شود. هنگامی که سالمونلا رشد می کند، بیسموت از نمک های آن کاهش می یابد و کلنی های سالمونلا سیاه می شوند. رسانه های تشخیصی افتراقی Hiss (سری "واریگیت") بر اساس یک محیط مایع (پپتون آب) یا آگار نیمه مایع گوشت-پپتون تهیه می شوند. آنها حاوی هر گونه کربوهیدرات یا الکل پلی هیدریک (لاکتوز، گلوکز، مانیتول، ساکارز) و نشانگر تغییر رنگ در محیط اسیدی هستند. یک شناور شیشه ای در یک لوله آزمایش با محیط هیس مایع قرار می گیرد. اگر میکروبی را روی محیط هیس تلقیح کنید که کربوهیدرات معینی را با تشکیل اسید و گاز تخمیر می کند، یعنی به محصولات نهایی، رنگ آن تغییر می کند، در یک محیط نیمه مایع حباب ها و شکستگی ها ظاهر می شود. به ضخامت آگار، در یک محیط مایع یک حباب گاز در شناور ظاهر می شود. هنگامی که یک کربوهیدرات فقط به محصولات میانی (به اسید) تخمیر می شود، فقط رنگ محیط را تغییر می دهد از محیط های ترکیبی نیز استفاده می شود که حاوی نه یک کربوهیدرات، بلکه دو یا سه، به عنوان مثال، محیط اولکنیتسکی - سه قندی است. آگار با اوره یک لوله از محیط Olkenicki جایگزین آگار و محیط هیس با لاکتوز، ساکارز و گلوکز می شود. محیط بر اساس MPA نه چندان متراکم تهیه می شود. حاوی لاکتوز (1%)، ساکارز (1%)، گلوکز (0.1%)، اوره، نمک مور (سولفات آهن)، هیپوسولفیت سدیم و اندیکاتور است. پس از استریل کردن، محیط را به صورت صاف در لوله آزمایش می ریزند تا یک ستون و یک قسمت اریب تشکیل شود. کاشت با رگه زدن در امتداد قسمت اریب و سوراخ کردن به ستون انجام می شود. هنگام تخمیر کربوهیدرات های موجود در بیشتر(لاکتوز، ساکارز یا هر دو قند)، رنگ کل محیط تغییر می کند. هنگامی که فقط گلوکز تخمیر می شود، رنگ ستون تغییر می کند، اما قسمت کوبیده شده بدون تغییر باقی می ماند. تشکیل گاز با وجود حباب در ستون آگار تعیین می شود. کشت هایی که اوره را برای تشکیل آمونیاک تجزیه می کنند، واکنش قلیایی ایجاد می کنند. در این حالت اسید تشکیل شده در طی تخمیر کربوهیدرات ها خنثی می شود و رنگ محیط تغییر نمی کند. تجزیه اوره مشخصه پروتئاس و مقداری اشریشیا کلی است. انتروباکتری های بیماری زا اوره را تجزیه نمی کنند. افزودن نمک مور و هیپوسولفیت نیز امکان بررسی توانایی باکتری ها در تشکیل سولفید هیدروژن را با سیاه شدن در ستون آگار در نتیجه تبدیل سولفات آهن به سولفید سیاه فراهم می کند.

برای یک روش اکسپرس برای تعیین فعالیت آنزیمی میکروارگانیسم‌ها، سیستم‌های ریزآزمون و سیستم کاغذهای شاخص (SIB) استفاده می‌شود. سیستم میکرو تست یک ظرف پلی استایرن شفاف است که از چندین سلول تشکیل شده است. سلول ها حاوی محیط های غذایی خشک شده با کربوهیدرات ها و شاخص های pH هستند. سوسپانسیون کشت باکتریایی با چگالی مشخص به هر سلول تلقیح می شود. محلول فیزیکی در سلول های کنترل ریخته می شود. راه حل. نتیجه پس از 3-4 ساعت انکوباسیون در یک ترموستات با تغییر رنگ نشانگر در نظر گرفته می شود. پلی وینیل الکل و حاوی یک بستر و نشانگر خاص. در یک لوله آزمایش با محلول فیزیولوژیکی یا بافر، یک حلقه کامل از کشت آزمایشی یا یک قطره از سوسپانسیون میکروبی غلیظ را اضافه کنید، سپس آن را با موچین سوخته در دیسک ها قرار دهید. هیچ کشت باکتریایی به لوله های کنترل اضافه نمی شود. نتیجه با تغییر رنگ نشانگر در نظر گرفته می شود. برای تعیین سولفید هیدروژن، دیسک در یک لوله آزمایش بر روی سطح یک MPA با تزریق قرار می گیرد که امکان تعیین همزمان تحرک را فراهم می کند. در تمام لوله های آزمایش، نتیجه اولیه در همان روز و نتیجه نهایی بعد از هجده تا بیست و چهار ساعت در نظر گرفته می شود. فعالیت اکسیداز با مالیدن کشت بر روی کاغذ شاخص پس از 30-60 ثانیه تعیین می شود.

جداسازی کشت خالص باکتری های هوازی و بی هوازی. اصول و روش های بدست آوردن کلنی های ایزوله هوازی را فهرست کنید. روش های جداسازی کشت خالص بی هوازی ها روش واینبرگ را روز به روز شرح دهید.

کشت و جداسازی کشت های خالص باکتری های هوازی

برای پرورش میکروارگانیسم ها شرایط خاصی مورد نیاز است: دما، شرایط هوازی یا بی هوازی.

دما باید برای این گونه بهینه باشد. بیشتر باکتری های بیماری زا در دمای 37 درجه سانتی گراد تکثیر می شوند. با این حال، برای برخی از گونه ها، دمای پایین تر بهینه است، که به دلیل ویژگی های اکولوژی آنها است. بنابراین، برای باسیل طاعون، که زیستگاه طبیعی آن جوندگان در طول خواب زمستانی هستند، دمای مطلوب 28 درجه سانتیگراد و همچنین برای لپتوسپیرا، برای باسیل بوتولیسم - 28 تا 35 درجه سانتیگراد است.

بجز دمای بهینه، برای پرورش میکروارگانیسم ها بسته به نوع محیط هوازی یا بی هوازی لازم است.

برای مطالعه مورفولوژی، خصوصیات فرهنگی، بیوشیمیایی و سایر خواص میکروب ها، باید کشت خالص به دست آید. به طور معمول، کشت میکروب ها به تجمع آنها بر روی یک محیط غذایی به شکل کدورت، رشد نزدیک به پایین (نزدیک دیوار) یا یک لایه روی سطح یک محیط مایع یا کلنی ها روی یک محیط جامد اشاره دارد. یک کلنی جداگانه از یک سلول میکروبی تشکیل می شود. کشت خالص، کشت میکروب های یک گونه است که از یک کلنی به دست می آید. در آزمایشگاه‌ها، گونه‌های مشخصی از میکروب‌ها برای مطالعات مختلف استفاده می‌شوند. سویه، کشت خالصی از میکروب‌ها است که از یک منبع خاص، در یک زمان خاص، با خواص شناخته شده به دست می‌آید. به عنوان یک قاعده، سویه های میکروبی با تعداد خاصی مشخص می شوند. به عنوان مثال، سویه استافیلوکوکوس اورئوس 209P برای تعیین فعالیت پنی سیلین استفاده می شود.

جداسازی کشت های هوازی خالص معمولاً سه روز طول می کشد و طبق طرح زیر انجام می شود:

روز 1 - میکروسکوپ اسمیر از مواد آزمایش، رنگ آمیزی شده (معمولا با گرم) - برای آشنایی اولیه با میکرو فلور، که می تواند در انتخاب یک محیط غذایی برای تلقیح مفید باشد. سپس این ماده بر روی سطح ماده مغذی آگار جامد شده تلقیح می شود تا کلنی های جدا شده به دست آید. الک کردن را می توان با استفاده از روش دریگالسکی در سه ظرف پتری با یک محیط مغذی انجام داد. یک قطره از مواد روی فنجان اول ریخته می شود و با کاردک روی تمام فنجان پخش می شود. سپس با همان کاردک، بر روی فنجان دوم و به همین ترتیب روی فنجان سوم، محصول باقی مانده را روی آن پخش کنید. بیشترین تعداد مستعمرات در صفحه اول و کوچکترین در صفحه سوم رشد خواهند کرد. بسته به تعداد سلول های میکروبی در مواد مورد مطالعه، کلنی های جدا شده روی یکی از ظروف رشد می کنند.

همین نتیجه را می توان با الک کردن روی یک فنجان به دست آورد. برای انجام این کار، فنجان را به چهار بخش تقسیم کنید. ماده مورد مطالعه با یک حلقه باکتریولوژیک به صورت رگه‌هایی روی سکتور اول تلقیح می‌شود، سپس پس از کلسینه کردن و سرد کردن حلقه، تلقیح از بخش اول به بخش دوم و به همین ترتیب به ترتیب به بخش‌های سوم و چهارم توزیع می‌شود. کلنی های جدا شده از سلول های میکروبی فردی پس از انکوباسیون روزانه در یک ترموستات تشکیل می شوند.

روز 2 - مطالعه کلنی هایی که روی ظروف رشد کرده اند، توصیف آنها. کلنی ها می توانند شفاف، نیمه شفاف یا مات باشند اندازه های مختلف، خطوط گرد منظم یا نامنظم، محدب یا شکل تخت، سطح صاف یا ناهموار، صاف یا مواج، لبه های دندانه دار. آنها می توانند بی رنگ باشند یا سفید، طلایی، قرمز، رنگ زرد. بر اساس مطالعه این ویژگی ها، کلنی های رشد یافته به گروه هایی تقسیم می شوند. سپس یک کلنی جدا شده از گروه مورد مطالعه انتخاب می شود و اسمیر برای بررسی میکروسکوپی برای بررسی همگنی میکروب ها در کلنی تهیه می شود. همان کلنی در یک لوله آزمایش با آگار مغذی مایل تلقیح می شود.

روز 3 - بررسی خلوص کشت رشد یافته روی شیب آگار توسط میکروسکوپ اسمیر. اگر باکتری های مورد مطالعه همگن باشند، می توان جداسازی یک کشت خالص را کامل در نظر گرفت.

برای شناسایی باکتری های جدا شده، ویژگی های فرهنگی، یعنی الگوی رشد در محیط های غذایی مایع و جامد مورد مطالعه قرار می گیرد. به عنوان مثال، استرپتوکوک ها رسوبات کف و دیواره را روی آبگوشت قند و کلنی های کوچک و دقیق روی آگار خون تشکیل می دهند. Vibrio cholerae یک لایه روی سطح آب پپتون قلیایی و کلنی های شفاف روی آگار قلیایی تشکیل می دهد. باسیل طاعون روی آگار مغذی کلنی هایی را به شکل "دستمال توری" با مرکز متراکم و لبه های موج دار نازک تشکیل می دهد و در یک محیط غذایی مایع - یک فیلم روی سطح و سپس رشته هایی که از آن به شکل "استالاکتیت ها" خارج می شوند. ".

کشت و جداسازی کشت های خالص باکتری های بی هوازی

برای پرورش بی‌هوازی‌ها، کاهش پتانسیل ردوکس محیط و ایجاد بی‌هوازی با حذف اکسیژن با روش‌های فیزیکی، شیمیایی یا بیولوژیکی ضروری است.

روش های فیزیکی عبارتند از:

1) حذف مکانیکی هوا با استفاده از پمپ از anae-rostat که در آن فنجان هایی با محصولات زراعی قرار می گیرد. در همان زمان، می توانید هوا را با گاز بی تفاوت جایگزین کنید: نیتروژن، هیدروژن، دی اکسید کربن.

2) رشد در محیطی حاوی مواد کاهنده. محیط کیتا تاروزی یک آبگوشت شکر با تکه های جگر یا گوشت است. گلوکز و تکه‌های اندام‌ها توانایی کاهشی دارند. محیط را با یک لایه روغن وازلین روی آن ریخته می شود تا دسترسی اکسیژن هوا را مسدود کند.

3) ساده ترین، اما کمتر راه قابل اعتماد- رشد در اعماق یک ستون بالای قند آگار.

روش های شیمیاییشامل این واقعیت است که ظروف با بی هوازی های تلقیح شده در یک خشک کن مهر و موم شده قرار می گیرند، جایی که مواد شیمیایی، به عنوان مثال، پیروگالول و قلیایی قرار می گیرند، که واکنش بین آنها با جذب اکسیژن رخ می دهد.

روش بیولوژیکیبر اساس کشت همزمان بی هوازی ها و هوازی ها بر روی محیط های غذایی جامد در ظروف پتری است که پس از کاشت به صورت هرمتیک مهر و موم شده اند. ابتدا اکسیژن توسط هوازی های در حال رشد جذب می شود و سپس رشد بی هوازی ها آغاز می شود.

جداسازی یک کشت خالص بی هوازی با تجمع باکتری های بی هوازی با تلقیح روی محیط کیتا تاروزی آغاز می شود. متعاقباً، کلنی های جدا شده به یکی از دو روش به دست می آیند:

1) تلقیح مواد با مخلوط کردن با شکر گرم مذاب در لوله های شیشه ای انجام می شود. پس از سخت شدن آگار، کلنی های جدا شده در اعماق آن رشد می کنند که با برش لوله برداشته شده و به محیط کیت تاروزی (روش واینبرگ) منتقل می شوند.

2) این ماده روی ظروف با یک محیط مغذی تلقیح شده و در یک دستگاه بی هوازی انکوبه می شود. کلنی های جدا شده روی یک ظرف روی محیط کیت تاروزی (روش زایسلر) زیر کشت می شوند.