Kādam nolūkam tiek izmantotas diferenciāldiagnostikas vides? Viņu darba piemēri un principi

Diferenciāldiagnostikas vides -- īpaši maisījumi barības vielas, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu sugas un pētītu to īpašības. Baktērijām augot uz diferenciāldiagnostikas barotnēm, dažādu enzīmu klātbūtnes dēļ mikrobu šūnā notiek ķīmiskie procesi. Daži no tiem spēj sadalīt olbaltumvielas, citi - ogļhidrātus, citi - izraisot oksidācijas un reducēšanas reakcijas utt. Pateicoties enzīmu darbībai, diferenciāldiagnostikas vidē notiek atbilstošas ​​izmaiņas. Diferenciālās diagnostikas vides var iedalīt četrās galvenajās grupās.

• 1. Barotnes, kas satur olbaltumvielas un atklāj mikrobu spēju sadalīt olbaltumvielas (proteolītiskās īpašības): gaļas-peptona želatīna “kolonna”, koagulēts zirga vai liellopa serums, piens, asins agars. Inokulējot baktērijas ar punkciju gaļas-peptona želatīnā, “kolonnā”, olbaltumvielu sadalīšanās gadījumā tiek novērota barotnes sašķidrināšana. Inokulējot uz barotnes ar sarecinātām sūkalām, olbaltumvielu sadalīšanos nosaka barotnes sašķidrināšana un ieplakas veidošanās uz tās virsmas. Piena sadalīšanās mikrobu ietekmē atklājas, attīroties vai izšķīdinot sākotnēji rūgušpienu. Testa kultūras hemolītiskās aktivitātes esamību pārbauda, ​​inokulējot to Petri trauciņā uz īpaša asins agara. Sarkano asins šūnu iznīcināšanas rezultātā ap kolonijām (piemēram, hemolītiskais streptokoks vai stafilokoks) veidojas klīringa zonas.
• 2. Barotnes mikrobu spēju noteikšanai sadalīt ogļhidrātus un spirtus ar augstu atomu saturu (Endo barotne, Levina barotne, Rasela vide, Drigalsky - Conradi barotne, Rapoport - Veintrauba barotne, Shustov barotne). Lai identificētu šīs mikroorganismu īpašības, tiek izmantota arī “raibā” sērija, t.i., mēģeņu sērija, kas satur barotnes, tostarp dažādus ogļhidrātus, daudzvērtīgos spirtus un indikatoru. Kā indikatorus izmanto lakmusa tinktūru vai bromtimola zilo krāsu. Jebkuru ogļhidrātu sadalīšanos ar skābes veidošanos nosaka, mainot indikatora krāsu, gāzes veidošanos nosaka, piepildot gāzi un peldot speciālam stikla pludiņam šķidrā vidē. Vai arī izmantojiet pusšķidru Hiss barotni (skatīt) ar 0,5% agaru ar atbilstošiem cukuriem un Andrade indikatoru. Pēc mikroba inokulēšanas uz šīm barotnēm skābes veidošanos nosaka barotnes apsārtums, bet gāzes veidošanos – pēc tās burbuļu parādīšanās agarā vai agara kolonnas plīsuma un nobīdes uz augšu. Otrās grupas diferenciāldiagnostikas barotnēs ietilpst arī cietes agars, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt cieti, Klārka barotne u.c.
• 3. Barotnes, uz kurām atklājas mikrobu spēja atkrāsot buljonam pievienotās krāsvielas: metilēnzils, tionīns, lakmuss, indigokarmīns, neitrāls sarkans vai citi (Rotbergera barotne, Omeļjanska barotne). Trešajā grupā ietilpst arī barotnes ar nitrātiem, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu spēju samazināt sāļus slāpekļskābe(nitrāti) pārvēršas slāpekļskābes sāļos (nitrītos) un pēc tam amonjakā vai brīvajā slāpeklī.
• 4. Barotnes, kas atklāj mikrobu spēju asimilēt vielas, kuras nav sagremojamas citiem mikrobiem, piemēram, barotne ar nātrija citrātu (Simona citrāta agars), lai atšķirtu Escherichia coli, kurai trūkst spējas asimilēt šo barotni, no citām baktērijām. zarnu grupas, vai barotne ar nātrija oleīnskābi, lai diferencētu difterijas baciļus no viltus difterijas un difteroīdiem (Engering agars).

Diferenciāldiagnostikas barotnes ietver arī barotnes anaerobu diferencēšanai, telūrīta barotnes difterijas baktēriju diferencēšanai, barotnes ar urīnvielu, sārmaina barotne(Dieudonnéagar) Vibrio cholerae audzēšanai utt.

Endo vide. Sastāv no MPA, kam pievienots 1% laktozes un bāzes fuksīna (indikators), kas atkrāsots ar nātrija sulfītu. Endo medium ir nedaudz rozā krāsā. Izmanto zarnu infekciju diagnostikā, lai atšķirtu baktērijas, kas sadala laktozi, veidojot skābus produktus no baktērijām, kurām šādas spējas nav. Fuksīna samazināšanās dēļ laktozes pozitīvo mikrobu (Escherichia coli) kolonijas ir sarkanas. Laktozes negatīvo mikroorganismu kolonijas – salmonellas, šigella u.c. – ir bezkrāsainas.

Diferenciāldiagnostikas vidēs ietilpst īsa un paplašināta raiba sērija. Tas sastāv no barotnes ar ogļhidrātiem (Hiss media), MPB, pienu un gaļas-peptona želatīnu.

Hiss barotni sagatavo uz peptona ūdens bāzes, kam pievienoti ķīmiski tīri mono-, di- vai polisaharīdi (glikoze, laktoze, ciete u.c.).

Lai noteiktu pH izmaiņas skābju veidošanās un ogļhidrātu sadalīšanās rezultātā, barotnei tiek pievienots indikators. Ar dziļāku ogļhidrātu sadalīšanos veidojas gāzveida produkti (CO 2, CH 4 utt.), Kas tiek uztverti, izmantojot pludiņus - mazas mēģenes, kas nolaistas otrādi vidē. Barotnes ar ogļhidrātiem var pagatavot arī kā blīvas - pievienojot 0,5-1% agara-agara. Tad gāzes veidošanos nosaka, veidojot burbuļus (pārrāvumus) barotnes kolonnā.

Uz MPB, kas ir daļa no raibās sērijas, atrodami produkti, kas veidojas aminoskābju un peptonu sadalīšanās laikā (indols, sērūdeņradis). Sērūdeņradi nosaka, pēc kultūras iesēšanas MPB ievietojot svina acetāta šķīdumā samērcētu filtrpapīra sloksni. Sadalot sēru saturošās aminoskābes, izdalās sērūdeņradis, un papīrs kļūst melns, jo veidojas svina sulfīds. Indola noteikšanai var izmantot kompleksu indikatoru. Indols veidojas, sadaloties triptofānam, un to var noteikt, ja šo indikatoru pievieno kultūrai, kas audzēta uz MPB. Indola klātbūtnē MPB kļūst zaļš vai zils.

Praktiskajās bakterioloģiskajās laboratorijās mikroorganismu bioķīmisko īpašību indikatīvai izpētei plaši izmanto mikro- un ekspresmetodes. Šim nolūkam ir daudz testēšanas sistēmu. Visbiežāk izmantotā indikatorpapīru sistēma (SIB). SIB ir filtrpapīra diski, kas piesūcināti ar cukuru vai citu substrātu šķīdumiem kombinācijā ar indikatoriem. Šādus diskus nolaiž mēģenē ar kultūru, kas audzēta šķidrā barotnē. Diska krāsas maiņa ar substrātu tiek izmantota, lai spriestu par fermenta darbību. Mikrotestu sistēmas enterobaktēriju identifikācijas izpētei tiek piedāvātas kā vienreizējās lietošanas plastmasas konteineri ar datu nesējiem, kas satur dažādus substrātus, pievienojot indikatorus. Mikroorganismu tīrkultūras iesēšana šādās testa sistēmās ļauj ātri noteikt baktēriju spēju izmantot citrātus, glikozi, saharozi, atbrīvot amonjaku, indolu, sadalīt urīnvielu, lizīnu, fenilalanīnu utt.

Sausa vide. Uzturvielu agars, kā arī galvenās diferenciāldiagnostikas barotnes pašlaik tiek ražotas sausu preparātu veidā, kas satur visas nepieciešamās sastāvdaļas. Šādiem pulveriem jums tikai jāpievieno ūdens un jāuzvāra, un pēc ieliešanas tie jāsterilizē.

Diferenciāldiagnostikas barotnes ir īpaši barības vielu maisījumi, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu sugas un pētītu to īpašības. Baktērijām augot uz diferenciāldiagnostikas barotnēm, dažādu baktēriju klātbūtnes dēļ mikrobu šūnā notiek ķīmiski procesi. Daži no tiem spēj sadalīties, citi -, citi - izraisot oksidācijas un reducēšanas reakcijas utt. Pateicoties enzīmu darbībai, diferenciāldiagnostikas vidē notiek atbilstošas ​​izmaiņas.

Diferenciālās diagnostikas vides var iedalīt četrās galvenajās grupās.

Rīsi. 1-6. Dažādas formasželatīna sadalīšanās. Rīsi. 7 - 9. Šķidrā barotne ar ogļhidrātu un Andrade indikatoru: att. 7 - nav fermentācijas; rīsi. 8 - fermentācija ar skābes veidošanos; rīsi. 9 - fermentācija ar skābes un gāzes veidošanos. Rīsi. 10 - 12. Pusšķidra barotne ar ogļhidrātu un BP indikatoru (no sausas barotnes): att. 10 - nav fermentācijas; rīsi. 11 - fermentācija ar skābes veidošanos; rīsi. 12 - fermentācija ar skābes un gāzes veidošanos. Rīsi. 13-15. Seitz mākslīgais lakmusa serums: att. 13 - nav fermentācijas; rīsi. 14 - fermentācija ar skābes veidošanos; rīsi. 15 - fermentācija ar veidošanos. Rīsi. 16. un 17. Piens ar metilēnzilo: att. 16 - samazināšanas trūkums; rīsi. 17 - samazināšana. Rīsi. 18. un 19. Simonsa medijs: att. 18 - citrāta asimilācijas trūkums; rīsi. 19 - citrāta asimilācija. Rīsi. 20 - 24. Lakmusa piens: rīsi. 20 - nav fermentācijas; rīsi. 21 - fermentācija ar skābes veidošanos; rīsi. 22 - fermentācija ar sārmu veidošanos; rīsi. 23 - peptonizācija; rīsi. 24 - samazināšana. Rīsi. 25. Satīta produkta sašķidrināšana (caurlaidīgā gaismā). Rīsi. 26. Hemolīze uz asins agara (caurlaidīgā gaismā). Rīsi. 27.Asins barotne ar kālija telurītu.

1. Barotnes, kas satur olbaltumvielas un atklāj mikrobu spēju sadalīt olbaltumvielas (proteolītiskās īpašības): gaļas-peptona “kolonna”, koagulēts zirga vai liellopa serums, piens, asins agars. Inokulējot baktērijas ar punkciju gaļas-peptona želatīnā, “kolonnā”, olbaltumvielu sadalīšanās gadījumā tiek novērota barotnes sašķidrināšana. Inokulējot uz barotnes ar sarecinātām sūkalām, olbaltumvielu sadalīšanos nosaka barotnes sašķidrināšana un ieplakas veidošanās uz tās virsmas. Piena sadalīšanās mikrobu ietekmē atklājas, attīroties vai izšķīdinot sākotnēji rūgušpienu. Testa kultūras hemolītiskās aktivitātes esamību pārbauda, ​​uzsējot to uz speciāla asins agara. Iznīcināšanas rezultātā ap kolonijām veidojas (piemēram, hemolītiskās vai klīringa zonas).

2. Barotnes mikrobu spēju noteikšanai sadalīt ogļhidrātus un augsti atomus (Endo vide, Levina barotne, Rasela barotne, Drigalsky - Conradi barotne, Rapoport - Weintraub barotne, Shustov barotne). Lai identificētu šīs mikroorganismu īpašības, tiek izmantota arī “raibā” sērija, tas ir, mēģeņu sērija, kas satur dažādus ogļhidrātus, daudzvērtīgos spirtus un indikatoru. Kā indikatorus izmanto lakmusa tinktūru vai bromtimola zilo krāsu. Jebkura ogļhidrāta sadalīšanās, veidojoties skābei, tiek noteikta pēc indikatora krāsas maiņas, gāzes veidošanos nosaka, piepildot ar gāzi un speciāla stikla pludiņa peldēšanu šķidrā vidē. Vai arī izmantojiet pusšķidru Hiss barotni (skatīt) ar 0,5% agaru ar atbilstošiem cukuriem un Andrade indikatoru. Pēc mikroba inokulācijas uz šīm barotnēm skābes veidošanos nosaka barotnes apsārtums, bet gāzes veidošanos – pēc tās burbuļu parādīšanās agarā vai agara kolonnas plīsuma un nobīdes uz augšu. Otrās grupas diferenciāldiagnostikas barotnēs ietilpst arī cietes agars, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt cieti, Klārka barotne u.c.

3. Barotnes, uz kurām atklājas mikrobu spēja atkrāsot buljonam pievienotās krāsvielas: metilēnzils, tionīns, lakmuss, neitrāls sarkans vai citi (Rothberger’s medium, Omelyansky’s medium). Trešajā grupā ietilpst arī barotnes ar nitrātiem, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu spēju redukt slāpekļskābes sāļus (nitrātus) slāpekļskābes sāļos (nitrītos) un pēc tam amonjakā vai brīvajā slāpeklī.

4. Barotnes, kas atklāj mikrobu spēju asimilēt vielas, kuras nav sagremojamas citiem mikrobiem, piemēram, barotne ar nātrija citrātu (Simona citrāta agars), lai atšķirtu Escherichia coli, kurai trūkst spējas asimilēt šo barotni, no citām baktērijām. zarnu grupas, vai barotne ar nātrija oleīnskābi, lai diferencētu difterijas baciļus no viltus difterijas un difteroīdiem (Engeringa agars).

Diferenciāldiagnostikas barotnes ietver arī barotnes anaerobu diferencēšanai, telūrīta barotnes difterijas baktēriju diferencēšanai, barotnes ar urīnvielu, sārmainas barotnes (Dieudonne agars) Vibrio cholerae kultivēšanai utt. Skatiet arī mikrobu identifikāciju.

DIFERENCIĀLDIAGNOSTIKAS VIDES

diferenciāldiagnostikas mediji, īpašas uzturvielu barotnes, ko izmanto, lai identificētu mikroorganismus, kuriem ir selektīva bioķīmiskā aktivitāte pret noteiktām vielām. Mikrobi savas attīstības laikā ar enzīmu palīdzību noārda noteiktas vidē esošās vielas, ko nosaka vides izmaiņas.

Vairāki patogēni mikroorganismi sadala ogļhidrātus un daudzvērtīgos spirtus, veidojot skābes un gāzes (oglekļa dioksīds, ūdeņradis, metāns), kas liecina par to piederību noteiktai baktēriju grupai vai tipam. Lai noteiktu šīs īpašības, sagatavojiet šķidrumu vai pusšķidrumu D.-D. Ar. ar glikozi, laktozi, saharozi, mannozi un citiem ogļhidrātiem, daudzvērtīgajiem spirtiem (raibās sērijas), ar indikatoriem (Andrade, Gissa), barotnes ar pienu. Mikrobu fermentatīvās spējas nosaka gāzes parādīšanās vai indikatora krāsas maiņa. Skābes veidošanās no glikozes intensitāti nosaka uz Klārka barotnes, acetilmetilkarbonāla veidošanos, izmantojot Voges-Proskauer reakciju, un mikrobu amilolītisko spēju uz cietes agara. Mikrobu proteolītiskās īpašības nosaka barotnēs, kas nesatur glikozi un glicerīnu, gaļas-peptona želatīnu, koagulētu zirga serumu un piena agaru. Gaļas-peptona želatīnu inokulē, iedurot mēģenes apakšā, inkubē plkst. t 2022°C, un pēc tam nosaka želatīna sašķidrināšanas pakāpi. Mikrobu hemolītisko spēju nosaka, uzklājot uz asins agara vai asins buljona. Lai noteiktu mikrobu samazinošo aktivitāti, izmantojiet D.-D. Ar. ar krāsvielām (lakmusu, indidokarmīnu, tionīnu utt.). Mikrobiem augot, notiek pilnīga vai daļēja krāsas maiņa vai krāsas krāsas maiņa. Izmanto arī barotnes ar nitrātiem, kurās noteiktu mikrobu enzīmu ietekmē nitrāti tiek reducēti par nitrītiem un pēc tam par amonjaku vai brīvo slāpekli.

Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca. - M.: "Padomju enciklopēdija". Galvenais redaktors V.P. Šiškovs. 1981 .

Skatiet, kas ir "DIFERENCIĀLĀS DIAGNOSTIKAS VIDES" citās vārdnīcās:

Diferenciāldiagnostikas vides- īpaši barības vielu maisījumi (sk. Uzturvielu barotnes), uz kuriem audzē mikroorganismus, lai noteiktu to sugu. Uz D.d.s. ietver proteīnu barotnes, ko izmanto hemolītisko un...

Barības barotnes, substrāti, ko izmanto audzēšanai mākslīgie apstākļi mikroorganismi un audu kultūras. Mikrobioloģiskajā praksē S. p plaši izmanto infekcijas slimību laboratoriskai diagnostikai, lai... ... Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca

Bakterioloģiskā barotne- šķidri, pusšķidri vai cieti substrāti, ko izmanto mikroorganismu audzēšanai laboratorijas vai rūpnieciskos apstākļos. Izmanto, lai izolētu tīras baktērijas, sēnītes un vienšūņus no biogēniem vai abiogēniem objektiem,... ... Mikrobioloģijas vārdnīca

Kultūras mediji- šķidras vai cietas barotnes, ko izmanto baktēriju, rauga, mikroskopisko sēņu, aļģu, vienšūņu, vīrusu un augu vai dzīvnieku šūnu kultūru audzēšanai laboratorijas vai rūpnieciskos apstākļos. Sintētiskais P. s...... Lielā padomju enciklopēdija

Džisa trešdiena- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, amerikāņu bakteriologs; sinonīms: raibā sērija, krāsu sērija) šķidras vai pusšķidras diferenciāldiagnostikas barotnes, kas paredzētas baktēriju identificēšanai un diferencēšanai pēc to spējas sadalīt dažādas ... ... Liela medicīniskā vārdnīca

Makonkijs trešdienās- (A. Ma Conkey, 1861, 1931, angļu bakteriologs) selektīvā diferenciāldiagnostikas barotne ģimenes baktēriju izolēšanai. Enterobacteriaceae, piem. coli, kas satur nātrija tauroholskābi un laktozi... Liela medicīniskā vārdnīca

Uzturvielu barotnes- substrāti, kas sastāv no komponentiem, kas nodrošina nepieciešamos nosacījumus mikroorganismu audzēšanai vai to vielmaiņas produktu uzkrāšanai. Uzturvielu barotnes atšķiras pēc mērķa, konsistences un sastāva. Atbilstoši to mērķim...... Medicīnas enciklopēdija

Mikrobioloģiskā diagnostika- balstās uz patogēna identificēšanu vai pacienta imūnās atbildes reakciju uz to. Sākotnējais posms M.d. ir materiāla atlase un paraugu transportēšana uz laboratoriju. Pētījuma materiāla veidu nosaka īpašības...... Medicīnas enciklopēdija

Medicīna- I Medicīna Medicīna ir zinātnisku zināšanu sistēma un praktiskās aktivitātes, kuras mērķi ir veselības stiprināšana un saglabāšana, cilvēku mūža pagarināšana, cilvēku slimību profilakse un ārstēšana. Lai veiktu šos uzdevumus, M. pēta struktūru un... ... Medicīnas enciklopēdija

Anaerobie organismi- Aerobās un anaerobās baktērijas tiek sākotnēji identificētas šķidrā barotnē pēc O2 koncentrācijas gradienta: 1. Obligātās aerobās (skābekli nepieciešamas) baktērijas galvenokārt pulcējas mēģenes augšpusē, lai absorbētu ... ... Wikipedia

Lai atšķirtu vienu baktēriju sugu no citām, pamatojoties uz to fermentatīvā aktivitāte pieteikties diferenciāldiagnostikas vide . Piemēram, Hiss vide, Endo vide, Levin vide, Ploskirev vide, Olkenitsky vide. Endo, Levin un Ploskirev barotnes Petri trauciņos izmanto, lai diferencētu zarnu baktērijas, pamatojoties uz to spēju fermentēt laktozi. Šīs barotnes satur barības vielu agaru, laktozi un indikatoru, kas skābā vidē maina krāsu (pH indikators). Ja uz šādas barotnes uzsēj baktērijas, kas fermentē laktozi, piemēram, E. coli, tad laktozes fermentācijas rezultātā veidojas skābe, un skābā vidē indikators mainīs krāsu. Tāpēc E. coli kolonijas uz šādām barotnēm tiks iekrāsotas atbilstoši indikatora krāsai: Endo barotnē un Ploskirev barotnē - sarkana, Levina barotnē - melna un zila. Ja šīs barotnes uzpotēsiet ar baktērijām, kas neraudzē laktozi, piemēram, vēdertīfa baciļus vai dizentērijas baciļus, tad skābe neveidosies, barotnes reakcija paliks nedaudz sārmaina un indikatora krāsa nemainīsies. Tāpēc baktēriju kolonijas, kas neraudzē laktozi, uz šīm barotnēm būs bezkrāsainas. Ploskireva barotni var klasificēt arī kā izvēles barotni dizentērijas baciļu izolēšanai, jo šī barotne satur žults sāļus, kas kavē E. coli augšanu, un izcili zaļo krāsvielu, kas kavē gaisa koku mikrofloras augšanu. Bismuta sulfīta agars ir diferenciāldiagnostikas vide, ko galvenokārt izmanto salmonelozes diagnostikā. Kad salmonellas aug, bismuts tiek samazināts no tā sāļiem, un salmonellu kolonijas kļūst melnas. Hiss diferenciāldiagnostikas barotnes (“raibās” sērijas) sagatavo uz šķidras barotnes (peptona ūdens) vai pusšķidra gaļas-peptona agara bāzes. Tie satur jebkuru ogļhidrātu vai daudzvērtīgu spirtu (laktozi, glikozi, mannītu, saharozi) un indikatoru, kas skābā vidē maina krāsu. Stikla pludiņu ievieto mēģenē ar šķidru Hiss barotni. Ja uz Hiss barotnes uzsēj mikrobu, kas fermentē doto ogļhidrātu, veidojot skābi un gāzi, tas ir, līdz galaproduktiem, tad barotne mainīs savu krāsu, pusšķidrā vidē parādīsies burbuļi un plīsumi. agara biezumu, šķidrā vidē pludiņā parādīsies gāzes burbulis. Raudzējot ogļhidrātu tikai līdz starpproduktiem (līdz skābei), tiek izmantota arī kombinētā barotne, kas satur nevis vienu ogļhidrātu, bet divus vai trīs, piemēram, Olkenitsky barotni - trīs cukuru agaru. ar urīnvielu. Viena Olkenicki barotnes caurule aizstāj slīpās agara un Hiss barotnes ar laktozi, saharozi un glikozi. Barotne ir sagatavota, pamatojoties uz ne pārāk blīvu MPA. Satur laktozi (1%), saharozi (1%), glikozi (0,1%), urīnvielu, Mora sāli (dzelzs sulfātu), nātrija hiposulfītu un indikatoru. Pēc sterilizācijas barotni iztaisnotā veidā ielej mēģenē, lai izveidotu kolonnu un slīpu daļu. Sēšana tiek veikta, izvelkot gar slīpo daļu un iedurot kolonnā. Raudzējot ogļhidrātus, ko satur vairāk(laktoze, saharoze vai abi cukuri), mainās visas barotnes krāsa; Raudzējot tikai glikozi, kolonnas krāsa mainās, bet nopļautā daļa paliek nemainīga. Gāzes veidošanos nosaka burbuļu klātbūtne agara kolonnā. Kultūras, kas sadala urīnvielu, veidojot amonjaku, rada sārmainu reakciju. Šajā gadījumā skābe, kas veidojas ogļhidrātu fermentācijas laikā, tiek neitralizēta, un barotnes krāsa nemainās. Urīnvielas sadalīšanās ir raksturīga Proteas un dažām Escherichia coli. Patogēnās enterobaktērijas nesadala urīnvielu. Mora sāls un hiposulfīta pievienošana arī ļauj izpētīt baktēriju spēju veidot sērūdeņradi, nomelnojot agara kolonnā dzelzs sulfāta pārvēršanas rezultātā par melno sulfīdu.

Ekspress metodei mikroorganismu fermentatīvās aktivitātes noteikšanai tiek izmantotas mikrotestu sistēmas un indikatorpapīru sistēma (SIB). Mikrotesta sistēma ir caurspīdīgs polistirola konteiners, kas sastāv no vairākām šūnām. Šūnas satur kaltētu barotni ar ogļhidrātiem un pH indikatoriem. Katrā šūnā tiek inokulēta noteikta blīvuma baktēriju kultūras suspensija. Fizikālo šķīdumu ielej kontroles šūnās. risinājums. Rezultāts tiek ņemts vērā pēc 3-4 stundu ilgas inkubācijas termostatā, mainot indikatora krāsu, lai identificētu enterobaktēriju saimi, ir diski vai hromatogrāfiskā papīra sloksnes, kas pārklātas ar aizsargplēvi. polivinilspirts un satur īpašu substrātu un indikatoru. Mēģenē ar fizioloģisko vai buferšķīdumu pievienojiet pilnu testa kultūras cilpu vai pilienu biezas mikrobu suspensijas, pēc tam ievietojiet to diskos ar sadedzinātu pinceti. Kontroles mēģenēm netiek pievienota baktēriju kultūra. Rezultāts tiek ņemts vērā, mainot indikatora krāsu. Lai noteiktu sērūdeņradi, disku ievieto mēģenē uz MPA virsmas, kas iesēta ar injekciju, kas ļauj vienlaikus noteikt mobilitāti. Visās mēģenēs provizoriskais rezultāts tiek ņemts vērā tajā pašā dienā un galīgais rezultāts pēc astoņpadsmit līdz divdesmit četrām stundām. Oksidāzes aktivitāti nosaka, berzējot kultūru uz indikatorpapīra pēc 30-60 sekundēm.

Aerobo un anaerobo baktēriju tīrkultūru izolēšana. Uzskaitiet principus un metodes izolētu aerobu koloniju iegūšanai. Anaerobu tīrkultūru izdalīšanas metodes. Aprakstiet Veinberga metodi katru dienu.

Aerobo baktēriju tīrkultūru audzēšana un izolēšana

Lai kultivētu mikroorganismus, ir nepieciešami noteikti apstākļi: temperatūra, aerobie vai anaerobie apstākļi.

Temperatūrai jābūt šai sugai optimālai. Lielākā daļa patogēno baktēriju vairojas 37°C temperatūrā. Tomēr dažām sugām zemāka temperatūra ir optimāla, kas ir saistīts ar to ekoloģijas īpatnībām. Tā mēra bacilim, kura dabiskā dzīvotne ir grauzēji ziemas guļas laikā, optimālā temperatūra ir 28°C, kā arī Leptospira, botulisma bacilim - 28°C-35°C.

Izņemot optimāla temperatūra, mikroorganismu audzēšanai, atkarībā no veida, nepieciešama aerobā vai anaerobā vide.

Lai pētītu mikrobu morfoloģiju, kultūras, bioķīmiskās un citas īpašības, nepieciešams iegūt tīrkultūru. Parasti mikrobu kultūra attiecas uz to uzkrāšanos uz barības vielu barotnes duļķainības, dibena (sienas) augšanas vai plēves veidā uz šķidras barotnes virsmas vai kolonijām uz cietas barotnes. No vienas mikrobu šūnas veidojas atsevišķa kolonija. Tīrkultūra ir vienas sugas mikrobu kultūra, kas iegūta no vienas kolonijas. Laboratorijās dažādiem pētījumiem izmanto noteiktus zināmus mikrobu celmus. Celms ir mikrobu tīrkultūra, kas iegūta no konkrēta avota noteiktā laikā ar zināmām īpašībām. Parasti mikrobu celmus apzīmē ar noteiktu numuru. Piemēram, penicilīna aktivitātes noteikšanai izmanto Staphylococcus aureus 209P celmu.

Tīro aerobo kultūru izolēšana parasti ilgst trīs dienas un tiek veikta saskaņā ar šādu shēmu:

1. diena - testa materiāla uztriepes mikroskopija, iekrāsota (parasti ar gramiem) - iepriekšējai mikrofloras iepazīšanai, kas var būt noderīga, izvēloties barotni inokulācijai. Pēc tam materiāls tiek inokulēts uz cietināta barības vielu agara virsmas, lai iegūtu izolētas kolonijas. Sijāšanu var veikt, izmantojot Drigalska metodi, trīs Petri trauciņos ar uzturvielu barotni. Materiāla pilienu uzklāj uz pirmās krūzes un ar lāpstiņu izklāj pa visu krūzi. Pēc tam ar to pašu lāpstiņu sadaliet atlikušo ražu uz tās otrā krūze un tādā pašā veidā uz trešā. Vislielākais koloniju skaits izaugs pirmajā plāksnē, mazākais - trešajā. Atkarībā no tā, cik mikrobu šūnu bija pētāmajā materiālā, uz viena no traukiem izaugs izolētas kolonijas.

To pašu rezultātu var sasniegt, sijājot uz vienas tases. Lai to izdarītu, sadaliet kausu četros sektoros. Pētāmais materiāls tiek inokulēts ar bakterioloģisko cilpu strīpās pirmajā sektorā, pēc tam pēc cilpas kalcinēšanas un atdzesēšanas inokulācija tiek sadalīta no pirmā sektora uz otro un tādā pašā veidā secīgi uz trešo un ceturto sektoru. Izolētas kolonijas veidojas no atsevišķām mikrobu šūnām pēc ikdienas inkubācijas termostatā.

2. diena - uz traukiem audzētu koloniju izpēte, to aprakstīšana. Kolonijas var būt caurspīdīgas, caurspīdīgas vai necaurspīdīgas dažādi izmēri, noapaļotas regulāras vai neregulāras kontūras, izliektas vai plakana forma, gluda vai raupja virsma, gludas vai viļņotas, robainas malas. Tie var būt bezkrāsaini vai balti, zeltaini, sarkani, dzeltens. Pamatojoties uz šo pazīmju izpēti, audzētās kolonijas tiek sadalītas grupās. Pēc tam no pētāmās grupas izvēlas izolētu koloniju, un mikroskopiskai izmeklēšanai sagatavo uztriepi, lai pārbaudītu mikrobu viendabīgumu kolonijā. To pašu koloniju inokulē mēģenē ar slīpu barības vielu agaru.

3. diena - uz agara slīpajām kultūrām audzētās kultūras tīrības pārbaude ar uztriepes mikroskopu. Ja pētāmās baktērijas ir viendabīgas, tīrkultūras izolāciju var uzskatīt par pabeigtu.

Lai identificētu izolētas baktērijas, tiek pētītas kultūras īpašības, tas ir, augšanas modelis šķidrā un cietā barotnē. Piemēram, streptokoki veido dibena un sienu nogulsnes uz cukura buljona, bet nelielas, precīzas kolonijas uz asins agara; Vibrio cholerae veido plēvi uz sārmainā peptona ūdens virsmas un caurspīdīgas kolonijas uz sārmainā agara; Mēra bacilis uz uzturvielu agara veido kolonijas “mežģīņu kabatlakatiņu” veidā ar blīvu centru un plānām viļņainām malām, bet šķidrā barotnē - plēvi uz virsmas un pēc tam pavedienus, kas stiepjas no tās “stalaktītu” veidā. ”.

Anaerobo baktēriju tīrkultūru audzēšana un izolēšana

Lai kultivētu anaerobus, nepieciešams samazināt barotnes redokspotenciālu un radīt anaerobiozi, noņemot skābekli ar fizikālām, ķīmiskām vai bioloģiskām metodēm.

Fiziskās metodes ietver:

1) mehāniska gaisa noņemšana, izmantojot sūkni no anae-rostat, kurā ievieto kausi ar kultūrām. Tajā pašā laikā jūs varat aizstāt gaisu ar vienaldzīgu gāzi: slāpekli, ūdeņradi, oglekļa dioksīdu.

2) augot vidē, kurā ir reducējošas vielas. Kitta-Tarozzi barotne ir cukura buljons ar aknu vai gaļas gabaliņiem. Glikozei un orgānu gabaliņiem ir reducējoša spēja. Barotni uzlej virsū ar vazelīna eļļas slāni, lai bloķētu gaisa skābekļa piekļuvi.

3) Vienkāršākais, bet mazāk uzticams veids- aug augsta cukura agara kolonnas dziļumos.

Ķīmiskās metodes sastāv no tā, ka traukus ar inokulētiem anaerobiem ievieto hermētiski noslēgtā eksikatorā, kur ievieto ķimikālijas, piemēram, pirogalolu un sārmu, kuru reakcija notiek ar skābekļa uzsūkšanos.

Bioloģiskā metode pamatā ir vienlaicīga anaerobu un aerobu audzēšana uz cietām barotnēm Petri trauciņos, kas pēc sēšanas hermētiski noslēgti. Vispirms augošie aerobi uzņem skābekli, un tad sākas anaerobu augšana.

Tīras anaerobu kultūras izolēšana sākas ar anaerobo baktēriju uzkrāšanos, uzklājot uz Kitta-Tarozzi barotnes. Pēc tam izolētas kolonijas iegūst vienā no diviem veidiem:

1) materiāla inokulāciju veic, sajaucot ar izkausētu siltu cukura agaru stikla mēģenēs. Pēc agara sacietēšanas tā dziļumā izaug izolētas kolonijas, kuras izņem, pārgriežot cauruli, un pārnes uz Kitt-Tarozzi barotni (Veinberga metode);

2) materiāls tiek inokulēts uz traukiem ar uzturvielu barotni un inkubēts anaerostatā. Izolētas kolonijas, kas audzētas uz šķīvja, subkultūra uz Kitt-Tarozzi barotnes (Zeislera metode).