Kāds ir diferenciāldiagnostikas vides izmantošanas mērķis? Piemēri un kā tie darbojas

Diferenciāldiagnostikas līdzekļi ir īpaši barības vielu maisījumi, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu sugas un izpētītu to īpašības. Kad baktērijas aug diferenciāldiagnostikas vidē, ķīmiski procesi notiek dažādu enzīmu klātbūtnes dēļ mikrobu šūnā. Daži no tiem spēj sadalīt olbaltumvielas, citi ir ogļhidrāti, un vēl citi spēj izraisīt oksidācijas un reducēšanās reakcijas utt. Fermentu darbības dēļ diferenciāldiagnostikas vidē notiek attiecīgas izmaiņas. Diferenciāldiagnostikas vides var iedalīt četrās galvenajās grupās.

• 1. Barotne, kas satur olbaltumvielas un atklāj mikrobu spēju sadalīt olbaltumvielas (proteolītiskās īpašības): gaļas-peptona želatīna "kolonna", velmēta zirga vai liellopa serums, piens, asins agars. Ja baktērijas tiek inokulētas ar punkciju gaļas-peptona želatīnā, olbaltumvielu sadalīšanās gadījumā tiek novērota barotnes sašķidrināšana. Inokulējot uz barotnes ar sarecējušu serumu, olbaltumvielu noārdīšanos nosaka barotnes atšķaidīšana un depresijas veidošanās uz tās virsmas. Piena sadalīšanos ar mikrobu atklāj, skaidrojot vai izšķīdinot sākotnēji sarecēto pienu. Testa kultūras hemolītiskās aktivitātes klātbūtni pārbauda, \u200b\u200binokulējot to Petri trauciņā uz īpaša asins agara. Eritrocītu iznīcināšanas rezultātā ap kolonijām (piemēram, hemolītiskais streptokoks vai stafilokoks) tiek veidotas attīrīšanas zonas.
• 2. Mediji, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt ogļhidrātus un ļoti atomu saturošus spirtus (Endo trešdiena, Levina vide, Rasela vide, Drygalsky - Konradi vide, Rapoport - Weintraub vide, Šustova vide). Lai identificētu šīs mikroorganismu īpašības, tiek izmantota arī "raiba" sērija, ti, virkne testu, kas satur barības vielas, ieskaitot dažādus ogļhidrātus, daudzvērtīgus spirtus un indikatoru. Par indikatoriem izmanto lakmusa tinktūru vai bromtimola zilu. Jebkura ogļhidrāta sadalīšanos ar skābes veidošanos nosaka ar indikatora krāsas maiņu, gāzes veidošanos - piepildot ar gāzi un parādoties īpašam stikla pludiņam šķidrā vidē. Vai arī izmantojiet pusšķidru Gissa barotni (sk.) Ar 0,5% agaru ar atbilstošajiem cukuriem un Andrade indikatoru. Pēc mikrobu sēšanas uz šīm barotnēm skābes veidošanos nosaka barotnes apsārtums, bet gāzes veidošanos - tās burbuļu parādīšanās agarā vai agara kolonnas plīsums un augšupvērstā nobīde. Otrās grupas diferenciāldiagnostikas vidē ietilpst arī cietes agars, kas kalpo, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt cieti, Klarka barotni utt.
• 3. Barotne, kurā atklājas mikrobu spēja mainīt krāsu buljonam pievienotajām krāsvielām: metilēnzils, tionīns, lakmuss, indigokarmīns, neitrāls sarkans vai citi (Rotbergera barotne, Omelyansky barotne). Trešajā grupā ietilpst arī barotnes ar nitrātiem, kas kalpo, lai noteiktu mikrobu spēju reducēt slāpekļskābes sāļus (nitrātus) līdz slāpekļskābes sāļiem (nitrītiem) un pēc tam līdz amonjaka vai brīvā slāpekļa daudzumam.
• 4. Barotne, kas atklāj mikrobu spēju asimilēt vielas, kuras citi mikrobi nepieņem, piemēram, barotne ar nātrija citrātu (Simona citrāta agars), lai atšķirtu E. coli, kurai nav spējas asimilēt šo barotni, no citām zarnu grupas baktērijām vai barotne ar nātrija oleīnskābi difterijas bacillus diferencēšanai no viltus difterijas un difteroīdiem (agarEngering).

Diferenciāldiagnostikas vidē ietilpst arī barotnes anaerobu diferencēšanai, telurīta barotnes difterijas baktēriju diferencēšanai, barotnes ar urīnvielu, sārmainās barotnes (Dieudonneagar) Vibrio cholerae kultivēšanai utt.

Trešdiena Endo. Sastāv no MPA, pievienojot 1% laktozes un bāzes fuksīna, kas mainījis krāsu ar nātrija sulfītu (indikators). Endo barotnei ir nedaudz rozā krāsa. To lieto zarnu infekciju diagnostikā, lai diferencētu baktērijas, kas noārda laktozi, veidojot skābus produktus no baktērijām, kurām nav šīs spējas. Laktozes pozitīvo mikrobu (Escherichia coli) kolonijas ir sarkanas fuksīna samazināšanās dēļ. Laktozes negatīvo mikroorganismu kolonijas - Salmonella, Shigella un citas - ir bezkrāsainas.

Diferenciāldiagnostikas vidēs ietilpst īsa un izvērsta raiba rinda. Tas sastāv no barotnēm ar ogļhidrātiem (Giss media), MPB, pienu, mezopatāmijas želatīnu.

Giss barotni sagatavo, pamatojoties uz peptona ūdeni, kuram pievieno ķīmiski tīrus mono-, di- vai polisaharīdus (glikozi, laktozi, cieti utt.).

Barotnei pievieno indikatoru, lai noteiktu skābes veidošanās un ogļhidrātu sadalīšanās rezultātā notiekošās pH izmaiņas. Dziļāk sadaloties ogļhidrātiem, rodas gāzveida produkti (CO 2, CH 4 utt.), Kas tiek notverti, izmantojot pludiņus - mazas mēģenes, kas nolaistas vidēji otrādi. Barotnes ar ogļhidrātiem var pagatavot arī blīvas - pievienojot 0,5-1% agara-agara. Tad gāzēšanu uztver, veidojot burbuļus (pārrāvumus) barotnes kolonnā.

Uz BCH, kas ir raiba rinda, viņi atrod produktus, kas veidojas aminoskābju un peptonu (indola, sērūdeņraža) sadalīšanās laikā. Sērūdeņradi nosaka, ievietojot svina acetāta šķīdumā samērcētu filtrpapīra sloksni BCH pēc kultūras inokulēšanas. Kad sēru saturošās aminoskābes sadalās, izdalās sērūdeņradis, svina sulfīda veidošanās dēļ papīrs kļūst melns. Indola noteikšanai var izmantot sarežģītu rādītāju. Indolu veido triptofāna sadalīšanās ceļā, un to var noteikt, pievienojot šo rādītāju kultūrai, kas audzēta BCH. Indola klātbūtnē MPB kļūst zaļa vai zila.

Praktiskajās bakterioloģiskajās laboratorijās mikroorganismu bioķīmisko īpašību aptuvenai izpētei tiek plaši izmantotas mikro un ekspress metodes. Šim nolūkam ir daudz testa sistēmu. Visbiežāk izmantotā indikatoru vērtspapīru sistēma (NIB). NIB ir filtrpapīra diski, kas piesūcināti ar cukura vai citu substrātu šķīdumiem kopā ar indikatoriem. Šādi diski tiek iemērkti mēģenē ar kultūru, kas audzēta šķidrā barības vielu vidē. Diska krāsas maiņa ar substrātu tiek izmantota, lai spriestu par fermenta darbu. Mikrotesta sistēmas Enterobacteriaceae identifikācijas izpētei ir vienreizlietojami plastmasas trauki ar barotnēm, kas satur dažādus substrātus, pievienojot indikatorus. Tīras mikroorganismu kultūras sēšana šādās testa sistēmās ļauj ātri noteikt baktēriju spēju izmantot citrātus, glikozi, saharozi, atbrīvot amonjaku, indolu, sadalīt urīnvielu, lizīnu, fenilalanīnu utt.

Sausa vide. Uzturvielu agaru, kā arī galvenos diferenciāldiagnostikas līdzekļus pašlaik ražo sausu preparātu veidā, kas satur visus nepieciešamos komponentus. Šādiem pulveriem jums jāpievieno tikai ūdens un jāvāra, un pēc tam pēc ielešanas sterilizējiet.

Diferenciāldiagnostikas līdzekļi ir īpaši barības vielu maisījumi, ko izmanto, lai noteiktu mikrobu sugas un izpētītu to īpašības. Baktēriju augšanas laikā diferenciāldiagnostikas vidē notiek ķīmiski procesi dažādu mikrobu šūnu klātbūtnes dēļ. Daži no tiem spēj noārdīties, citi - un citi - izraisīt oksidēšanās un reducēšanās reakcijas utt. Fermentu darbības dēļ diferenciāldiagnostikas vidē notiek attiecīgas izmaiņas.

Diferenciāldiagnostikas vides var iedalīt četrās galvenajās grupās.

Attēls: 1-6. Dažādas želatīna sadalīšanās formas. Attēls: 7 - 9. Šķidra barotne ar ogļhidrātiem un Andrade indikatoru: att. 7 - bez fermentācijas; att. 8 - fermentācija ar skābes veidošanos; att. 9 - fermentācija, veidojoties skābei un gāzei. Attēls: 10 - 12. Pusšķidra barotne ar ogļhidrātu un BP indikatoru (no sausas barotnes): att. 10 - bez fermentācijas; att. 11 - fermentācija ar skābes veidošanos; att. 12 - fermentācija, veidojoties skābei un gāzei. Attēls: 13-15. Mākslīgais lakmusa serums pēc Seitz: rīsi. 13 - bez fermentācijas; att. 14 - fermentācija ar skābes veidošanos; att. 15 - fermentācija, lai izveidotos. Attēls: 16. un 17. Piens ar metilēnzilo: Zīm. 16 - nav samazinājuma; att. 17 -samazināšana. Attēls: 18. un 19. Trešdiena Simons: att. 18 - citrātu asimilācijas trūkums; att. 19 - citrātu asimilācija. Attēls: 20 - 24. Lakmusa piens: rīsi. 20 - bez fermentācijas; att. 21 - fermentācija ar skābes veidošanos; att. 22 - fermentācija, veidojot sārmu; att. 23 - peptonizācija; att. 24 - samazinājums. Attēls: 25. Saritinātā šķidruma (caurlaidīgā gaismā) sašķidrināšana. Attēls: 26. Hemolīze uz asins agara (caurlaidīgā gaismā). Attēls: 27. Asins vide ar kālija telurītu.

1. Barotne, kas satur olbaltumvielas un atklāj mikrobu spēju sadalīt olbaltumvielas (proteolītiskās īpašības): gaļas-peptona "kolonna", velmēta zirga vai liellopa serums, piens, asins agars. Ja baktērijas inokulē ar punkciju gaļas-peptona želatīnā, olbaltumvielu sadalīšanās gadījumā tiek novērota "kolonna", tiek novērota barotnes atšķaidīšana. Inokulējot uz barotnes ar sarecējušu serumu, olbaltumvielu noārdīšanos nosaka barotnes atšķaidīšana un depresijas veidošanās uz tās virsmas. Piena sadalīšanos ar mikrobu atklāj, skaidrojot vai izšķīdinot sākotnēji sarecēto pienu. Testa kultūras hemolītiskās aktivitātes klātbūtni pārbauda, \u200b\u200bsējot to uz īpaša asins agara. Iznīcināšanas rezultātā ap kolonijām (piemēram, hemolītiskas vai) tiek veidotas attīrīšanas zonas.

2. Mediji, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt ogļhidrātus un augsti atomu saturošus (Endo trešdiena, Levina trešdiena, Rasela trešdiena, Drygalsky - Konradi vide, Rapoport - Weintraub vide, Shustovoy trešdiena). Lai identificētu šīs mikroorganismu īpašības, tiek izmantota arī "raiba" sērija, tas ir, virkne testa cauruļu, kas satur dažādus ogļhidrātus, daudzvērtīgos spirtus un indikatoru. Par indikatoriem izmanto lakmusa tinktūru vai bromtimola zilu. Jebkura ogļhidrāta sadalīšanos ar skābes veidošanos nosaka ar indikatora krāsas izmaiņām, gāzes veidošanos - piepildot ar gāzi un parādoties īpašam stikla pludiņam šķidrā vidē. Vai arī izmantojiet pusšķidru Gissa barotni (sk.) Ar 0,5% agaru ar atbilstošajiem cukuriem un Andrade indikatoru. Pēc mikrobu sēšanas uz šīm barotnēm skābes veidošanos nosaka barotnes apsārtums, bet gāzes veidošanos - tās burbuļu parādīšanās agarā vai agara kolonnas plīsums un augšupvērstā nobīde. Otrās grupas diferenciāldiagnostikas vidē ietilpst arī cietes agars, kas kalpo, lai noteiktu mikrobu spēju sadalīt cieti, Klarka barotni utt.

3. Barotne, kurā atklājas mikrobu spēja izmainīt buljonam pievienotās krāsvielas: metilēnzils, tionīns, lakmuss, neitrālsarkanais vai citi (Rotbergera barotne, Omelyansky barotne). Trešajā grupā ietilpst arī barotnes ar nitrātiem, kas kalpo, lai noteiktu mikrobu spēju reducēt slāpekļskābes sāļus (nitrātus) par slāpekļskābes sāļiem (nitrītiem) un pēc tam līdz amonjaka vai brīvā slāpekļa daudzumam.

4. Barotne, kas atklāj mikrobu spēju asimilēt vielas, kuras citi mikrobi nepieņem, piemēram, barotne ar nātrija citrātu (Simona citrāta agars), lai atšķirtu E. coli, kurai nav spējas asimilēt šo barotni, no citām zarnu grupas baktērijām vai barotne ar nātrija oleīnskābi difterijas bacillus diferencēšanai no viltus difterijas un difteroīdiem (Engeringa agars).

Diferenciāldiagnostikas vidē ietilpst arī barotnes anaerobu diferencēšanai, telurīta barotnes difterijas baktēriju diferencēšanai, barotne ar urīnvielu, sārmaina barotne (Dieudonne agar) Vibrio cholerae kultivēšanai uc Skatīt arī mikrobu identifikāciju.

Diferenciālie diagnostikas līdzekļi

diferenciāldiagnostikas vide, īpašas barības vielas, ko izmanto, lai identificētu mikroorganismus ar selektīvu bioķīmisko aktivitāti attiecībā uz noteiktām vielām. Attīstības procesā mikrobi ar enzīmu palīdzību noārda noteiktas vielas, kas veido vidi, ko nosaka mainoties videi.

Vairāki patogēni mikroorganismi sadala ogļhidrātus, daudzvērtīgos spirtus, veidojoties skābēm un gāzēm (oglekļa dioksīds, ūdeņradis, metāns), kas norāda, ka tie pieder noteiktai baktēriju grupai vai tipam. Lai noteiktu šīs īpašības, sagatavojiet šķidrumu vai pusšķidru D.-d. no. ar glikozi, laktozi, saharozi, mannozi un citiem ogļhidrātiem, daudzvērtīgiem spirtiem (raibs diapazons), ar indikatoriem (Andrade, Gissa), vidēji ar pienu. Mikrobu fermentatīvo spēju nosaka gāzes parādīšanās vai indikatora krāsas izmaiņas. Skābes veidošanās intensitāti no glikozes nosaka Clark barotnē, acetilmetilkarbonila veidošanos - izmantojot Voges-Proskauer reakciju, mikrobu amilolītisko spēju - uz cietes agara. Mikrobu proteolītiskās īpašības nosaka barotnēs, kas nesatur glikozi un glicerīnu - gaļas-peptona želatīnu, sarecējušu zirgu serumu, piena agaru. Gaļas-peptona želatīnu inokulē, iedurot mēģenes apakšpusē, inkubējot t 20-22 ° C, un pēc tam nosaka želatīna sašķidrināšanas pakāpi. Mikrobu hemolītisko spēju nosaka, uzklājot uz asins agara vai asins buljona. Lai noteiktu mikrobu reducējošo aktivitāti, izmantojiet D.-d. no. ar krāsvielām (, lakmusu, indokarmīnu, tionīnu utt.). Pieaugot mikrobiem, notiek pilnīga vai daļēja krāsas maiņa vai krāsas maiņa. Viņi izmanto arī barotni ar nitrātiem, kuros noteiktu mikrobu enzīmu ietekmē nitrāti tiek reducēti par nitrītiem un pēc tam uz amonjaku vai brīvo slāpekli.

Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca. - M.: "Padomju enciklopēdija". Galvenais redaktors V.P. Šiškovs. 1981 .

Skatiet, kas ir "DIFERENCIAL-DIAGNOSTIC MEDIA" citās vārdnīcās:

Diferenciāldiagnostikas vide - īpaši barības vielu maisījumi (skat. Kultūras barotne), uz kuriem audzē mikroorganismus, lai noteiktu to sugas. Uz D. d. Ar. ietver olbaltumvielu barotni, ko izmanto hemolītisko un ... ...

Barības vielas, substrāti, ko izmanto kultivēšanai mākslīgos mikroorganismu un audu kultūru apstākļos. Mikrobioloģiskajā praksē priekšmeta S. tiek plaši izmantots infekcijas slimību laboratoriskai diagnostikai, ... Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca

Bakterioloģiskās kultūras barotne - šķidri, pusšķidri vai blīvi substrāti, ko izmanto mikroorganismu audzēšanai laboratorijas vai rūpniecības apstākļos. Tos izmanto, lai izolētu vienkāršāko biogēno vai abiogēno objektu baktērijas, sēnītes un vienšūņus, lai ... ... Mikrobioloģijas vārdnīca

Kultūras mediji - šķidra vai cieta barotne, ko izmanto baktēriju, rauga, mikroskopisko sēņu, aļģu, vienšūņu, vīrusu un augu vai dzīvnieku šūnu kultūru audzēšanai laboratorijas vai rūpniecības apstākļos. Sintētiskais P. ar. ... ... Lielā padomju enciklopēdija

Gissa trešdiena - (Ph. N. Hiss, 1868 1913, amerikāņu bakteriologs; sinonīms: raiba rinda, krāsaina rinda) šķidras vai pusšķidras diferenciāldiagnostikas barības vielu barotnes, kas paredzētas baktēriju noteikšanai un diferencēšanai pēc to spējas sadalīt dažādas ... Liela medicīniskā vārdnīca

Makkonija trešdiena - (A. Ma Conkey, 1861 1931, angļu bakteriologs) selektīvās diferenciāldiagnostikas barības vielas ģimenes baktēriju izolēšanai. Enterobacteriaceae, piem. Escherichia coli, kas satur nātrija tauroholskābi un laktozi ... Liela medicīniskā vārdnīca

Uzturvielas - substrāti, kas sastāv no sastāvdaļām, kas nodrošina nepieciešamos apstākļus mikroorganismu audzēšanai vai to vielmaiņas produktu uzkrāšanai. Kultūras līdzekļi atšķiras pēc mērķa, konsekvences un sastāva. Pēc viņu mērķa ... ... Medicīnas enciklopēdija

Mikrobioloģiskā diagnostika - pamatojoties uz patogēna identificēšanu vai pacienta imūnās atbildes noteikšanu uz to. Sākotnējais posms M. d. ir materiāla atlase un paraugu nogādāšana laboratorijā. Pētījuma materiāla veidu nosaka īpašības ... Medicīnas enciklopēdija

Zāles - I Medicīna Medicīna ir zinātnisko zināšanu un praktiskās darbības sistēma, kuras mērķi ir veselības stiprināšana un uzturēšana, cilvēku dzīves pagarināšana, cilvēku slimību novēršana un ārstēšana. Lai veiktu šos uzdevumus, M. pēta struktūru un ... ... Medicīnas enciklopēdija

Anaerobi organismi - Aerobās un anaerobās baktērijas sākotnēji identificē šķidrā barotnē pēc O2 koncentrācijas gradienta: 1. Obligātās aerobās (skābekli pieprasošās) baktērijas galvenokārt pulcējas caurules augšējā daļā, lai absorbētu ... ... Wikipedia

Lai atšķirtu dažus baktēriju veidus no citiem, pamatojoties uz fermentatīvo aktivitāti, tie tiek izmantoti diferenciāldiagnostikas vidēs ... Piemēram, vide Giss, Endo vide, Levin vide, Ploskirev vide, Olkenitsky vide. Media Endo, Levin, Ploskirev Petri traukos tiek izmantoti, lai atšķirtu zarnu grupas baktērijas pēc to spējas fermentēt laktozi. Šīs barotnes satur barības vielu agaru, laktozi un indikatoru, kas skābā vidē maina krāsu (pH indikators). Ja šādā vidē tiek sētas baktērijas, kas fermentē laktozi, piemēram, E. coli, tad laktozes fermentācijas rezultātā veidojas skābe, un skābā vidē indikators mainīs krāsu. Tāpēc Escherichia coli kolonijas šādos barotnēs tiks iekrāsotas atbilstoši indikatora krāsai: Endo un Ploskirev plašsaziņas līdzekļos - sarkanā krāsā, Levina barotnē - melnā un zilā krāsā. Ja šos barotnes sēj ar baktērijām, kas neraudzē laktozi, piemēram, vēdertīfu vai dizentērijas nūjas, tad skābe neveidojas, barotnes reakcija paliks viegli sārmaina un indikatora krāsa nemainīsies. Tāpēc baktēriju kolonijas, kas neraudzē laktozi, šajos barotnēs būs bezkrāsainas. Ploskireva barotni var attiecināt arī uz plānveida barotnēm dizentērijas nūju izolēšanai, jo šī barotne satur žults sāļus, kas kavē E. coli augšanu, un izcili zaļu krāsu, kas kavē gaisa koku mikrofloras augšanu. Bismuta sulfīta agars ir diferenciāldiagnostikas vide, ko galvenokārt izmanto salmonelozes diagnostikā. Palielinoties salmonellām, bismuts tiek atjaunots no tā sāļiem, un Salmonella kolonijas kļūst melnas. Giss ("raibās" sērijas) diferenciāldiagnostikas barotnes sagatavo, pamatojoties uz šķidru barotni (peptona ūdens) vai pusšķidru gaļas-peptona agaru. Tie satur jebkuru ogļhidrātu vai daudzvērtīgu spirtu (laktozi, glikozi, mannītu, saharozi) un indikatoru, kas skābā vidē maina krāsu. Stikla pludiņu ievieto mēģenē ar šķidru Giss barotni. Ja uz Giss barotnes tiek iesēts mikrobs, kas fermentē šo ogļhidrātu, veidojoties skābei un gāzei, tas ir, galaproduktiem, barotne mainīs savu krāsu, pusšķidrā vidē pūslīši un plīsumi parādās agara biezums, šķidrā vidē - gāzes burbulis pludiņā. Kad ogļhidrāti tiek fermentēti tikai līdz starpproduktiem (skābei), mainās tikai barotnes krāsa. Tiek izmantoti arī kombinētie barotnes, kas satur ne vienu, bet divus vai trīs ogļhidrātus, piemēram, Olkenitsky barotne - trīs cukura agars ar urīnvielu. Viena Olkenitsky barotnes caurule aizstāj agara slīpi un Giss barotni ar laktozi, saharozi un glikozi. Trešdiena tiek sagatavota, pamatojoties uz ne pārāk blīvu MPA. Satur laktozi (1%), saharozi (1%), glikozi (0,1%), urīnvielu, Mohr sāli (dzelzs sulfātu), nātrija hiposulfītu un indikatoru. Pēc sterilizācijas barotni saplacinātā formā ielej mēģenē tā, lai iegūtu kolonnu un slīpu daļu. Sēšanu veic ar triecienu noapaļotajā daļā un ieduršanu kolonnā. Raudzējot vairāk ogļhidrātu (laktozi, saharozi vai abus cukurus), visa barotnes krāsa mainās; fermentējot tikai glikozi, stieņa krāsa mainās, un slīpā daļa paliek nemainīga. Gāzes veidošanos norāda burbuļu klātbūtne agara kolonnā. Kultūras, kas sadala urīnvielu, veidojot amonjaku, rada sārmainu reakciju. Šajā gadījumā skābes, kas veidojas ogļhidrātu fermentācijas laikā, neitralizē, un barotnes krāsa nemainās. Urīnvielas sadalīšanās ir raksturīga olbaltumvielām un dažiem E. coli. Patogēnas enterobaktērijas neiznīcina urīnvielu. Mohra sāls un hiposulfīta pievienošana arī ļauj mums izpētīt baktēriju spēju veidot sērūdeņradi, melnējot agara kolonnā dzelzs sulfāta pārveidošanās rezultātā par melno sulfīdu.

Ekspresmetodei mikroorganismu fermentatīvās aktivitātes noteikšanai tiek izmantotas mikrotesta sistēmas un indikatoru papīra sistēma (NIB). Mikrotesta sistēma ir caurspīdīga polistirola tvertne, kas sastāv no vairākām šūnām. Šūnas satur kaltētas bedres ar ogļhidrātiem un pH rādītājiem. Katrā šūnā tiek inokulēta noteikta blīvuma baktēriju kultūras suspensija. Fizisko ielej kontroles šūnās. risinājums. Rezultāts tiek ņemts vērā pēc 3-4 stundu ilgas inkubācijas termostātā atbilstoši indikatora krāsas maiņai. Indikatora papīra (NIB) sistēmas Enterobacteriaceae dzimtas identificēšanai ir hromatogrāfiskā papīra diski vai sloksnes, kas pārklāti ar polivinilspirtu un satur īpašu substrātu un indikatoru. Testa mēģenē ar fizioloģisko šķīdumu vai buferšķīdumu ievada pilnu testa kultūras cilpu vai pilienu biezas mikrobu suspensijas, pēc tam ievieto diskos ar sadedzinātiem pincetēm. Baktēriju kultūra netiek pievienota kontroles mēģenēm. Rezultāts tiek ņemts vērā, mainot indikatora krāsu. Lai noteiktu sērūdeņradi, disku ievieto testa mēģenē uz MPA virsmas, kas inokulēta ar dūrienu, kas ļauj vienlaikus noteikt mobilitāti. Visās mēģenēs tiek ņemts vērā provizoriskais rezultāts tajā pašā dienā un galīgais rezultāts pēc astoņpadsmit līdz divdesmit četrām stundām. Oksidāzes aktivitāti nosaka, sasmalcinot kultūru uz indikatora papīra pēc 30-60 sekundēm.

Aerobo un anaerobo baktēriju tīru kultūru izolēšana. Uzskaitiet principus un metodes izolētu aerobu koloniju iegūšanai. Anaerobu tīru kultūru izolēšanas metodes. Aprakstiet Veinbergas metodi pa dienām.

Aerobo baktēriju tīru kultūru kultivēšana un izolēšana

Mikroorganismu audzēšanai ir nepieciešami noteikti apstākļi: temperatūra, aerobie vai anaerobie apstākļi.

Temperatūrai jābūt sugai optimālai. Lielākā daļa patogēno baktēriju plaukst 37 ° C temperatūrā. Tomēr dažām sugām optimāla ir zemāka temperatūra to ekoloģijas īpatnību dēļ. Tātad mēra bacilai, kuras dabiskais biotops ir grauzēji ziemas guļas laikā, optimālā temperatūra ir 28 ° C, tāpat kā leptospirai, botulisma bacillus - 28 ° C-35 ° C.

Papildus optimālajai temperatūrai mikroorganismu audzēšanai atkarībā no sugas ir nepieciešama aerobā vai anaerobā vide.

Lai izpētītu mikrobu morfoloģiju, kultūras, bioķīmiskās un citas īpašības, nepieciešams iegūt tīru kultūru. Parasti mikrobu kultūru sauc par to uzkrāšanos barības vielā duļķainības, apakšas (sienas) izauguma vai plēves veidā uz šķidras barotnes vai koloniju virsmas uz blīvas barotnes. No vienas mikrobu šūnas izveidojas viena kolonija. Tīra kultūra ir vienas mikrobu sugas kultūra, kas iegūta no vienas kolonijas. Dažus zināmus mikrobu celmus laboratorijās izmanto dažādiem pētījumiem. Celma ir tīra mikrobu kultūra, kas iegūta no noteikta avota noteiktā laikā un kurai ir zināmas īpašības. Parasti mikrobu celmus apzīmē ar noteiktu skaitli. Piemēram, penicilīna aktivitātes noteikšanai izmanto Staphylococcus aureus 209P celmu.

Tīro aerobu kultūru izolēšana parasti ilgst trīs dienas un tiek veikta saskaņā ar šādu shēmu:

1. diena - testa materiāla uztriepes mikroskopija, ko iekrāso (parasti Grams), iepriekšējai iepazīšanai ar mikrofloru, kas var būt noderīga, izvēloties kultūras barotni potēšanai. Pēc tam materiālu inokulē uz sasaldētā barības agara virsmas, lai iegūtu izolētas kolonijas. Sijāšanu var veikt pēc Drygalsky metodes trīs Petri trauciņos ar barības vielu. Materiāla piliens tiek uzklāts uz pirmo kausu un ar lāpstiņu izkaisīts pa visu kausu. Tad ar to pašu lāpstiņu izdaliet atlikušo kultūru uz tā otrajā kausā un tādā pašā veidā uz trešās. Visvairāk koloniju augs pirmajā plāksnē, vismazāk trešajā. Uz vienas no plāksnēm augs izolētas kolonijas atkarībā no tā, cik mikrobu šūnu bija testa materiālā.

To pašu rezultātu var sasniegt, izsijājot vienu kausu. Lai to izdarītu, sadaliet kausu četrās nozarēs. Pētāmo materiālu inokulē ar bakterioloģisko cilpu ar insultu pirmajā sektorā, pēc tam, kalcinējot un atdzesējot cilpu, inokulācija tiek sadalīta no pirmā sektora uz otro un tādā pašā veidā secīgi uz trešo un ceturto sektoru. Izolētas kolonijas tiek veidotas no atsevišķām mikrobu šūnām pēc ikdienas inkubācijas termostātā.

2. diena - uz plāksnēm audzētu koloniju izpēte, to apraksts. Kolonijas var būt caurspīdīgas, caurspīdīgas vai necaurspīdīgas, tām ir dažādi izmēri, noapaļotas regulāras vai neregulāras kontūras, izliekta vai plakana forma, gluda vai raupja virsma, gludas vai viļņotas, robainas malas. Tie var būt bezkrāsaini vai balti, zeltaini, sarkani, dzelteni. Pamatojoties uz šo īpašību izpēti, izaugušās kolonijas tiek sadalītas grupās. Tad no pētāmās grupas izvēlas izolētu koloniju, mikroskopiskai izmeklēšanai sagatavo uztriepi, lai pārbaudītu mikrobu viendabīgumu kolonijā. To pašu koloniju inokulē mēģenē ar slīpu barības agaru.

3. diena - uz agara slīpuma audzētās kultūras tīrības pārbaude ar uztriepes mikroskopu. Ar pētīto baktēriju viendabīgumu tīras kultūras izolēšanu var uzskatīt par pilnīgu.

Lai identificētu izolētās baktērijas, tiek pētītas kultūras iezīmes, tas ir, augšanas raksturs uz šķidrajām un cietajām barības vielām. Piemēram, streptokoki uz cukura buljona veido dibena un parietālo nogulumu, uz asins agara - mazas, precīzas kolonijas; holēras vibrio veido plēvi uz sārmainā peptona ūdens virsmas un caurspīdīgas kolonijas uz sārmainā agara; mēris bacillus uz barojošā agara veido kolonijas "mežģīņu lakatiņu" formā ar blīvu centru un plānām viļņainām malām, kā arī šķidrā barības vielu vidē - plēvi uz virsmas, un pēc tam no tā stiepjas pavedieni "stalaktītu formā ".

Anaerobo baktēriju tīru kultūru kultivēšana un izolēšana

Anaerobu kultivēšanai ir nepieciešams samazināt barotnes oksidēšanās-reducēšanās potenciālu, radīt anaerobiozi, atdalot skābekli ar fizikālām, ķīmiskām vai bioloģiskām metodēm.

Fiziskās metodes ietver:

1) mehāniska gaisa noņemšana ar sūkni no aneostostat, kurā ievieto traukus ar labību. Tajā pašā laikā jūs varat aizstāt gaisu ar vienaldzīgu gāzi: slāpekli, ūdeņradi, oglekļa dioksīdu.

2) audzēšana barotnē, kas satur reducējošās vielas. Kitta-Tarozzi Wednesday ir cukura buljons ar aknu vai gaļas gabaliņiem. Glikozei un orgānu gabaliem ir reducējošā spēja. Barotni ielej virsū ar vazelīna eļļas slāni, lai bloķētu skābekļa piekļuvi gaisam.

3) Vienkāršākā, bet mazāk uzticamā metode ir augšana dziļi augstā cukura agara kolonnā.

Ķīmiskās metodes sastāv no tā, ka traukus ar anaerobu kultūrām ievieto hermētiski noslēgtā eksikatorā, kur ievieto ķīmiskas vielas, piemēram, pirogallolu un sārmu, starp kuriem notiek skābekļa absorbcija.

Bioloģiskā metode ir balstīta uz anaerobu un aerobu vienlaicīgu audzēšanu uz cietām barības vielām Petri trauciņos, kas pēc inokulācijas hermētiski noslēgti. Pirmkārt, augošie aerobi absorbē skābekli, un pēc tam sākas anaerobu augšana.

Tīras anaerobu kultūras izolēšana sākas ar anaerobo baktēriju uzkrāšanos, inokulējot Kitta-Tarozzi barotnē. Nākotnē izolētas kolonijas iegūst vienā no diviem veidiem:

1) materiāls tiek inokulēts, stikla mēģenēs sajaucot ar kausētu siltu cukura agaru. Pēc agara sacietēšanas tā dziļumā aug izolētas kolonijas, kuras noņem, sagriežot mēģeni, un pārkulturē uz Kit-Tarozzi barotnes (Veinberga metode);

2) materiāla inokulāciju veic uz plāksnēm ar barības vielu un inkubē anaerostātā. Uz plāksnes audzētas izolētas kolonijas tiek pārkulturētas uz Kitt-Tarozzi barotnes (Zeislera metode).