Ayırıcı tanılama ortamlarını kullanmanın amacı nedir? Örnekler ve nasıl çalıştıkları

Ayırıcı tanı ortamları, mikrop türlerini belirlemek ve özelliklerini incelemek için kullanılan özel besin karışımlarıdır. Bakteriler ayırıcı tanı ortamlarında büyüdüğünde, mikrobiyal hücrede çeşitli enzimlerin varlığı nedeniyle kimyasal işlemler meydana gelir. Bazıları proteinleri parçalayabilir, diğerleri karbonhidratlardır ve yine diğerleri oksidasyon ve indirgeme reaksiyonlarına vb. neden olabilir. Enzimlerin etkisinden dolayı, ayırıcı tanı ortamında ilgili değişiklikler meydana gelir. Ayırıcı tanı ortamları dört ana gruba ayrılabilir.

• 1. Protein içeren ve mikropların proteinleri parçalama yeteneğini ortaya çıkaran ortam (proteolitik Özellikler): et-pepton jelatin "sütun", haddelenmiş at veya sığır serumu, süt, kanlı agar. Bakteriler et-pepton jelatin içinde bir delinme ile aşılandığında, protein parçalanması durumunda besiyerinde bir sıvılaşma gözlemlenir. Pıhtılaşmış serum içeren bir ortam üzerine aşılandığında, protein bozunması ortamın seyreltilmesi ve yüzeyinde çöküntülerin oluşması ile belirlenir. Sütün mikrop tarafından parçalanması, başlangıçta kesilmiş sütün aydınlanması veya çözünmesi ile ortaya çıkar. Test kültürünün hemolitik aktivitesinin varlığı, özel bir kanlı agar üzerinde bir Petri kabına aşılanarak kontrol edilir. Kolonilerin etrafındaki kırmızı kan hücrelerinin (örneğin hemolitik streptokok veya stafilokok) yok edilmesinin bir sonucu olarak, temizleme bölgeleri oluşur.
• 2. Mikropların karbonhidratları ve yüksek düzeyde atomik alkolleri parçalama yeteneğini saptamak için ortam (Endo Çarşamba, Levin'in ortamı, Russell'ın ortamı, Drygalsky'nin - Konradi'nin ortamı, Rapoport'un - Weintraub'un ortamı, Shustov'un ortamı). Mikroorganizmaların bu özelliklerini tanımlamak için, çeşitli karbonhidratlar, polihidrik alkoller ve bir gösterge dahil olmak üzere besin ortamı içeren bir dizi test tüpü olan "rengarenk" bir dizi de kullanılır. Gösterge olarak turnusol tentürü veya bromotimol mavisi kullanılır. Karbonhidratlardan herhangi birinin asit oluşumu ile ayrışması, göstergenin rengindeki bir değişiklik, gaz oluşumu - gazla doldurulması ve sıvı bir ortamda özel bir cam şamandıranın ortaya çıkması ile tespit edilir. Veya karşılık gelen şekerler ve Andrade göstergesi ile %0.5 agar içeren yarı sıvı Gissa ortamını (bkz.) kullanın. Mikropları bu besiyerlerine ektikten sonra, asit oluşumu ortamın kızarması ve gaz oluşumu - agardaki kabarcıklarının ortaya çıkması veya agar kolonunun yırtılması ve yukarı doğru kayması ile ortaya çıkar. İkinci grubun ayırıcı tanı ortamı ayrıca mikropların nişastayı, Clark'ın ortamını vb. parçalama yeteneğini belirlemeye yarayan nişasta agarını da içerir.
• 3. Et suyuna eklenen boyaların rengini bozan mikropların bulunduğu ortamlar: metilen mavisi, tiyonin, turnusol, çivit mavisi, nötr kırmızı veya diğerleri (Rothberger ortamı, Omelyansky ortamı). Üçüncü grup ayrıca, mikropların nitrik asit tuzlarını (nitratları) nitröz asit tuzlarına (nitritler) ve ardından amonyak veya serbest nitrojene indirgeme yeteneğini belirlemeye yarayan nitratlı ortamları da içerir.
• 4. Mikropların, diğer mikroplar tarafından asimile edilmeyen maddeleri asimile etme yeteneğini ortaya çıkaran ortamlar, örneğin, bu ortamı özümseme yeteneğinden yoksun olan E. coli'yi ayırt etmek için sodyum sitratlı bir ortam (Simons sitrat agar), bağırsak grubunun diğer bakterilerinden veya difteri basilini psödo-difteri ve difteroitlerden (agarEngering) ayırt etmek için sodyum oleik asitli bir besiyerinden.

Ayırıcı tanı ortamları ayrıca anaerobların ayırt edilmesi için ortamları, difteri bakterilerinin ayırt edilmesi için tellürit ortamları, üre içeren ortamları, Vibrio cholerae'nin yetiştirilmesi için alkali ortamları (Dieudonneagar) vb. içerir.

Çarşamba Endo. %1 laktoz ilaveli MPA ve sodyum sülfit ile renklendirilmiş bazik fuksin (gösterge) içerir. Endo besiyeri hafif pembe bir renge sahiptir. Laktozu asidik ürünler oluşturmak üzere ayrıştıran bakterileri bu yeteneğe sahip olmayan bakterilerden ayırmak için bağırsak enfeksiyonlarının tanısında kullanılır. Laktoz pozitif mikrop kolonileri (Escherichia coli), fuksinin indirgenmesi nedeniyle kırmızıdır. Laktoz negatif mikroorganizma kolonileri - Salmonella, Shigella ve diğerleri - renksizdir.

Ayırıcı tanılama ortamları, kısa ve genişletilmiş rengarenk bir sıra içerir. Karbonhidratlı (Giss media), MPB, süt, mezopatami jelatinli ortamlardan oluşur.

Giss ortamları, kimyasal olarak saf mono-, di- veya polisakkaritlerin (glikoz, laktoz, nişasta, vb.) eklendiği pepton suyu bazında hazırlanır.

Asit oluşumu ve karbonhidrat ayrışmasının bir sonucu olarak pH'daki kaymaları tespit etmek için ortama bir indikatör eklenir. Karbonhidratların daha derin bir şekilde parçalanmasıyla, şamandıralar aracılığıyla yakalanan gaz halindeki ürünler (CO 2, CH 4, vb.) oluşur - ortama baş aşağı indirilen küçük test tüpleri. Karbonhidratlı ortamlar da yoğun olarak hazırlanabilir - %0.5-1 agar-agar ilavesiyle. Daha sonra gazlaşma, ortamın kolonunda kabarcıkların (yırtılmaların) oluşmasıyla yakalanır.

Rengarenk sıranın bir parçası olan BCH'de, amino asitlerin ve peptonların (indol, hidrojen sülfür) parçalanması sırasında oluşan ürünler bulunur. Hidrojen sülfür, kültürün aşılanmasından sonra BCH içindeki bir kurşun asetat çözeltisine batırılmış bir filtre kağıdı şeridi yerleştirilerek saptanır. Kükürt içeren amino asitler parçalandığında hidrojen sülfür açığa çıkar, kurşun sülfür oluşumundan dolayı kağıt parçası kararır. İndolü belirlemek için karmaşık bir gösterge kullanılabilir. İndol, triptofanın parçalanmasıyla oluşur ve bu gösterge BCH üzerinde yetiştirilen bir kültüre eklendiğinde tespit edilebilir. İndol varlığında MPB yeşile veya maviye döner.

Pratik bakteriyolojik laboratuvarlarda, mikroorganizmaların biyokimyasal özelliklerinin yaklaşık olarak incelenmesi için mikro ve ekspres yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu amaçla birçok test sistemi bulunmaktadır. En yaygın kullanılan gösterge menkul kıymetler sistemi (NIB). NIB'ler, göstergelerle birlikte şeker veya diğer substratların çözeltileri ile emprenye edilmiş filtre kağıdı diskleridir. Bu tür diskler, sıvı bir besleyici ortam içinde büyütülmüş bir kültüre sahip bir test tüpüne daldırılır. Diskin substrat ile rengindeki değişiklik, enzimin çalışmasını değerlendirmek için kullanılır. Enterobacteriaceae'nin tanımlanmasını incelemek için mikro test sistemleri, göstergelerin eklenmesiyle çeşitli substratları içeren ortamlara sahip tek kullanımlık plastik kaplarda sunulur. Bu tür test sistemlerinde saf bir mikroorganizma kültürü ekmek, bakterilerin sitratları, glikozu, sakarozu kullanma, amonyak, indol, ayrıştırma üre, lizin, fenilalanin vb. kullanma yeteneğini hızlı bir şekilde ortaya çıkarmanıza olanak tanır.

Kuru ortamlar. Besin agarının yanı sıra ana ayırıcı tanı ortamı, şu anda gerekli tüm bileşenleri içeren kuru müstahzarlar şeklinde üretilmektedir. Bu tür tozlara sadece su ekleyip pişirmeniz ve ardından döktükten sonra sterilize etmeniz gerekir.

Ayırıcı tanı ortamları, mikrop türlerini belirlemek ve özelliklerini incelemek için kullanılan özel besin karışımlarıdır. Ayırıcı tanı ortamlarında bakterilerin büyümesiyle birlikte, mikrobiyal hücrede çeşitli bulunması nedeniyle kimyasal süreçler meydana gelir. Bazıları parçalanabilir, diğerleri - ve yine diğerleri - oksidasyon ve indirgeme reaksiyonlarına vb. neden olabilir. Enzimlerin ayırıcı tanı ortamındaki etkisi nedeniyle, ilgili değişiklikler meydana gelir.

Ayırıcı tanı ortamları dört ana gruba ayrılabilir.

Pirinç. 1-6. Jelatin parçalanmasının çeşitli biçimleri. Pirinç. 7 - 9. Karbonhidratlı ve Andrade göstergeli sıvı ortam: şek. 7 - fermantasyon yok; pilav. 8 - asit oluşumu ile fermantasyon; pilav. 9 - asit ve gaz oluşumu ile fermantasyon. Pirinç. 10 - 12. Karbonhidrat ve BP göstergeli yarı sıvı ortam (kuru kültür ortamından): şek. 10 - fermantasyon yok; pilav. 11 - asit oluşumu ile fermantasyon; pilav. 12 - asit ve gaz oluşumu ile fermantasyon. Pirinç. 13-15. Seitz'e göre yapay turnusol serumu: pirinç. 13 - fermantasyon yok; pilav. 14 - asit oluşumu ile fermantasyon; pilav. 15 - fermantasyon oluşturmak için. Pirinç. 16 ve 17. Metilen mavili süt: şek. 16 - azalma yok; pilav. 17 -azaltma. Pirinç. 18 ve 19. Çarşamba Simons: şek. 18 - sitrat asimilasyonu eksikliği; pilav. 19 - sitrat asimilasyonu. Pirinç. 20 - 24. Turnusol sütü: pirinç. 20 - fermantasyon yok; pilav. 21 - asit oluşumu ile fermantasyon; pilav. 22 - alkali oluşumu ile fermantasyon; pilav. 23 - peptonizasyon; pilav. 24 - azalma. Pirinç. 25. Sıvılaştırma yuvarlandı (geçirilen ışıkta). Pirinç. 26. Kanlı agarda hemoliz (geçen ışıkta). Pirinç. 27. Potasyum tellürit ile kan ortamı.

1. Protein içeren ve mikropların proteinleri parçalama yeteneğini ortaya çıkaran ortam (proteolitik Özellikler): et-pepton "sütun", haddelenmiş at veya sığır serumu, süt, kanlı agar. Bakteriler et-pepton jelatininde bir delinme ile aşılandığında, protein parçalanması durumunda bir "sütun", besiyerinde bir sıvılaşma gözlemlenir. Pıhtılaşmış serum içeren bir ortam üzerine aşılandığında, protein bozunması ortamın seyreltilmesi ve yüzeyinde çöküntülerin oluşması ile belirlenir. Sütün mikrop tarafından parçalanması, başlangıçta kesilmiş sütün aydınlanması veya çözünmesi ile ortaya çıkar. Test kültürünün hemolitik aktivitesinin varlığı, özel bir kanlı agarda aşılanarak kontrol edilir. Kolonilerin çevresinde (örneğin hemolitik veya) tahribat sonucunda temizleme bölgeleri oluşur.

2. Mikropların karbonhidratları parçalama kabiliyetini tespit etmek için ortam (Endo Çarşamba, Levin'in ortamı, Russell'ın ortamı, Drygalsky'nin - Konradi'nin ortamı, Rapoport - Weintraub'un ortamı, Shustovoy Çarşamba). Mikroorganizmaların bu özelliklerini tanımlamak için "alacalı" bir sıra da kullanılır, yani çeşitli karbonhidratlar, polihidrik alkoller ve bir gösterge içeren bir dizi test tüpü. Gösterge olarak turnusol tentürü veya bromotimol mavisi kullanılır. Karbonhidratlardan herhangi birinin asit oluşumu ile ayrışması, göstergenin rengindeki bir değişiklik, gaz oluşumu - gazla doldurulması ve sıvı bir ortamda özel bir cam şamandıranın ortaya çıkması ile tespit edilir. Veya karşılık gelen şekerler ve Andrade göstergesi ile %0.5 agar içeren yarı sıvı Gissa ortamını (bkz.) kullanın. Mikrobu bu besiyerlerine ektikten sonra, asit oluşumu ortamın kızarması ve gaz oluşumu - agardaki kabarcıklarının görünmesi veya agar kolonunun yırtılması ve yukarı doğru kayması ile tespit edilir. İkinci grubun ayırıcı tanı ortamı ayrıca mikropların nişastayı, Clark'ın ortamını vb. parçalama yeteneğini belirlemeye yarayan nişasta agarını da içerir.

3. Mikropların et suyuna eklenen boyaların rengini değiştirme yeteneğinin ortaya çıktığı ortam: metilen mavisi, tiyonin, turnusol, nötr kırmızı veya diğerleri (Rothberger ortamı, Omelyansky ortamı). Üçüncü grup ayrıca, mikropların nitrik asit tuzlarını (nitratları) nitröz asit tuzlarına (nitritler) ve ardından amonyak veya serbest nitrojene indirgeme yeteneğini belirlemeye yarayan nitratlı ortamları da içerir.

4. Mikropların, diğer mikroplar tarafından asimile edilmeyen maddeleri asimile etme yeteneğini ortaya çıkaran ortamlar, örneğin, bu ortamı özümseme yeteneğinden yoksun olan E. coli'yi ayırt etmek için sodyum sitratlı bir ortam (Simons sitrat agar), bağırsak grubunun diğer bakterilerinden veya difteri basilini sahte difteri ve difteroitlerden (Engering agar) ayırt etmek için sodyum oleik asitli bir besiyerinden.

Ayırıcı tanı ortamları ayrıca anaerobların ayırt edilmesi için ortamları, difteri bakterilerinin ayırt edilmesi için tellürit ortamları, üre içeren ortamları, Vibrio cholerae kültürü için alkali ortamları (Dieudonne agar) vb. içerir. Ayrıca bkz. Mikropların tanımlanması.

FARKLI TANI ORTAMI

ayırıcı tanı ortamı Belirli maddelerle ilgili olarak seçici biyokimyasal aktiviteye sahip mikroorganizmaları tanımlamak için kullanılan özel besin ortamı. Gelişim sürecinde mikroplar, enzimlerin yardımıyla, ortamdaki bir değişiklikle oluşan ortamı oluşturan belirli maddeleri parçalar.

Bir dizi patojenik mikroorganizma, karbonhidratları, asitler ve gazlar (karbon dioksit, hidrojen, metan) oluşumu ile polihidrik alkolleri ayrıştırır, bu da belirli bir bakteri grubuna veya türüne ait olduklarını gösterir. Bu özellikleri oluşturmak için sıvı veya yarı sıvı hazırlayın. D.-d. ile birlikte. glikoz, laktoz, sakaroz, mannoz ve diğer karbonhidratlar, polihidrik alkoller (alacalı aralık), göstergeli (Andrade, Gissa), sütlü orta. Mikropların enzimatik yeteneği, gazın görünümü veya göstergenin rengindeki bir değişiklik ile belirlenir. Glikozdan asit oluşumunun yoğunluğu Clark'ın ortamında, asetilmetilkarbonal oluşumu - Voges-Proskauer reaksiyonu kullanılarak, mikropların amilolitik yeteneği - nişasta agar üzerinde belirlenir. Mikropların proteolitik özellikleri, glikoz ve gliserin - et-pepton jelatin, pıhtılaşmış at peynir altı suyu, süt agar içermeyen ortamlarda belirlenir. Et-pepton jelatin, test tüpünün dibine batırılarak aşılanır, inkübe edilir. T 20-22 ° C ve ardından jelatinin sıvılaşma derecesini belirleyin. Mikropların hemolitik yeteneği, kanlı agar veya kan suyu üzerine kaplanarak belirlenir. Mikropların azaltıcı aktivitesini belirlemek için kullanın D.-d. ile birlikte. boyalarla (, turnusol, indokarmin, tiyonin, vb.). Mikroplar büyüdükçe, boyada tam veya kısmi renk değişikliği veya renk değişikliği meydana gelir. Bazı mikropların enzimlerinin etkisi altında nitratların nitritlere ve ardından amonyak veya serbest nitrojene indirgendiği nitratlı ortamlar da kullanılır.

Veteriner ansiklopedik sözlük. - M.: "Sovyet Ansiklopedisi". Baş editör V.P. Şişkov. 1981 .

Diğer sözlüklerde "FARKLI TANI ORTAMI"nın ne olduğunu görün:

Ayırıcı tanı ortamları- türlerini belirlemek için üzerinde mikroorganizmaların yetiştirildiği özel besin karışımları (bkz. Kültür ortamı). D. d. ile. hemolitik belirlemek için kullanılan protein ortamını içerir ve ... ...

Besin ortamları, mikroorganizmaların ve doku kültürlerinin yapay koşullarında yetiştirme için kullanılan substratlar. Mikrobiyolojik uygulamada, maddenin S.'si bulaşıcı hastalıkların laboratuvar teşhisi için yaygın olarak kullanılmaktadır, çünkü ... ... Veterinerlik ansiklopedik sözlüğü

Bakteriyolojik kültür ortamı- Laboratuvar veya endüstriyel koşullarda mikroorganizmaları büyütmek için kullanılan sıvı, yarı sıvı veya katı substratlar. Bakterileri, mantarları ve protozoaları biyojenik veya abiyojenik nesnelerden saf olarak p'ye kadar izole etmek için kullanılırlar, çünkü ... ... Mikrobiyoloji Sözlüğü

kültür medyası- Laboratuvar veya endüstriyel koşullarda bakteri, maya, mikroskobik mantar, alg, protozoa, virüs ve bitki veya hayvan hücrelerinin kültürlerini büyütmek için kullanılan sıvı veya katı ortamlar. Sentetik P. ile. ... ... Büyük Sovyet Ansiklopedisi

Gissa Çarşamba- (Ph. N. Hiss, 1868 1913, Amerikalı bakteriyolog; eşanlamlı: alacalı sıra, renkli sıra) bakterileri çeşitli ayrıştırma yeteneklerine göre belirlemek ve ayırt etmek için tasarlanmış sıvı veya yarı sıvı ayırıcı tanılayıcı besin ortamı ... ... Kapsamlı Tıp Sözlüğü

McConkey Çarşamba- (A. Ma Conkey, 1861 1931, İngiliz bakteriyolog) ailenin bakterilerinin izolasyonu için seçici ayırıcı tanı besin ortamı. Enterobacteriaceae, örn. Sodyum taurokolik asit ve laktoz içeren Escherichia coli... Kapsamlı Tıp Sözlüğü

besinler- mikroorganizmaların yetiştirilmesi veya atık ürünlerinin birikmesi için gerekli koşulları sağlayan bileşenlerden oluşan substratlar. Kültür ortamı amaç, tutarlılık ve bileşim bakımından farklılık gösterir. Amaçlarına göre ... ... tıp ansiklopedisi

Mikrobiyolojik teşhis- patojenin tanımlanmasına veya hastanın vücudunun ona karşı bağışıklık tepkisinin tanımlanmasına dayanarak. M.D.'nin ilk aşaması. malzeme seçimi ve numunelerin laboratuvara taşınmasıdır. Araştırma için malzeme türü özelliklere göre belirlenir ... ... tıp ansiklopedisi

İlaç- I Tıp Tıp, hedefleri sağlığı güçlendirmek ve sürdürmek, insanların ömrünü uzatmak, insan hastalıklarını önlemek ve tedavi etmek olan bir bilimsel bilgi ve pratik faaliyet sistemidir. Bu görevleri yerine getirmek için M. yapıyı inceler ve ... ... tıp ansiklopedisi

anaerobik organizmalar- Aerobik ve anaerobik bakteriler, bir sıvı besin ortamında O2 konsantrasyon gradyanı ile ön olarak tanımlanır: 1. Zorunlu aerobik (oksijen gerektiren) bakteriler, absorbe etmek için esas olarak tüpün üst kısmında toplanır ... ... Wikipedia

Bazı bakteri türlerini enzimatik aktivitelerine göre diğerlerinden ayırmak için kullanılırlar. ayırıcı tanı ortamları ... Örneğin, Giss ortamı, Endo ortamı, Levin ortamı, Ploskirev ortamı, Olkenitsky ortamı. Petri kaplarında Media Endo, Levin, Ploskirev, bağırsak grubunun bakterilerini laktozu fermente etme yeteneklerine göre ayırt etmek için kullanılır. Bu besiyerleri besleyici agar, laktoz ve asidik bir ortamda renk değiştiren bir indikatör (pH göstergesi) içerir. E. coli gibi laktozu fermente eden bakteriler böyle bir ortama ekilirse, laktozun fermantasyonu sonucu asit oluşur ve asidik ortamda indikatör renk değiştirir. Bu nedenle, bu tür ortamlar üzerindeki Escherichia coli kolonileri, göstergenin rengine göre renklendirilecektir: Endo's ve Ploskirev'in besiyerinde - kırmızı, Levin'in besiyerinde - siyah ve mavi. Bu ortamlara, örneğin tifo çubukları veya dizanteri çubukları gibi laktozu fermente etmeyen bakteriler ekilirse, asit oluşmaz, ortamın reaksiyonu hafif alkali kalır ve göstergenin rengi değişmez. Bu nedenle, laktozu fermente etmeyen bakteri kolonileri bu besiyerlerinde renksiz olacaktır. Ploskirev ortamı aynı zamanda dizanteri çubuklarının izolasyonu için seçmeli ortama da atfedilebilir, çünkü bu ortam E. coli'nin büyümesini engelleyen safra tuzları ve hava kokkal mikroflorasının büyümesini engelleyen parlak yeşil bir boya içerir. Bizmut sülfit agar, esas olarak salmonelloz tanısında kullanılan ayırıcı bir tanı ortamıdır. Salmonella'nın büyümesiyle bizmut tuzlarından geri döner ve Salmonella kolonileri siyaha döner. Giss'in ("rengarenk" seri) ayırıcı tanı ortamları, bir sıvı ortam (pepton su) veya yarı sıvı et-pepton agar temelinde hazırlanır. Herhangi bir karbonhidrat veya polihidrik alkol (laktoz, glikoz, manitol, sukroz) ve asidik bir ortamda renk değiştiren bir gösterge içerirler. Sıvı bir Giss ortamı içeren bir test tüpüne bir cam şamandıra yerleştirilir. Bu karbonhidratı asit ve gaz oluşumuyla, yani nihai ürünlere fermente eden Giss ortamına bir mikrop ekilirse, ortam rengini değiştirir, yarı sıvı bir ortamda kabarcıklar ve kopmalar oluşur. sıvı bir ortamda agarın kalınlığı - şamandıra içinde bir gaz kabarcığı. Bir karbonhidrat sadece ara ürünlere (asite) fermente edildiğinde, sadece ortamın rengi değişir.Bir karbonhidrat değil, iki veya üç karbonhidrat içeren kombine ortam da kullanılır, örneğin, Olkenitsky'nin üre ile orta - üç şekerli agarı. Olkenitsky ortamının bir tüpü, agar slant ve Giss ortamını laktoz, sakaroz ve glikoz ile değiştirir. Çarşamba, çok yoğun olmayan bir MPA temelinde hazırlanır. Laktoz (%1), sakaroz (%1), glikoz (%0,1), üre, Mohr tuzu (demir sülfat), sodyum hiposülfit ve bir indikatör içerir. Sterilizasyondan sonra, ortam düzleştirilmiş bir biçimde bir test tüpüne dökülür, böylece bir kolon ve bir eğimli kısım elde edilir. Ekim, eğimli kısım üzerinde bir vuruş ve bir sütunda bir dikme ile yapılır. Daha fazla karbonhidrat (laktoz, sakaroz veya her iki şeker) fermente ettiğinizde, tüm ortamın rengi değişir; sadece glikoz fermente edildiğinde, çubuğun rengi değişir ve eğimli kısım değişmeden kalır. Gaz oluşumu, agar kolonunda kabarcıkların varlığı ile gösterilir. Üreyi amonyak oluşturmak üzere parçalayan kültürler, alkali bir reaksiyon verir. Bu durumda karbonhidratların fermantasyonu sırasında oluşan asit nötralize olur ve ortamın rengi değişmez. Ürenin parçalanması, proteinlerin ve bazı E. kolilerin özelliğidir. Patojenik enterobacteriaceae üreyi parçalamaz. Mohr tuzu ve hiposülfit ilavesi, bakterilerin, demir sülfatın siyah sülfüre dönüşmesinin bir sonucu olarak agar kolonunda karararak hidrojen sülfit oluşturma kabiliyetini incelemeyi de mümkün kılar.

Mikroorganizmaların enzimatik aktivitesini belirlemek için ekspres yöntem için mikro test sistemleri ve bir gösterge kağıtları sistemi (NIB) kullanılır. Mikrotest sistemi, birkaç hücreden oluşan şeffaf bir polistiren kaptır. Hücreler, karbonhidratlar ve pH göstergeleri ile kurutulmuş çukur ortamı içerir. Her hücreye belirli bir yoğunluktaki bakteri kültürünün bir süspansiyonu aşılanır. Fiziksel kontrol hücrelerine dökülür. çözüm. Sonuç, indikatörün renk değişimine göre bir termostatta 3-4 saatlik inkübasyondan sonra dikkate alınır Enterobacteriaceae familyasının tanımlanması için indikatör kağıtları (NIB) sistemleri, koruyucu bir filmle kaplanmış kromatografik kağıttan diskler veya şeritlerdir. polivinil alkol ve spesifik bir substrat ve indikatör içerir. Tuzlu su veya tampon solüsyonlu bir test tüpünde, test kültürünün tam bir döngüsü veya bir damla kalın mikrobiyal süspansiyon verilir, ardından yanmış cımbızla disklere yerleştirilir. Kontrol tüplerine bakteri kültürü eklenmez. Sonuç, göstergenin rengi değiştirilerek dikkate alınır. Hidrojen sülfürü belirlemek için disk, hareketliliği aynı anda belirlemeyi mümkün kılan bir iğne ile aşılanmış MPA'nın yüzeyindeki bir test tüpüne yerleştirilir. Tüm test tüplerinde aynı gün alınan ön sonuç ve onsekiz-yirmi dört saat sonraki nihai sonuç dikkate alınır. Oksidaz aktivitesi, kültürün 30-60 saniye sonra bir gösterge kağıdı üzerinde öğütülmesiyle belirlenir.

Aerobik ve anaerobik bakterilerin saf kültürlerinin izolasyonu. İzole aerob kolonileri elde etmenin ilke ve yöntemlerini listeler. Anaerobların saf kültürlerinin izolasyonu için yöntemler. Weinberg yöntemini günlere göre tanımlayın.

Aerobik bakterilerin saf kültürlerinin yetiştirilmesi ve izolasyonu

Mikroorganizmaların yetiştirilmesi için belirli koşullar gereklidir: sıcaklık, aerobik veya anaerobik koşullar.

Sıcaklık türler için optimal olmalıdır. Çoğu patojenik bakteri 37 °C'de gelişir. Bununla birlikte, bazı türler için, ekolojilerinin özelliklerine bağlı olarak daha düşük bir sıcaklık en uygunudur. Bu nedenle, kış uykusu sırasında doğal yaşam alanı kemirgenler olan veba basili için, optimum sıcaklık 28 ° C ve ayrıca leptospira için botulizm basili için - 28 ° C-35 ° C'dir.

Mikroorganizmaların yetiştirilmesi için optimum sıcaklığa ek olarak, türe bağlı olarak aerobik veya anaerobik ortam gereklidir.

Mikropların morfolojisini, kültürel, biyokimyasal ve diğer özelliklerini incelemek için saf bir kültür elde etmek gerekir. Genellikle, bir mikrop kültürü, bulanıklık, tabana yakın (duvar) büyüme veya sıvı bir ortamın yüzeyinde bir film veya yoğun bir ortam üzerinde koloniler şeklinde bir besleyici ortam üzerinde birikimleri olarak adlandırılır. Bir mikrobiyal hücreden tek bir koloni oluşur. Saf kültür, tek bir koloniden elde edilen aynı türden mikropların kültürüdür. Laboratuvarlarda, çeşitli çalışmalar için bilinen bazı mikrop türleri kullanılmaktadır. Bir suş, belirli bir zamanda, belirli bir kaynaktan elde edilen ve özellikleri bilinen saf bir mikrop kültürüdür. Tipik olarak, mikrobiyal suşlar belirli bir sayı ile belirtilir. Örneğin, penisilin aktivitesini belirlemek için Staphylococcus aureus 209P suşu kullanılır.

Saf aerob kültürlerinin izolasyonu genellikle üç gün sürer ve aşağıdaki şemaya göre gerçekleştirilir:

1. gün - test materyalinden lekeli bir lekenin mikroskopisi (genellikle Gram ile) - aşılama için bir kültür ortamı seçiminde faydalı olabilecek mikroflora ile ön bilgi için. Daha sonra izole koloniler elde etmek için materyalin donmuş besin agar yüzeyine aşılanması. Drygalsky yöntemine göre eleme, besleyici ortam ile üç Petri kabına yapılabilir. İlk bardağa bir damla malzeme sürülür ve tüm bardağa bir spatula ile yayılır. Daha sonra kalan kültürü üzerine aynı spatula ile ikinci bardağa, üçüncü bardağa da aynı şekilde dağıtın. En fazla sayıda koloni ilk plakada, en az ise üçüncü plakada büyüyecektir. Test materyalinde kaç mikrobiyal hücre olduğuna bağlı olarak, plakalardan birinde izole koloniler büyüyecektir.

Aynı sonuç bir fincandan elenerek de elde edilebilir. Bunu yapmak için bardağı dört sektöre ayırın. İncelenen materyal, birinci sektör üzerinde vuruşlu bakteriyolojik bir öze ile aşılanır, daha sonra, halkayı kalsine edip soğuttuktan sonra, aşılama birinci sektörden ikinciye ve aynı şekilde sırayla üçüncü ve dördüncü sektörlere dağıtılır. Bir termostatta 24 saat inkübasyondan sonra ayrı mikrobiyal hücrelerden izole koloniler oluşturulur.

2. gün - plakalarda büyüyen kolonilerin incelenmesi, tanımları. Koloniler şeffaf, yarı saydam veya opak olabilir, farklı boyutlarda, yuvarlak düzenli veya düzensiz dış hatlara, dışbükey veya düz şekle, pürüzsüz veya pürüzlü yüzeye, pürüzsüz veya dalgalı, pürüzlü kenarlara sahiptir. Renksiz veya beyaz, altın, kırmızı, sarı olabilirler. Bu özelliklerin çalışmasına dayanarak, yetiştirilen koloniler gruplara ayrılır. Daha sonra çalışma grubundan izole bir koloni seçilir, kolonideki mikropların homojenliğini kontrol etmek için mikroskobik inceleme için bir yayma hazırlanır. Aynı koloni, eğimli besleyici agar içeren bir test tüpüne aşılanır.

3. gün - yayma mikroskobu ile agar slantında yetiştirilen kültürün saflığının kontrol edilmesi. Çalışılan bakterilerin homojenliği ile saf kültürün izolasyonu tamamlanmış sayılabilir.

İzole edilmiş bakterileri tanımlamak için kültürel özellikler, yani sıvı ve katı besin ortamlarında büyümenin doğası incelenir. Örneğin, şeker suyundaki streptokoklar, kanlı agar - küçük, nokta nokta koloniler üzerinde bir dip ve parietal tortu oluşturur; cholera vibrio alkali pepton suyun yüzeyinde bir film ve alkali agar üzerinde şeffaf koloniler oluşturur; besleyici agar üzerindeki veba basili, yoğun bir merkez ve ince dalgalı kenarlara sahip "dantel mendiller" şeklinde ve sıvı bir besin ortamında - yüzeyde bir film ve daha sonra ondan "sarkıt" şeklinde uzanan filamentler şeklinde koloniler oluşturur. ".

Anaerobik bakterilerin saf kültürlerinin yetiştirilmesi ve izolasyonu

Anaerobların yetiştirilmesi için ortamın oksidasyon-redüksiyon potansiyelini azaltmak, oksijeni fiziksel, kimyasal veya biyolojik yöntemlerle uzaklaştırarak anaerobiyoz oluşturmak gerekir.

Fiziksel yöntemler şunları içerir:

1) aşılı kapların yerleştirildiği ana-rostattan bir pompa vasıtasıyla havanın mekanik olarak çıkarılması. Aynı zamanda, havayı kayıtsız bir gazla değiştirebilirsiniz: nitrojen, hidrojen, karbon dioksit.

2) indirgeyici maddeler içeren bir ortamda yetiştirme. Kitta-Tarozzi Çarşamba, karaciğer veya et parçaları içeren bir şeker suyudur. Glikoz ve organ parçaları indirgeme yeteneğine sahiptir. Ortam, hava oksijeninin erişimini engellemek için bir vazelin yağı tabakası ile üstüne dökülür.

3) En basit, ancak daha az güvenilir yöntem, uzun bir şeker agar sütununda derin büyütmektir.

Kimyasal yöntemler, anaerob mahsulleri olan tabakların, aralarında reaksiyonun oksijen emilimi ile devam ettiği, örneğin pirogallol ve alkali gibi kimyasalların yerleştirildiği, hava geçirmez şekilde kapatılmış bir kurutucuya yerleştirilmesi gerçeğinden oluşur.

Biyolojik yöntem, aşılamadan sonra hava geçirmez şekilde kapatılmış Petri kaplarında katı besin ortamında anaerob ve aerobların eşzamanlı olarak yetiştirilmesine dayanır. Başlangıçta oksijen büyüyen aeroblar tarafından emilir ve daha sonra anaerobların büyümesi başlar.

Saf bir anaerob kültürünün izolasyonu, Kitta-Tarozzi ortamına aşılama yoluyla anaerobik bakterilerin birikmesiyle başlar. Gelecekte, izole koloniler iki yoldan biriyle elde edilir:

1) Malzeme, cam tüplerde erimiş ılık şeker agar ile karıştırılarak aşılanır. Agar katılaştıktan sonra, tüp kesilerek çıkarılan ve Kitt-Tarozzi besiyerinde (Weinberg'in yöntemi) alt kültürlenen izole koloniler derinliklerinde büyür;

2) materyalin aşılanması, bir besleyici ortam ile plakalar üzerinde gerçekleştirilir ve bir anaerostat içinde inkübe edilir. Bir plaka üzerinde büyütülen izole koloniler, Kitt-Tarozzi ortamı üzerinde alt kültürlenir (Zeissler yöntemi).